北方地區(qū)針葉樹外生菌根真菌樣本的采集與保存

肖巍

(遼寧省沙地治理與利用研究所，遼寧 阜新 123000)

菌根是土壤中高等植物根系與菌根真菌菌絲的結(jié)合，是一種常見的植物共生現(xiàn)象。在長(zhǎng)期的生存過(guò)程中，這不僅有利于菌根真菌的生存，也有利于提高植物在惡劣環(huán)境的抵抗力[1]。菌根能擴(kuò)大宿主植物的根系的吸收面積，增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生生長(zhǎng)素，促進(jìn)寄主植物的生長(zhǎng)，改善植物的根際環(huán)境，提高的抗病性[2]。正是需要深入研究的重要基礎(chǔ)性工作，通過(guò)開展樣品采集和保存，收集相關(guān)的數(shù)據(jù)，為相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

1 外生菌根的調(diào)查

1.1 一般調(diào)查

在一定區(qū)域內(nèi)，當(dāng)原始資料相對(duì)較少且對(duì)菌根狀況不了解的情況下，通常先進(jìn)行一般調(diào)查。調(diào)查時(shí)間一般選在雨季初期，6-8月是林地內(nèi)菌根真菌子實(shí)體大量出現(xiàn)的季節(jié)。調(diào)查內(nèi)容主要包括菌根菌種類、多度以及樹種感染菌根菌的情況等。對(duì)生境情況也要做詳盡的記錄，如植被情況、立地條件、宿主植物等。一般調(diào)查法隨機(jī)性較強(qiáng)，調(diào)查范圍大且具有一定的代表性。

1.2 重點(diǎn)調(diào)查

在一般調(diào)查基礎(chǔ)上，可以針對(duì)具體問(wèn)題進(jìn)行重點(diǎn)調(diào)查。如菌根真菌在生態(tài)系統(tǒng)演替中的變化規(guī)律、不同季節(jié)菌根真菌的侵染情況等。

1.2.1 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)地 重點(diǎn)調(diào)查需要根據(jù)具體情況設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)地。如果面積較小，可進(jìn)行全面踏查。如果面積較大，可設(shè)置若干個(gè)樣方。一般情況下，標(biāo)準(zhǔn)地面積應(yīng)占調(diào)查總面積1%。每個(gè)樣地需要設(shè)立標(biāo)志，編排序號(hào)。

1.2.2 定期進(jìn)行調(diào)查 重點(diǎn)調(diào)查需要定期進(jìn)行。子實(shí)體大多數(shù)在雨季生長(zhǎng)，秋季降雨減少后停止生長(zhǎng)。調(diào)查時(shí)間一般在春季開始觀測(cè)，秋季停止觀測(cè)，期間每隔一定時(shí)間調(diào)查或觀測(cè)取樣一次。非雨季可以在15～20 d觀測(cè)一次，由于雨季內(nèi)種類變化較大，可以適當(dāng)縮短，如5～10 d觀測(cè)一次。

1.2.3 調(diào)查內(nèi)容 一般應(yīng)包括真菌種類、生態(tài)習(xí)性、生長(zhǎng)情況、多度等。與其相關(guān)的地形地貌、土壤環(huán)境、植被情況、林分組成等也應(yīng)一一記錄，并做好現(xiàn)場(chǎng)影像資料的記錄。如真菌種類調(diào)查，則應(yīng)重點(diǎn)記錄真菌種類，如季節(jié)性變化觀測(cè)則重點(diǎn)記錄種類變化及生長(zhǎng)情況。

2 菌根標(biāo)本的采集

標(biāo)本是研究工作最基本、最重要的實(shí)物資料之一，標(biāo)本的質(zhì)量對(duì)研究工作有著重要意義。

2.1 菌根標(biāo)本的采集

菌根樣品的采集可用鐵鍬或土壤刀挖取，也可根據(jù)具體情況用土鉆或者其他特制取樣器取樣。取出的根系會(huì)攜帶大量泥土，可用小刀將表面泥土剝?nèi)?，需要小心處理，切忌碰掉菌根，用水浸泡或者漂洗。清洗好的菌根?biāo)本可立即進(jìn)行觀察記錄，也可裝入塑料袋帶回室內(nèi)觀測(cè)。塑料袋內(nèi)要有松軟保濕的填充物或者充氣保存，不至于擠壓損壞和萎蔫。

2.2 菌根菌標(biāo)本的采集

菌根真菌子實(shí)體通常具有較高的含水量，子實(shí)體組織易于受到破壞[3]。而子實(shí)體的結(jié)構(gòu)等特征又是重要的分類依據(jù)，所以要求采集完整、有代表性的子實(shí)體。對(duì)于帶有菌索的菌類，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行追蹤檢查。對(duì)采集到的標(biāo)本要及時(shí)處理，以防標(biāo)本腐爛或蟲蛀。首先觀察和記錄，并采取現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行影像記錄，以準(zhǔn)確記錄其形態(tài)特征。仔細(xì)去除樣品表面的泥沙后，表面附吸水紙，并把它放入紙袋，不要水洗。若后續(xù)進(jìn)行分離培養(yǎng)，采集時(shí)要酌情增加樣本數(shù)量。也可攜帶裝好培養(yǎng)基的試管，現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行分離保存。

3 菌根標(biāo)本的保存

菌根標(biāo)本可在恒溫50～60 ℃條件下干燥12～24 h后，取出烘干標(biāo)本，用塑料薄膜壓制，或按蠟葉標(biāo)本制作法用臺(tái)紙保存。要注意保護(hù)根部的菌根，以免脫落。子實(shí)體標(biāo)本需要用快速烘干法，以盡可能保持原狀。

對(duì)于微觀結(jié)構(gòu)觀測(cè)，可以制作切片標(biāo)本。對(duì)于菌根真菌有進(jìn)一步生理研究，可以分離子實(shí)體到相應(yīng)培養(yǎng)基中，分離提純以保存菌種，待下一步研究使用。

4 小結(jié)與討論

4.1 調(diào)查工作很重要，可以了解掌握菌根真菌資源以及對(duì)生境的敏感變化情況；重視采集和保存工作，用好方式方法，做好工具選擇、溫濕度控制等每個(gè)細(xì)節(jié)，以確保菌根真菌標(biāo)本的質(zhì)量，是菌根研究的基本技能。

4.2 隨著對(duì)菌根研究的深入，菌根技術(shù)在林業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用越來(lái)越受到人們的高度重視，如引種育苗、逆境造林等。在我國(guó)北方部分地區(qū)，生態(tài)脆弱，氣候干旱，土壤貧瘠，而油松、紅松、落葉松、樟子松等松科樹種是我國(guó)北方的主要針葉造林樹種。就立地條件而言，不同的立地條件適合于一定種類菌種的生長(zhǎng)；就樹種而言，不同的樹種適合使用不同的菌種。所以，需要進(jìn)一步加強(qiáng)菌根技術(shù)研究以及在林業(yè)中的應(yīng)用推廣，進(jìn)而更加有效地解決生產(chǎn)實(shí)際中的問(wèn)題。