狼瘡抗凝物檢測(cè)的性能驗(yàn)證及大連地區(qū)參考區(qū)間建立

靳 巖，袁曉陽(yáng)

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116011)

狼瘡抗凝物(LA)是抗磷脂抗體家族成員之一，是病理性循環(huán)抗凝物[1]。在疑似抗磷脂綜合征或不明原因活化部分凝血活酶時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)可檢測(cè)LA，近幾年極受臨床醫(yī)生關(guān)注。稀釋蝰蛇毒時(shí)間(DRVVT)法是LA最佳檢測(cè)方法[2]，但此方法的性能驗(yàn)證和參考區(qū)間建立國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道，本文對(duì)DRVVT法檢測(cè)LA做性能評(píng)估，并建立大連地區(qū)參考區(qū)間，為開展或計(jì)劃開展此項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 本次實(shí)驗(yàn)采用的樣本均為2018年6-8月在大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢的體檢健康者和就診的科室患者。1∶9枸櫞酸鈉抗凝(3.2%) 靜脈血樣本3 000 r/min離心10 min，2次，樣本采集后2 h內(nèi)完成上機(jī)檢測(cè)。

1.2儀器與試劑 用于LA檢測(cè)的CS-5100全自動(dòng)血凝儀由日本希森美康公司提供，DRVVT篩選、確證試劑及質(zhì)控品均為原廠配套試劑，由西門子公司提供。

1.3性能驗(yàn)證

1.3.1精密度 日內(nèi)精密度：根據(jù)ISO15189評(píng)審文件制定過(guò)程中參考的其中一項(xiàng)文件，即美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)EP15文件[3],要求取健康人混合樣本和高值混合樣本，每個(gè)樣本連續(xù)測(cè)20次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差(SD) 和變異系數(shù)(CV%) ,與文件要求比較。日間精密度正常水平： 取同一批號(hào)正常水平質(zhì)控品，用同一批號(hào)試劑每天測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定20 d，計(jì)算SD和CV%;異常水平：取異?；旌蠘颖痉盅bEP管，-40 ℃冰凍保存，使用前37 ℃速溶，用同一批號(hào)試劑每天測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定20 d，計(jì)算SD和CV%，與文件要求比較。

1.3.2準(zhǔn)確性 取正常水平質(zhì)控品檢測(cè)LA1、LA2并計(jì)算比值，連續(xù)測(cè)定3次，計(jì)算均值，與說(shuō)明書給定靶值比較，偏差=(測(cè)定均值-質(zhì)控品定值)/質(zhì)控品定值×% ，與文件要求比較。

1.3.3攜帶污染率 異常樣本對(duì)正常樣本污染:取LA比值正常水平樣本(N)放樣本架1號(hào)和3號(hào)位置，異常水平樣本(A)放2號(hào)位置。每個(gè)樣本分別測(cè)3次，結(jié)果為N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6，攜帶污染率K1=[N4-Mean(N1,N2,N3)]/Mean(N1,N2,N3)。正常樣本對(duì)異常樣本污染:取LA比值異常水平樣本(A)放在樣本架1號(hào)和3號(hào)位置，正常水平樣本(N)放在2號(hào)位置，每個(gè)樣本分別測(cè)3次，結(jié)果為A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6,攜帶污染率K2=[A4-Mean(A1,A2,A3)]/Mean(A1,A2,A3),K≤10%為合格。

1.3.4試劑更換批號(hào)比對(duì) 取LA比值正常樣本3例，異常樣本2例，分別用新舊兩個(gè)批號(hào)檢測(cè)LA比值，計(jì)算偏差,偏差=(新批號(hào)測(cè)定值-舊批號(hào)測(cè)定值)/舊批號(hào)測(cè)定值×% ，與文件要求比較。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件和Excel統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1日內(nèi)及日間精密度CV%遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于試劑說(shuō)明書給定標(biāo)準(zhǔn)(正常值樣本CV%≤5.00%，異常樣本CV%≤10.00%)，也在實(shí)驗(yàn)室ISO15189文件允許范圍內(nèi)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2準(zhǔn)確性驗(yàn)證 準(zhǔn)確性驗(yàn)證用定值質(zhì)控品驗(yàn)證，與1/2CIA′88室間質(zhì)評(píng)要求比較合格。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3攜帶污染率 攜帶污染率驗(yàn)證合格。遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)驗(yàn)室ISO15189文件要求。結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 DRVVT精密度驗(yàn)證表

表2 DRVVT準(zhǔn)確性驗(yàn)證表(正常水平)

表3 DRVVT攜帶污染率驗(yàn)證表

2.4試劑更換批號(hào)比對(duì) 5個(gè)樣本偏差均小于1/2CIA′88室間質(zhì)評(píng)要求，符合ISO15189文件標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 DRVVT試劑更換批號(hào)比對(duì)驗(yàn)證表(比值)

2.5參考區(qū)間建立 本實(shí)驗(yàn)參考區(qū)間與試劑說(shuō)明書有差異，LA比值臨界值(1.22)高于試劑說(shuō)明書(1.20)，充分證明了自建參考區(qū)間的重要性。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 DRVVT參考區(qū)間建立

3 討 論

LA持續(xù)存在常見(jiàn)于抗磷脂抗體綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病，與患者動(dòng)靜脈栓塞、病態(tài)妊娠風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[5]。有報(bào)道在妊娠晚期聯(lián)合應(yīng)用LA和其他凝血指標(biāo)，可進(jìn)一步提高對(duì)血栓形成事件風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的準(zhǔn)確率[6]，且自身免疫性疾病LA陽(yáng)性患者血栓形成概率明顯高于陰性組[7]，檢測(cè)LA不僅可以預(yù)防血栓發(fā)生，還可以預(yù)測(cè)治療后血栓好轉(zhuǎn)情況[8]，對(duì)臨床各科的疾病診斷有很大意義。最新指南指出，一個(gè)LA檢測(cè)完整實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目至少包括篩查和確證試驗(yàn)，結(jié)果以LA1與LA2比值方式報(bào)告。西門子公司提供兩個(gè)完整的檢測(cè)項(xiàng)目，LA1 篩選試驗(yàn)，LA2確證試驗(yàn)，滿足國(guó)際血栓與止血學(xué)會(huì)委員會(huì)發(fā)布的針對(duì) LA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。自2003年《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和管理》要求(ISO15189：2003)發(fā)布以來(lái)，國(guó)內(nèi)有100多家醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室通過(guò)認(rèn)可[9]，本實(shí)驗(yàn)室在2013年就通過(guò)了評(píng)審。按ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可：2007要求[10]，實(shí)驗(yàn)室新開展項(xiàng)目要進(jìn)行性能驗(yàn)證，目前血栓與止血特殊項(xiàng)目性能驗(yàn)證沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)按凝血普通項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)來(lái)驗(yàn)證,日內(nèi)精密度、正常和異常樣本CV%均≤2.00%，日間精密度、正常水平為西門子廠家質(zhì)控品，CV%≤5.00%，由于該廠家沒(méi)有異常水平質(zhì)控品，異常水平日間精密度采用異常混合樣本代替，CV%≤5.00%。準(zhǔn)確性與定值質(zhì)控值相比偏差≤7.50%。攜帶污染率驗(yàn)證，LA比值正常樣本對(duì)異常樣本污染為0，異常樣本對(duì)正常樣本污染僅為-0.92，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于ISO15189文件規(guī)定≤10.00%標(biāo)準(zhǔn)，試劑更換批號(hào)比對(duì)偏差均≤7.50% 。所做性能驗(yàn)證都能符合ISO15189要求，說(shuō)明DRVVT試驗(yàn)可以適用于臨床，但因?yàn)镈RVVT試驗(yàn)原衛(wèi)生部沒(méi)有開展室間質(zhì)評(píng)，沒(méi)有做正確度驗(yàn)證，有待進(jìn)一步完善驗(yàn)證。

4 結(jié) 論

使用DRVVT檢測(cè)LA有良好性能，可以用此方法檢測(cè)狼瘡抗凝物的存在，但說(shuō)明書給定的參考區(qū)間有待于驗(yàn)證，必要時(shí)建立實(shí)驗(yàn)室自己的參考區(qū)間，使檢驗(yàn)結(jié)果更精準(zhǔn)，更好地為患者服務(wù)。