補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠骨結(jié)構(gòu)和骨代謝作用的研究

陳貝貝 郭魚波 劉海霞 朱如愿 柳辰玥 賈強(qiáng)強(qiáng) 高思華 張東偉

北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院糖尿病研究中心，北京 100029

骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是一種以骨量降低，骨微結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致骨脆性增加，骨折風(fēng)險(xiǎn)增高為特征的骨代謝性疾病[1]。隨著人口老齡化的加速，骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率逐年增高，已成為人類第三大常發(fā)慢性病。最新研究顯示，我國骨質(zhì)疏松癥患病率為13%。估計(jì)到2050年，我國骨質(zhì)疏松癥的患者將達(dá)到2.12億[2]。目前，市場(chǎng)上治療骨質(zhì)疏松的西藥雖能在一定程度上抑制骨量的丟失，緩解腰痛等臨床癥狀，但是大多數(shù)藥物存在不同程度的不良反應(yīng)[3]。中藥以其多靶點(diǎn)、安全性高、不良反應(yīng)少的特點(diǎn)逐漸成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[4]。

中醫(yī)認(rèn)為，骨質(zhì)疏松癥屬于“骨痹、骨痿、骨枯”的范疇，其病因病機(jī)主要在于腎虛與血瘀，臨床治則多以補(bǔ)肝腎和活血化瘀為主[5]。補(bǔ)腎壯骨方是臨床上常用的經(jīng)驗(yàn)方，由丹參、淫羊藿等組成，初步臨床觀察發(fā)現(xiàn)，該方能明顯提高骨質(zhì)疏松患者的骨密度(bone mineral density，BMD)、降低骨折發(fā)生率，但是其詳細(xì)的作用機(jī)理尚未清楚。因此，本研究擬以去卵巢大鼠為研究對(duì)象，觀察補(bǔ)腎壯骨方對(duì)血清學(xué)指標(biāo)、骨密度、骨微結(jié)構(gòu)和病理結(jié)構(gòu)的影響，探討補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠骨結(jié)構(gòu)和骨代謝的作用和可能的作用機(jī)制。

輸水建筑物震損檢查信息包括進(jìn)口段、啟閉設(shè)備、閘門、管道、出口段、電器以及啟閉機(jī)房等。壩體內(nèi)穿壩輸水建筑物與壩體接觸安全性是震后檢查的重要內(nèi)容，檢查其斷裂、滲漏、接觸沖刷及滲水渾濁程度等情況。安全泄洪洞震損檢查包括進(jìn)口段、閘門、洞室以及出口段等部位。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1藥物和試劑。補(bǔ)腎壯骨方由丹參、淫羊藿等藥物組成，所有飲片均購自北京同仁堂，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥博物館馬澤新教授鑒定為正品。按臨床常用方法，制成水提液，濃縮成終濃度為1.4 g(含藥量)/mL， 4 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫褂们罢麴s水稀釋灌胃。

鈣(Ca)測(cè)定試劑盒、磷(P)測(cè)定試劑盒、肌酐(Cr)測(cè)定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein，HDL)測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)測(cè)定試劑盒、總膽固醇(total cholesterol，TC)測(cè)定試劑盒、甘油三酯(triglyceride，TG)測(cè)定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，Elisa試劑盒包括檢測(cè)I 型膠原氨基端前肽(procollagen I N-terminal propeptide，PINP)、I 型膠原羧基端肽(collagen I carboxyl terminal peptide，CTX-I)、尿脫氧吡啶啉(deoxypyridine，DPD)和骨鈣素(osteocalcin，OCN)均購自Cusabio BIO-Technology Co., Ltd.)，Cathepsin K 抗體(H-130，sc-28867，Santa Cruz，美國)。

模型組(OVX)大鼠骨組織微結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，與假手術(shù)組(SHAM)大鼠相比，其BV/TV、BS/BV、Tb.N、Conn.D顯著降低(P<0.05或0.01)，Tb.Sp、SMI顯著增加(P<0.05或0.01)。與模型組(OVX)大鼠相比，去卵巢大鼠經(jīng)過阿侖膦酸鈉治療12周后，其BS/BV、Conn.D顯著增加(P<0.05或0.01)，Tb.Sp、SMI顯著降低(P<0.05或0.01)。補(bǔ)腎壯骨方水提液高劑量(SG)和低劑量(SD)治療的去卵巢大鼠，其BS/BV、Conn.D顯著增加(P<0.05或0.01)。同時(shí)，補(bǔ)腎健骨方低劑量(SD)能顯著增加BV/TV和Tb.N，降低SMI、Tb.Sp(P<0.05或0.01)。這說明補(bǔ)腎壯骨方對(duì)于去卵巢大鼠股骨的骨密度和骨微結(jié)構(gòu)具有一定程度的保護(hù)作用，同時(shí)其低劑量治療效果相對(duì)較好。

“十二五”期末，全國原煤入選能力超過26億t，原煤入選量25.4億t，入洗比例達(dá)到65%以上；新建選煤廠180處，能力約8.5億t。

1.2 方法

1.2.1去卵巢大鼠模型的建立。雌性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，參照郭魚波等[6]提供的方法進(jìn)行。簡(jiǎn)述如下：大鼠用1%戊巴比妥鈉(4 mL/kg)腹腔麻醉，摘除兩側(cè)子宮角末端粉紅色菜花樣卵巢。假手術(shù)組大鼠僅切除兩側(cè)卵巢附近等體積的脂肪組織，然后所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

大鼠股骨生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。由表4可知，與假手術(shù)組(SHAM)相比，模型組(OVX)大鼠股骨最大載荷、彈性模量、最大應(yīng)力明顯降低(P<0.05或0.01)。與模型組(OVX)大鼠相比，阿倫膦酸鈉組大鼠股骨的最大載荷、彈性模量、最大應(yīng)力明顯增加(P<0.05)。去卵巢大鼠給予補(bǔ)腎壯骨方治療12周后，與模型組(OVX)大鼠相比，補(bǔ)腎壯骨方水煎液低劑量組(SD)、高劑量組(SG)大鼠股骨的最大載荷、彎曲強(qiáng)度顯著增加(P<0.05)，但對(duì)彈性模量影響不明顯。這說明補(bǔ)腎壯骨方能夠增強(qiáng)去卵巢大鼠的骨強(qiáng)度。

體驗(yàn)式教學(xué)法，是指在教學(xué)過程中為了達(dá)到既定的教學(xué)目的，從教學(xué)需要出發(fā)，引入、創(chuàng)造或創(chuàng)設(shè)與教學(xué)內(nèi)容相適應(yīng)的具體情境或氛圍，以引起學(xué)生的情感體驗(yàn)，幫助學(xué)生迅速而正確地理解教學(xué)內(nèi)容，促進(jìn)他們心理機(jī)能全面和諧發(fā)展的一種教學(xué)方法。體驗(yàn)式教學(xué)法使學(xué)生身臨其境或如臨其境，一則帶給學(xué)生從形象的感知到抽象的理性的頓悟，二則激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和學(xué)習(xí)情緒，使學(xué)習(xí)活動(dòng)成為自主自發(fā)的活動(dòng)。同時(shí)，在教學(xué)實(shí)踐中，體驗(yàn)式教學(xué)法在英語閱讀課、寫作課研究相對(duì)較多，而將其運(yùn)用到語法課研究的則比較少。[1]

鉑族金屬是一類具有戰(zhàn)略地位的工業(yè)金屬，由于其特殊的物理化學(xué)性質(zhì)，鉑族金屬在現(xiàn)代工業(yè)、國防 和科技發(fā)展中具有關(guān)鍵的作用，被譽(yù)為現(xiàn)代工業(yè)維他命［1］。自然界中鉑和鈀含量極其微小，常以有色金屬的硫化物、砷化物或硫砷化物作為其載體礦物方式存在。在銅、鎳等大宗產(chǎn)品電解精煉冶煉過程中，鉑鈀與金、銀、釕等稀貴金屬均富集于對(duì)應(yīng)的陽極泥中，作為副產(chǎn)物進(jìn)行回收［2］。

1.3.2骨密度的測(cè)定。采用雙能X線(DEXA)小動(dòng)物成像儀對(duì)大鼠股骨進(jìn)行掃描，選定股骨遠(yuǎn)端為興趣區(qū)域進(jìn)行圖像分析，得到股骨的BMD。

1.3.3骨微結(jié)構(gòu)的測(cè)定。采用VivaCT40(Scanco medical，瑞士)掃描大鼠股骨，選定股骨頭下0.5 cm為興趣區(qū)域進(jìn)行圖像分析，得到骨表面積與體積分?jǐn)?shù)比(BS/BV)、骨小梁體積分?jǐn)?shù)比(BV/TV)、骨小梁分離度(Tb.Sp)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(structure model index，SMI)和連接密度(Conn.D)參數(shù)值，并進(jìn)行分析比較。

1.3.4骨生物力學(xué)測(cè)定。采用微機(jī)控制電子萬能試驗(yàn)機(jī)(WF-4005，深圳市瑞格爾儀器有限公司)進(jìn)行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)。將股骨生理彎曲面向上放置，并使股骨中心、兩支點(diǎn)中心及加載點(diǎn)重合，然后按1 mm/min下降速度加載負(fù)荷，根據(jù)載荷-位移曲線計(jì)算最大載荷、最大應(yīng)力和彈性模量。

血清中的ALP、PINP和OCN反映骨形成，血清CTX-I和尿液DPD是反映骨吸收的生化指標(biāo)。各組大鼠血清指標(biāo)結(jié)果見圖1。由圖1可知，與假手術(shù)組(Sham)大鼠相比，模型組(OVX)大鼠血清中ALP、CTX-I、OCN、尿液中DPD含量明顯升高(P<0.05或0.01)，血清中PINP含量明顯下降(P<0.05)。與模型組(OVX)大鼠相比，去卵巢大鼠經(jīng)阿侖膦酸鈉、補(bǔ)腎壯骨方水提液低劑量和高劑量治療后，其血清中ALP、CTX-I、OCN和尿液中的DPD含量降低(P<0.05或0.01)，PINP含量顯著升高(P<0.05或0.01)。

1.3.6Western blot測(cè)定Cathepsin K的表達(dá)。參照Ma等[8]描述的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行，并簡(jiǎn)述如下：提取脛骨蛋白，將80μg蛋白溶液加到12%的SDS-PAGE電泳膠電泳，分離后轉(zhuǎn)印至PVDF膜，然后將膜與Cathepsin K(1∶500)和β-actin(1∶1000)4 ℃共孵育過夜。然后將膜與相應(yīng)的二抗室溫共孵育1 h，用ECL超敏發(fā)光液顯色，Azure c300化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)拍照，并用Image Pro Plus 6.0圖像分析軟件進(jìn)行半定量灰度值分析。

大鼠股骨HE染色結(jié)果(物鏡×10)如圖2所示。由圖2可知，假手術(shù)組(SHAM)大鼠股骨骨小梁排列緊密，結(jié)構(gòu)完整。模型組(OVX)大鼠股骨骨小梁結(jié)構(gòu)松散不規(guī)則，細(xì)長疏稀，出現(xiàn)斷裂，脂滴增多。阿侖膦酸鈉組、補(bǔ)腎壯骨方水提液高劑量(SG)和低劑量組(SD) 大鼠股骨骨小梁增多，排列緊密，脂滴數(shù)量減少，骨微結(jié)構(gòu)形態(tài)得到改善。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

1.2.2動(dòng)物的分組及給藥。造模一周后，進(jìn)行陰道涂片實(shí)驗(yàn)，連續(xù)5 d無動(dòng)情周期即為去卵巢實(shí)驗(yàn)成功。取造模成功的大鼠36只，按照體重隨機(jī)等分為模型組(OVX)、阿侖膦酸鈉組(ALN)、補(bǔ)腎壯骨方水提液低劑量組(SD)和補(bǔ)腎壯骨方水提液高劑量組(SG)。假手術(shù)組大鼠(SHAM)9只。其中，補(bǔ)腎壯骨方水提液低劑量組(SD)、高劑量組(SG)大鼠分別灌服0.7 g/kg和1.4 g/kg的補(bǔ)腎壯骨方水提液，阿侖膦酸鈉組(ALN)灌服阿侖膦酸鈉0.12 g/kg。假手術(shù)組和模型組大鼠給予等體積的蒸餾水。各組大鼠連續(xù)灌胃12周后，分別取血液、尿液、股骨、脛骨等進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血液及尿液中鈣和磷含量的影響

鈣磷等礦鹽是骨組織鈣化的重要成分，其血清和尿液的含量變化可以間接反映出骨礦物質(zhì)的代謝情況。補(bǔ)腎壯骨方對(duì)大鼠血清和尿液鈣磷檢測(cè)結(jié)果見表1。從表1可知，與假手術(shù)組(SHAM)大鼠相比，模型組(OVX)大鼠血清中鈣(S-Ca)和磷(S-P)水平均顯著降低，尿液中的鈣(U-Ca/Cr)、磷(U-P/Cr)水平均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)。與模型組(OVX)大鼠相比，阿倫膦酸鈉組、補(bǔ)腎壯骨方水提液低劑量組(SD)血清中鈣(S-Ca)和磷(S-P)水平均顯著升高，尿液中的鈣(U-Ca/Cr)和磷(U-P/Cr)水平均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)； 補(bǔ)腎壯骨方水提液高劑量組(SG)血清中鈣(S-Ca)、磷(S-P)水平均顯著升高，尿液中(U-P/Cr)磷水平顯著降低(P<0.05或0.01)，尿液中鈣(U-Ca/Cr)含量雖有一定程度降低，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明補(bǔ)腎壯骨方可以改善去卵巢大鼠的鈣磷代謝，從而增加骨組織礦物質(zhì)含量。

表1 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血清和尿液中鈣和磷含量的影響

注：與模型組大鼠相比較，*P<0.05，**P<0.01；與假手術(shù)組大鼠相比較，#P<0.05，##P<0.01。

2.2 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血清中TC、TG、HDL、LDL含量的影響

脂代謝與骨代謝具有密切相關(guān)性[9]。各組大鼠血脂代謝中相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見表2。由表2可知，與假手術(shù)(SHAM)相比，模型組(OVX)大鼠血清中TC、TG、LDL含量明顯升高， HDL含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)。給予阿侖膦酸鈉、補(bǔ)腎壯骨方水提液低劑量治療12周后，與去卵巢組大鼠相比，大鼠血清中的TC、TG、LDL含量明顯降低，HDL含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；高劑量組大鼠血清中的TC、TG、LDL含量明顯降低(P<0.05或0.01)，HDL含量升高。

2.3 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血清ALP、PINP、CTX-I、OCN和尿液DPD的含量的影響

1.3.5骨組織HE染色。取左側(cè)股骨組織做成石蠟切片，按照王麗麗等[7]提供方法進(jìn)行HE染色，封片后置于Olympus BX53倒置顯微鏡拍照觀察骨組織的病理變化。

表2 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血清中TC、TG、HDL、LDL含量的影響 Table 2 Effect of Bushen Zhuanggu Compound on the levels of TC, HDL, TG, LDL in the serum of ovariectomized rats s)

注：與模型組大鼠相比較，*P<0.05，**P<0.01；與假手術(shù)組大鼠相比較，#P<0.05，##P<0.01。

圖1 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血清和尿液骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物含量的影響Fig.1 Effect of Bushen Zhuanggu Compound on the levels of serum and urine turnover markers in ovariectomized rats注：與模型組大鼠相比較，*P<0.05，**P<0.01；與假手術(shù)組大鼠相比較，#P<0.05，##P<0.01。

2.4 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠股骨密度和骨組織微結(jié)構(gòu)的影響

骨質(zhì)疏松不僅導(dǎo)致骨量的降低，同時(shí)也會(huì)誘發(fā)骨組織微結(jié)構(gòu)的破壞。各組大鼠的骨CT實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。與假手術(shù)組(SHAM)大鼠相比，模型組(OVX)大鼠的股骨骨密度顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組(OVX)大鼠相比，阿侖膦酸鈉組、補(bǔ)腎壯骨方水提液低劑量組(SD)和高劑量組(SG)大鼠的股骨骨密度顯著升高。

表3 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠骨密度和骨微結(jié)構(gòu)改變的影響 Table 3 Effect of Bushen Zhuanggu Compound on the changes of micro-structures in ovariectomized rats s)

注：與模型組大鼠相比較，*P<0.05，**P<0.01；與假手術(shù)組大鼠相比較，#P<0.05，##P<0.01。

1.1.2動(dòng)物。3月齡雌性SD大鼠，平均體重220～240 g，購自斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)中心，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心屏障級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(合格證號(hào) SCXK(京)2016-0038)，室溫 20 ℃，相對(duì)濕度(55±5)%，光暗周期12 h/12 h，普通飼料喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由進(jìn)食和進(jìn)水。

2.5 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠股骨的生物力學(xué)的影響

1.3.1血清和尿液生化指標(biāo)的測(cè)定。取血液和尿液，按照試劑盒說明書測(cè)定血清中的Ca、P、HDL、LDL、TC、TG、PINP、CTX-I、OCN、DPD的含量；血清堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)用放免法測(cè)定。

組別劑量/(g/kg)彈性模量/GPa最大應(yīng)力/MPa最大載荷/NSHAM-8.51±0.25?255.90±5.74??140.30±4.13?OVX-6.90±0.52#219.00±7.97##124.50±3.59#ALN0.128.55±0.38?236.40±4.36#138.40±2.20?SG1.307.80±0.16256.80±9.08?138.70±4.44?SD0.707.92±0.37242.50±2.52?147.50±7.29?

注：與模型組大鼠相比較，*P<0.05，**P<0.01；與假手術(shù)組大鼠相比較，#P<0.05，##P<0.01。

2.6 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠股骨病理形態(tài)的影響

《青苗法》每年獲利息300萬貫。單以熙寧六年為例，青苗利息就達(dá) 292萬貫；《免役法》每年獲利1872萬9千3百，而支出只用所入的三分之一；《市易法》每年息錢和市利錢多達(dá)達(dá)133萬2千緡之多。不僅如此，各州縣歲收也大大增加。據(jù)統(tǒng)計(jì)，“諸路常平、免役、坊場(chǎng)、河渡、戶絕莊鄉(xiāng)之錢粟積于州縣者無慮數(shù)十百巨萬”，如作為地方政府經(jīng)費(fèi)，“可以支24年用”。 以上四組材料，充分說明王安石變法確實(shí)達(dá)到了“富國”的目的。

對(duì)于我國的智能電網(wǎng)，從當(dāng)前的使用來看，遺傳算法和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)這兩種算法得到了廣泛的應(yīng)用，這也讓電力系統(tǒng)智能化能夠有一個(gè)非常堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)能夠?qū)﹄娏ο到y(tǒng)中一些復(fù)雜的非線性問題進(jìn)行計(jì)算，從而解決問題，而基礎(chǔ)為生物神經(jīng)系統(tǒng)的人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，由于其科學(xué)化、高效化以及智能化的特點(diǎn)，在智能電網(wǎng)的應(yīng)用非常的普及。同時(shí)也隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，我國對(duì)于智能電網(wǎng)的建設(shè)腳步也不斷的加快，繼電保護(hù)技術(shù)智能化的發(fā)展也越來越迅速。同時(shí)，對(duì)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法進(jìn)行運(yùn)用，分析系統(tǒng)故障的樣本信息，能夠在最快的之間只能發(fā)現(xiàn)發(fā)生故障的部位，從而對(duì)故障能夠及時(shí)的進(jìn)行排除，讓系統(tǒng)的工作效率有效提升。

圖2 大鼠股骨HE染色(物鏡×10)Fig.2 HE staining of femur in rat (objective len×10)

2.7 補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠骨組織Cathepsin K表達(dá)的影響

各組大鼠骨組織中Cathepsin K的表達(dá)結(jié)果見圖3。由圖3可知，與假手術(shù)組(SHAM)大鼠相比，模型組(OVX)大鼠股骨組織中的Cathepsin K的表達(dá)明顯升高(P<0.05)；與模型組(OVX)大鼠相比，阿侖膦酸鈉和補(bǔ)腎壯骨方(低劑量和高劑量)能顯著降低去卵巢大鼠Cathepsin K的表達(dá)水平(P<0.05)，其中低劑量效果在降低Cathepsin K表達(dá)水平方面效果更明顯(P<0.01)。這說明補(bǔ)腎壯骨方可能通過抑制Cathepsin K 表達(dá)進(jìn)而改善骨質(zhì)量。

圖3 大鼠骨組織Cathepsin K的表達(dá)結(jié)果Fig.3 Cathepsin K expression in bone tissue注：與模型組大鼠相比較，*P<0.05，**P<0.01；與假手術(shù)組大鼠相比較，#P<0.05，##P<0.01。

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，腎藏精主骨、肝藏血主筋、肝腎同源而精血互生。腎功能失常如腎精虛或腎氣虛，則會(huì)導(dǎo)致骨骼失養(yǎng)，痿軟無力。肝腎生理功能異常，則可能導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。肝血不足可導(dǎo)致腎精虧損。肝血虛則筋脈失養(yǎng)，肢體屈伸不利，筋骨運(yùn)動(dòng)失常，從而誘發(fā)骨痿[10]。補(bǔ)腎活血方由丹參、淫羊藿、熟地等組成。其中，丹參能活血化瘀，熟地黃具有補(bǔ)肝腎強(qiáng)筋骨的功效，淫羊藿具有溫腎精、強(qiáng)筋骨的功效?；A(chǔ)研究也表明，丹參[11]、地黃[12]、淫羊藿[13]單獨(dú)應(yīng)用能明顯改善骨質(zhì)疏松動(dòng)物的骨微結(jié)構(gòu)和骨質(zhì)量。臨床觀察也表明，該方能顯著改善骨質(zhì)疏松患者的臨床癥狀，減輕患者骨量的丟失。

骨代謝的異常是誘發(fā)骨結(jié)構(gòu)破壞和骨質(zhì)疏松的主要原因。鈣和磷是骨組織的主要成分，研究發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松患者的鈣和磷的排泄量明顯增加。本實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎壯骨方能顯著抑制去卵巢大鼠尿鈣和磷的排泄，提高血清中鈣和磷的含量。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，去卵巢大鼠骨膠原降解加速，表現(xiàn)為血清中PINP的含量明顯降低，血液中的CTX-I和尿液中DPD的含量明顯升高。給予去卵巢大鼠補(bǔ)腎壯骨方治療12周，能明顯逆轉(zhuǎn)骨膠原血清學(xué)指標(biāo)，抑制去卵巢誘發(fā)的骨吸收。同時(shí)，本研究用骨生物力學(xué)、骨密度和骨微結(jié)構(gòu)評(píng)價(jià)補(bǔ)腎壯骨方對(duì)骨物理性質(zhì)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方能明顯提高去卵巢大鼠股骨的最大載荷和彎曲強(qiáng)度，抑制骨量的丟失以及骨微結(jié)構(gòu)的破壞。

去卵巢誘發(fā)的骨質(zhì)疏松是一種高轉(zhuǎn)換狀態(tài)的骨代謝過程，表現(xiàn)為血清中ALP活性明顯增高[14]。補(bǔ)腎壯骨方能明顯降低血清中ALP的活性，抑制骨代謝的高轉(zhuǎn)換率。OCN是由成骨細(xì)胞生成并特異性分泌的非膠原蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，去卵巢大鼠的OCN含量明顯降低[15]，這提示成骨細(xì)胞的骨形成能力明顯降低。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，該方能提高去卵巢大鼠血清OCN的含量，從而促進(jìn)骨形成。

（三）僅注重軟件的操作和結(jié)果的分析，卻忽視了對(duì)統(tǒng)計(jì)原理的深度分析和統(tǒng)計(jì)思想的逐步滲透，理論講授不夠立系統(tǒng)、深入和立體。

Cathepsin K活性的增高誘發(fā)破骨細(xì)胞骨吸收增強(qiáng)，是去卵巢誘發(fā)骨質(zhì)疏松的主要原因之一[16]。研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿的主要成分淫羊藿苷(icariin)能通過抑制Cathepsin K的活性而抑制膠原誘發(fā)的骨關(guān)節(jié)炎[17]。筆者前期研究也發(fā)現(xiàn)丹參的主要水溶性成分丹酚酸B能降低高脂飲食小鼠牙槽骨組織Cathepsin K的表達(dá)水平改善骨代謝[7]。丹參脂溶性成分丹參酮也能抑制Cathepsin K的活性[18]。本實(shí)驗(yàn)研究也證明，以丹參和淫羊藿為主要成分的補(bǔ)腎壯骨方能降低骨組織Cathepsin K的表達(dá)。這說明該方抗去卵巢誘發(fā)的大鼠骨量降低的機(jī)理之一可能在于抑制Cathepsin K的活性。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過觀察補(bǔ)腎壯骨方對(duì)去卵巢大鼠血清和尿液的骨代謝指標(biāo)、骨微結(jié)構(gòu)和骨生物力學(xué)的影響，證明補(bǔ)腎壯骨方能夠增強(qiáng)去卵巢大鼠的骨生物力學(xué)和改善骨微結(jié)構(gòu)可能與改善骨代謝、抑制骨吸收和促進(jìn)骨形成有關(guān)。這為其臨床應(yīng)用預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。這種骨組織的保護(hù)作用可能與抑制Cathepsin K的活性有關(guān)，但該方抗骨質(zhì)疏松的深層次分子機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。