頂空氣相色譜法測(cè)定銀翹解毒合劑中3種成分

白鋼鋼， 張 莉， 陳驍鵬， 仇雅靜

（1.泰州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇泰州225300；2.江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，江蘇南京210008）

銀翹解毒合劑為辛涼解表的臨床常用中成藥，對(duì)扁桃體炎、上呼吸道感染具有較好療效［1-2］，由9味藥組成，君藥連翹、金銀花，臣藥薄荷、牛蒡子、荊芥、淡豆豉，而淡竹葉、桔梗、甘草則為佐使之藥［3-4］，雖然該制劑具有較廣泛的臨床適用范圍，但其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)存在不足，尤其是對(duì)薄荷和荊芥的要求較低［1］。

研究表明，薄荷中主要揮發(fā)性成分為薄荷腦［5-7］，含有量較高，而荊芥中該成分僅微量甚至檢測(cè)不出，故可將其作為專(zhuān)屬性成分；荊芥中主要揮發(fā)性成分為薄荷酮、胡薄荷酮［8-10］，其中后者為2015年版 《中國(guó)藥典》［11］含有量測(cè)定指標(biāo)；霍麗霞等［12］用乙酸乙酯萃取銀翹解毒合劑后，直接進(jìn)樣測(cè)定其中薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮含有量，但該方法操作復(fù)雜，供試品溶液中組分多，分離難度大，而且易污染色譜柱。本實(shí)驗(yàn)建立頂空氣相色譜法測(cè)定銀翹解毒合劑中薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮含有量，簡(jiǎn)化了提取過(guò)程，可降低干擾成分影響和色譜柱污染，有助于完善現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)薄荷、荊芥檢測(cè)項(xiàng)目的不足。

1 材料

1.1 儀器 GC-2010Plus氣相色譜儀，配置HS-20頂空進(jìn)樣器、FID氫火焰離子化檢測(cè)器 （日本島津公司）；CPA224S電子天平 （德國(guó)Sartorious公司）；UMX5電子天平 （瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 試藥 薄荷腦 （批號(hào) 110728-200506，含有量99.8%）、薄荷酮 （批號(hào)111705-201105，含有量99.8%）、胡薄荷酮 （批號(hào)111706-201606，含有量99.8%）對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。銀翹解毒合劑共23批，購(gòu)自寶雞必康嘉隆制藥有限公司、陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠、通化金匯藥業(yè)有限公司、廣東萬(wàn)年青制藥有限公司、北京同仁堂有限公司、江西遠(yuǎn)東藥業(yè)有限公司。乙酸乙酯、甲醇均為分析純；水為超純水。

2 方法

2.1 色譜條件 Agilent HP-5毛細(xì)管柱 （30 m×0.25 mm，0.25 μm）；初始柱溫50℃，保持1 min，以15℃／min速率升至70℃，保持10 min，以2℃／min速率升至80℃，保持10 min，以8℃／min速率升至150℃，保持2 min，以10℃／min速率升至240℃；FID檢測(cè)器溫度250℃；分流比20∶1；頂空進(jìn)樣恒溫箱90℃下平衡40 min，同時(shí)輕微振蕩；樣品流路溫度100℃；傳輸線溫度110℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮對(duì)照品適量，加甲醇分別制成5、2、1 mg／mL貯備液，再加水分別稀釋成0.9、0.25、0.1 mg／mL，即得。

2.2.2 供試品溶液 精密量取合劑5 mL，置于20 mL頂空瓶中，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 參照劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，制成缺薄荷、荊芥的陰性樣品，按 “2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 取供試品 （樣品17）、對(duì)照品、陰性樣品溶液各5 mL，置于20 mL頂空瓶中，在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖可知，供試品溶液色譜圖中存在與對(duì)照品相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性無(wú)干擾，方法專(zhuān)屬性良好。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置于20 mL頂空瓶中，在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X），峰面積積分值為縱坐標(biāo) （Y）進(jìn)行回歸，以S／N為10、3時(shí)對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度分別計(jì)算定量限、檢測(cè)限，結(jié)果見(jiàn)表1，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 各成分線性關(guān)系

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置于20 mL頂空瓶中，平行6份，在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得薄荷腦、薄荷酮、胡薄荷酮峰面積RSD分別為0.46%、1.00%、1.13%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取合劑適量，按 “2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液， 于 0、2、4、6、8、12、16、26 h在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得薄荷腦、薄荷酮、胡薄荷酮峰面積RSD分別為0.60%、1.02%、0.93%，表明溶液在26 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取合劑適量，按 “2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮含有量RSD分別為1.86%、1.66%、1.60%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取合劑2.5 mL，精密加入對(duì)照品溶液2.5 mL，搖勻，平行6份，在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3.7 樣品含有量測(cè)定 23批合劑按 “2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液 （部分合劑測(cè)定結(jié)果高于線性范圍，純水稀釋后再測(cè)定），在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含有量，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

3.1 提取方法比較 本實(shí)驗(yàn)比較了乙酸乙酯萃取后進(jìn)樣、頂空直接進(jìn)樣測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)兩者無(wú)顯著差異，但后者不需復(fù)雜的前處理，可減少檢驗(yàn)人員工作量及實(shí)驗(yàn)中帶來(lái)的人為操作誤差，而且不使用有機(jī)溶劑，為環(huán)境友好型的檢測(cè)方法。

表2 各成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n＝6）

3.2 頂空條件優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)考察了溫度70、80、90℃對(duì)提取率的影響，發(fā)現(xiàn)90℃下各成分峰面積最高。再考察了提取20、40、60 min對(duì)提取率的影響，發(fā)現(xiàn)提取40 min時(shí)雖然各成分峰面積小于60 min時(shí)，但差異不顯著，而且更快速。因此，選擇樣品加熱溫度為90℃，提取時(shí)間為40 min。

表3 各成分含有量測(cè)定結(jié)果 （mg／mL）

3.3 含有量分析 表3顯示，3批銀翹解毒合劑未檢測(cè)出薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮；1批未檢測(cè)出薄荷酮、胡薄荷酮；2批未檢測(cè)出胡薄荷酮，雖檢出薄荷酮、薄荷腦，但前者含有量極低，在線性范圍以下；1批未檢測(cè)出胡薄荷酮，由此可知，生產(chǎn)企業(yè)可能存在揮發(fā)油提取工藝不規(guī)范、未投料或投料劣質(zhì)藥材的情況，而且有一些使用葉片量極少，檢測(cè)不到揮發(fā)性成分的薄荷。同時(shí)，薄荷酮含有量范圍 0.000 74～0.11 mg／mL，相差 148倍；薄荷腦0.001～0.56 mg／mL， 相差 560倍； 胡薄荷酮 0.000 8～0.021 mg／mL，相差26倍，均存在較大差異，也印證了上述現(xiàn)象。

另外，樣品19、21、22中未檢出胡薄荷酮，未檢出或檢出微量薄荷酮，但檢出大量薄荷腦，而且其GC色譜圖中僅發(fā)現(xiàn)溶劑峰和薄荷腦峰。銀翹解毒合劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中采用TLC鑒別，并以薄荷腦為對(duì)照品，用于確定制劑中是否添加薄荷，但未加入薄荷或使用劣質(zhì)藥材后加入薄荷腦時(shí)，也會(huì)符合上述標(biāo)準(zhǔn)，故GC法更有利于鑒別該制劑中的薄荷。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立頂空氣相色譜法測(cè)定銀翹解毒合劑中3種成分的含有量，該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，可為控制該制劑中揮發(fā)性成分、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。