女貞不同生長部位所含抗氧化活性成分研究

田仁君，江洪波

(四川中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，四川 綿陽 621000)

人體在新陳代謝過程中會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧自由基，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)自由基的不斷氧化是機(jī)體衰老的重要原因，自由基學(xué)說認(rèn)為抗氧化劑可以將自由基維持在適當(dāng)水平，從而抗衰老。化學(xué)合成抗氧化劑雖然抗氧化能力比較強(qiáng)，但毒性也很大，甚至可以致畸、致癌[1]。因此人們?cè)絹碓节呄蛴谠谥胁菟幹袑ふ腋咝?、毒副作用小的天然抗氧化劑?/p>

女貞子為木犀科女貞屬植物女貞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果實(shí)。女貞子性味甘、苦、平、歸肝、腎經(jīng)，補(bǔ)益藥，主要功效為補(bǔ)益肝腎、清虛熱、強(qiáng)腰膝、明耳目、烏須發(fā)。研究表明女貞子醇提物對(duì)DPPH自由基和羥基自由基顯示出較強(qiáng)的清除能力，具有一定的抗脂質(zhì)過氧化能力和還原能力，其總體抗氧化能力較強(qiáng)[2]。孫燕院士及其團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪、女貞子是頗有前景的抗衰老藥物。本研究對(duì)女貞植物的不同部位抗氧化活性進(jìn)行了研究，為女貞植物的抗氧化保健產(chǎn)品開發(fā)提供了依據(jù)。

1 儀器、試劑與材料

儀器：TU-1900型雙光束紫外分光光度計(jì)( 北京普析有限責(zé)任公司)；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)； SENCOR-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順生物科技有限公司)；IJ-500A高速粉碎機(jī)(濟(jì)南億健醫(yī)療設(shè)備有限公司)；BT-244-S型電子天平(德國Sartorius)。

試劑：DPPH(美國 Sigma公司)；化學(xué)試劑(提取化學(xué)純，分析用分析純)；材料：實(shí)驗(yàn)所用的材料采自同一棵樹(產(chǎn)地四川綿陽)，春天開花時(shí)期從同一區(qū)域采集女貞花朵和不含花的嫩枝條，冬天12月份采集女貞子果實(shí)、老枝條和樹葉，枝條切小段，采后沖洗晾干置鼓風(fēng)干燥箱中40℃烘干，分裝存于冰箱備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 提取物的制備

將女貞子適當(dāng)粉碎，稱取適量加入10倍量95%乙醇提取，溫浸 24h后再超聲提取3次，每次 1h，如此重復(fù) 3次，過濾合并濾液，將所得濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，得到女貞子提取物L(fēng)[3-4]。利用同樣的方法得到女貞花提取物H，嫩枝條提取物I，老枝條提取物J，女貞葉提取物K。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 女貞各部位的提取率

通過對(duì)女貞各部位樣品的乙醇提取，女貞花乙醇提取物收率最高為34.29%，女貞枝條、女貞葉和女貞子乙醇提取收率都大約在20%左右。

2.2 紫外測(cè)定波長的確定

用乙醇將DPPH配制成濃度為 2×10-4mol·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液于棕色瓶中， 5種提取物分別配制成 1mg·mL-1的待測(cè)溶液，將上述6種溶液進(jìn)行全波長(20～1 000nm)紫外可見光掃描。結(jié)果見圖1至圖6。

圖1 女貞花乙醇提取物紫外圖譜

圖2 女貞嫩枝條乙醇提取物紫外圖譜

圖3 女貞老枝條乙醇提取物紫外圖譜

圖4 女貞老樹葉乙醇提取物紫外圖譜

圖5 女貞子乙醇提取物紫外圖譜

圖6 DPPH紫外圖譜

從圖1-圖5可以看出DPPH的標(biāo)準(zhǔn)溶液在517nm左右有一吸收峰，而5種待測(cè)溶液在517nm幾乎沒有吸收，故可以確定分光光度計(jì)測(cè)定吸光值時(shí)的分析波長為517nm[5]。圖1和圖2的紫外圖譜比較相似，說明女貞花和嫩枝條這兩個(gè)部位含有很多相同的活性成分。從抗氧化活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)女貞花和嫩枝條提取物對(duì)DPPH清除率都高達(dá)90%左右，可以推測(cè)兩者中抗氧化活性成分主要來源于它們相同的活性成分。為下一步研究女貞花和嫩枝條中抗氧化活性成分的研究提供了基礎(chǔ)。

2.3 體外抗氧化測(cè)定方法

二苯代苦味?；杂苫?DPPH·)是大分子穩(wěn)定的自由基，DPPH法是近幾年來國內(nèi)外普遍用來研究抗氧化劑的一種方法,其乙醇溶液呈紫色，在 517nm處有強(qiáng)吸收，當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于與其單電子配對(duì)而使其吸收逐漸消失，特征紫色逐漸褪去，褪色程度反映了抗氧化劑對(duì)自由基的清除能力。因此，可通過分光光度計(jì)測(cè)定吸光值的變化來評(píng)價(jià)物質(zhì)的抗氧化能力。

取6支10mL比色管，分別依次加入4mL(2×10-4mol·L-1)的DPPH溶液，搖勻。再依次加入1mL濃度為1mg·mL-1的5種提取物H、I、J、K、L，用乙醇稀釋至 10.00mL刻度，充分混均，配制成濃度為0.1mg·mL-1待測(cè)溶液，30min后用95%乙醇作參照在 517nm處測(cè)定其吸光度。按照以下公式計(jì)算待測(cè)樣品對(duì)DPPH自由基的清除能力：DPPH·自由基清除率(%)= (A對(duì)照-A樣品)/A對(duì)照×100%。式中，A樣品為加入待測(cè)樣品反應(yīng)后DPPH溶液的吸光度；A對(duì)照為不加待測(cè)樣品DPPH溶液的吸光度[5，6]。平行測(cè)試3次，取平均值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2和圖7。

表2 女貞5種提取物抗氧化活性統(tǒng)計(jì)

上面圖表可以看出女貞各部位都具有抗氧化活性，圖7中柱形圖顯示女貞花和嫩枝條抗氧化活性都很高。表2顯示女貞嫩枝條提取物的抗氧化活性最強(qiáng)，對(duì)DPPH清除率高達(dá)90.11%；其次是女貞花提取物，對(duì)DPPH清除率達(dá)89.64%；女貞子提取物抗氧化活性比較適中，對(duì)DPPH清除率為46.68%；女貞葉提取物對(duì)DPPH清除率為30.69%；女貞老枝條抗氧化活性最低，對(duì)DPPH清除率只有3.92%。

圖7 女貞5種提取物DPPH清除率比較

4 結(jié)語

試驗(yàn)結(jié)果表明女貞花和嫩枝條抗氧化活性最強(qiáng)，隨著時(shí)間推移，嫩枝條和花里面的抗氧化活性物質(zhì)可能轉(zhuǎn)移到了女貞子果實(shí)和樹葉中，而老枝條抗氧化活性幾乎沒有了。是否女貞樹干和樹根中也存在大量的抗氧化活性物質(zhì)，鑒于樹干和樹根關(guān)系到樹的存活，取材可能導(dǎo)致樹的死亡，所以本實(shí)驗(yàn)并沒取材。女貞本是常綠喬木，本實(shí)驗(yàn)只摘取了女貞子成熟后的樹葉，而其他時(shí)段的樹葉擔(dān)心會(huì)影響女貞子的質(zhì)量并未取材，它們是否具有更大的價(jià)值，有待進(jìn)一研究。

從以上結(jié)果我們可以看出女貞花提取率最高，抗氧化活性也非常高，開發(fā)成抗氧化物質(zhì)非常有潛力，但是摘掉花會(huì)大大影響女貞子果實(shí)的產(chǎn)量；嫩枝條抗氧化活性最高，提取率也適中，但是摘掉嫩枝條后就沒法結(jié)出女貞子果實(shí)，所以嫩枝條作為開發(fā)抗氧化物質(zhì)的主要原材料來源也是不可取的；而女貞子作為一種中藥，開發(fā)抗氧化物質(zhì)成本高、浪費(fèi)資源；女貞葉的提取率不是最高，抗氧化能力也不是最強(qiáng)，但是女貞葉不管從數(shù)量上和質(zhì)量上來源都很豐富，在采摘完女貞子后大量的樹葉一般都是廢棄，如果將女貞樹葉作為開發(fā)抗氧化物質(zhì)的主要來源更為合適。