波形蛋白在卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達及臨床意義▲

張 勇 孫廣男 康 晶 覃雅倩 銀 鐸

(中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院第二微創(chuàng)婦科，遼寧省沈陽市 110004，電子郵箱：yonger20120817@126.com)

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，也是死亡率最高的婦科惡性腫瘤，70%～80%的病例在診斷時已為晚期，患者的5年生存率僅為30%～40%[1]。卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌(ovarian endometrioid adenocarcinoma，OEA)發(fā)病率較低，僅占卵巢全部腫瘤的2%，占上皮性卵巢癌的16%～25%[2]。OEA組織病理學特點和子宮內(nèi)膜癌相似，臨床表現(xiàn)缺乏特異性，患者在確診時往往已發(fā)展到中晚期，且在治療后期難以突破對化療藥產(chǎn)生耐藥性的“瓶頸”，因此患者的臨床預后較差，死亡率較高。波形蛋白是一種Ⅲ型中間絲蛋白，目前已被證實在多種腫瘤組織中異常高表達，與腫瘤患者的臨床病理特征和預后密切相關，其作為一種生物學標志物已被廣泛用于多種腫瘤的臨床診斷及預后的評估[3-6]。但目前關于波形蛋白在OEA組織中表達的研究鮮有報道。本研究運用免疫組化法分別檢測正常卵巢、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢交界性子宮內(nèi)膜樣腫瘤和OEA組織中波形蛋白的表達水平，旨在探討波形蛋白在OEA的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，及其與OEA患者臨床病理特征之間的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2011年1月至2015年12月在我院診治的110例婦科患者的卵巢腫瘤或正常卵巢組織，其中OEA 40例、卵巢交界性子宮內(nèi)膜樣腫瘤10例、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥30例、因?qū)m頸癌而手術切除卵巢且術后病理證實為正常的卵巢組織30例。所有病例均為初發(fā)且術前未經(jīng)任何治療，所收集組織均為手術切除后經(jīng)本院病理科確診的石蠟標本。OEA患者年齡23～78歲，中位年齡49歲，年齡≤50歲18例、>50歲22例；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期Ⅰ期15例，Ⅱ期9例，Ⅲ期15例，Ⅳ期1例；分化程度：低分化16例，中分化17例，高分化7例；伴淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移23例，不伴淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移17例。

1.2 檢測試劑與方法 鼠抗人波形蛋白單克隆抗體(批號：17A10709)、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(streptavidin-perosidase，SP)法超敏試劑盒(批號：K175622G)和二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒(批號：K176614A)均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。將收集的標本用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。將石蠟組織塊切成4 μm厚切片，按SP法和抗體試劑盒說明書進行實驗操作。切片常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水后用磷酸緩沖鹽溶液清洗，孵育后滴加一抗(鼠抗人波形蛋白單克隆抗體，1∶100)，4℃過夜。滴加100 μl山羊抗小鼠波形蛋白二抗(1∶200；北京中杉金橋生物技術有限公司，批號：K185208D)，37℃孵育1 h。以磷酸緩沖鹽溶液代替一抗作為空白對照。應用二氨基聯(lián)苯胺溶液顯色，蒸餾水沖洗，蘇木素復染、樹脂封片。

1.3 評分標準[7]在400倍顯微鏡下隨機觀察5個視野，以細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為波形蛋白陽性細胞，按陽性細胞比例進行評分，無陽性細胞為0分，<10%為1分，10%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分；按著色強度進行評分，未著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。最終采用半定量計分法判定結(jié)果，即將陽性細胞比例和著色強度的評分數(shù)相乘計算綜合得分，以<3分為陰性表達，≥3分為陽性表達。以上免疫組化染色結(jié)果由兩位高年資病理醫(yī)生通過獨立雙盲法讀片評定。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示，比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率法；采用趨勢χ2檢驗分析波形蛋白陽性表達率與疾病發(fā)展程度的關系。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 波形蛋白在4種卵巢組織中的表達情況 波形蛋白主要表達于OEA和卵巢交界性子宮內(nèi)膜樣腫瘤組織的細胞質(zhì)中(見圖1及圖2)。在正常卵巢組織、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢交界性子宮內(nèi)膜樣腫瘤和OEA組織中，波形蛋白的陽性表達率分別為6.67%(2/30)、43.33%(13/30)、60.00%(6/10)、85.00%(34/40)，呈上升趨勢(χ2=41.799，P<0.001)。

圖1 波形蛋白在OEA組織中的表達(SP法，×400)

圖2 波形蛋白在卵巢交界性子宮內(nèi)膜樣腫瘤組織中的表達(SP法，×400)

2.2 不同臨床病理特征OEA患者癌組織的波形蛋白表達情況 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期者、伴淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移者癌組織的波形蛋白陽性表達率分別高于Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移者(均P<0.05)。不同年齡、分化程度患者癌組織的波形蛋白陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征OEA患者癌組織的波形蛋白表達情況[n(%)]

注：*Fisher確切概率法。

3 討 論

波形蛋白是一種直徑約10 nm的Ⅲ型中間絲蛋白，相對分子質(zhì)量約為57 000，由464個氨基酸殘基構成。作為一種結(jié)構蛋白，波形蛋白在細胞中形成一個由中央向周圍呈放射狀的網(wǎng)狀結(jié)構，將線粒體、核膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器錨定在細胞特定的空間，與微絲、微管共同構建起完整的細胞網(wǎng)絡結(jié)構，對細胞形態(tài)完整性的維持有著重要作用。越來越多的研究表明波形蛋白廣泛分布于人體多種器官組織，其表達水平的異常升高與腫瘤的發(fā)生密切相關，且對疾病的進展有推動作用[8-12]。但其中相關作用機制尚不清楚，目前公認的是波形蛋白能在腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移過程中促進上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的發(fā)生，而EMT是腫瘤發(fā)生進展重要的細胞學基礎，可使原有的上皮細胞發(fā)生形態(tài)學改變并轉(zhuǎn)化成間充質(zhì)細胞，促進腫瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移[13]。因此，波形蛋白也成為臨床上常見的腫瘤生物學標志之一，對患者的臨床治療及預后的評估有著重要的指導意義。

相比于其他腫瘤，波形蛋白在卵巢癌組織中的相關研究起步較晚，且現(xiàn)有的報道多以常見的上皮性卵巢癌(如卵巢漿液性腺癌、黏液性腺癌)為研究對象[14-17]。Li等[14]研究發(fā)現(xiàn)相比于良性卵巢腫瘤和交界性卵巢腫瘤，上皮性卵巢癌組織中波形蛋白表達水平上調(diào)，能夠促進腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，且其高表達影響腫瘤患者的總生存率和無病生存率。周丹丹等[15]的研究也證實，波形蛋白在上皮性卵巢癌組織中呈高表達，且與臨床分期、分化程度和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關，提示波形蛋白還可能與患者的預后情況有關。Kenda等[16]也在卵巢漿液性囊腺癌細胞中發(fā)現(xiàn)波形蛋白表達水平異常升高，并在顯微鏡下觀察到該類細胞逐漸失去原有圓形的細胞形態(tài)，轉(zhuǎn)變成具有“觸手”的間充質(zhì)細胞，并且由腫瘤組織的表面向深部侵襲，提示波形蛋白促進腫瘤細胞發(fā)生EMT可能是上皮性卵巢癌發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的重要作用機制。

OEA是臨床上相對少見的上皮性卵巢癌，因缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，在疾病早期階段難以被發(fā)現(xiàn)，因此OEA患者的臨床治療效果往往不佳，有較高的死亡率。關于OEA的組織學起源，大多數(shù)學說認為其是卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的惡變，Huang等[18]報告42%的OEA患者合并卵巢子宮內(nèi)膜異位癥；任芳等[19]也發(fā)現(xiàn)50%以上的OEA病例由卵巢子宮內(nèi)膜異位病灶發(fā)生惡變而來。但是目前關于OEA的進展過程及機制的研究鮮有報道。本研究結(jié)果顯示，正常卵巢組織、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢交界性子宮內(nèi)膜樣腫瘤和OEA組織中波形蛋白的陽性表達率呈上升趨勢(P<0.05)，其在OEA組織中的陽性表達率高達85.00%，且Ⅲ～Ⅳ期者、伴淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移者癌組織的波形蛋白陽性表達率分別高于Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移者(均P<0.05)，提示波形蛋白在OEA組織中呈高表達，且可能與患者的病情進展、腫瘤轉(zhuǎn)移等有關。由此我們推測波形蛋白的高表達可能參與了OEA的發(fā)生發(fā)展過程，并促進其侵襲和轉(zhuǎn)移，這與其他類型上皮性卵巢癌的相關研究結(jié)論相似。因此，波形蛋白在一定程度上能夠輔助對OEA的臨床診斷，對患者的預后評估也有一定的參考價值。但不同年齡、分化程度患者癌組織的波形蛋白陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，與其他類型上皮性卵巢癌的相關研究結(jié)論不一致，這可能與我們的研究病例數(shù)較少有關。此外，一項研究結(jié)果表明在OEA組織中波形蛋白呈低表達[20]，這與我們的研究結(jié)論相悖，提示波形蛋白在OEA組織中的表達情況還存在爭議，仍需要大樣本進行深入研究。

綜上所述，波形蛋白在OEA組織中呈高表達，可能參與OEA的發(fā)生發(fā)展過程，且與OEA患者的臨床預后密切相關。但波形蛋白能否在臨床上作為一種協(xié)助評估OEA治療效果和預后的新型生物學指標，仍需擴大樣本量進行深入研究。