巨噬細(xì)胞與白介素1β、TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥中診斷效能

劉榕娟 費(fèi)曉璐 毛曉玲

子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見的女性婦科疾病，會(huì)引發(fā)疼痛和包塊等婦科疾病。子宮內(nèi)膜異位癥在育齡婦女中的發(fā)病率高達(dá)11%～16%，其中有75%左右的患者有不同程度的盆腔疼痛，45%左右的患者合并不孕，35%左右的患者合并盆腔包塊[1]。大量研究資料表明，免疫因子對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生起著重大作用。針對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制有多種學(xué)說，具體發(fā)病機(jī)制不夠清楚[2]。目前來看，子宮內(nèi)膜種植學(xué)說是被認(rèn)可的主要學(xué)說之一。隨著研究的不斷深入，人們逐漸意識(shí)到細(xì)胞因子在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的重要作用[3]。本研究以2015年4月—2017年4月入院治療的子宮異位妊娠患者85例及同期入院治療的子宮全切除患者85例作為研究對(duì)象，探討巨噬細(xì)胞(CD68)與白介素1β、TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β)在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

1.一般資料：選擇2015年4月—2017年4月山東省青島市中心醫(yī)院婦科治療的子宮異位妊娠患者85例，作為實(shí)驗(yàn)組；另外選取同期入本院行子宮全切除術(shù)患者85例，作為對(duì)照組。所有患者均采集其在位子宮內(nèi)膜蠟塊和異位子宮內(nèi)膜蠟塊。納入標(biāo)準(zhǔn)包括(1)均在知情下參與本次研究；(2)病理證實(shí)為良性子宮內(nèi)膜。排除標(biāo)準(zhǔn)包括(1)合并內(nèi)外科合并癥者；(2)精神障礙者。實(shí)驗(yàn)組患者的平均年齡為(48.1±2.6)歲，平均體重為(60.5±11.1)kg；50例在位內(nèi)膜增生期、35例在位內(nèi)膜分泌期。對(duì)照組患者的平均年齡為(48.1±2.6)歲，平均體重為(60.6±11.1)kg；48例在位內(nèi)膜增生期、37例在位內(nèi)膜分泌期；疾病類型：子宮良性腫瘤32例，子宮惡性腫瘤28例，子宮出血10例，自動(dòng)不典型增生、子宮腺肌病15例。本研究均在青島市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)監(jiān)督、批準(zhǔn)下完成，兩組研究對(duì)象在一般資料(疾病類型、平均年齡、平均體重等)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

2.子宮內(nèi)膜的收集和處理：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者均在手術(shù)當(dāng)天進(jìn)行刮宮術(shù)，留取子宮內(nèi)膜標(biāo)本，術(shù)后取異位病灶組織，再將標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)固定包埋切片處理。

3.檢測(cè)方法：采用免疫組化法檢測(cè)巨噬細(xì)胞(CD68)與白介素1β、TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β)，嚴(yán)格按照說明書來進(jìn)行操作。

CD68陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞胞漿內(nèi)含棕黃色顆粒。白介素1β采用HSCORE半定量法。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 染色為棕黃色或者棕褐色，根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行劃分(3分為棕褐色、2分為棕黃色、1分為淺黃色、0分為無染色)。見圖1、圖2。

繪制ROC曲線，分析CD68與白介素1β、TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥中診斷效能。診斷敏感性、特異性計(jì)算方法如下所示。

敏感性=TP/(TP+FN)×100%，TP為真陽性，F(xiàn)N為假陰性；

特異性=TN/(TN+FP)×100%，TN為真陰性,FP為假陽性。

結(jié)果

1.兩組研究對(duì)象的TGF-β陽性率比較：實(shí)驗(yàn)組TGF-β在異位內(nèi)膜的陽性率為98.8%，TGF-β在位內(nèi)膜陽性率為61.2%，對(duì)照組在位內(nèi)膜TGF-β陽性率為11.8%，實(shí)驗(yàn)組TGF-β陽性率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.兩組研究對(duì)象的CD68表達(dá)：對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織CD68表達(dá)為(22.6±10.1)%，實(shí)驗(yàn)組在位內(nèi)膜組織CD68表達(dá)為(29.7±8.1)%，在異位內(nèi)膜組織中CD68表達(dá)為(36.3±7.5)%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表1 兩組研究對(duì)象的TGF-β陽性率比較[例(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

表2 兩組研究對(duì)象的CD68表達(dá)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

3.兩組研究對(duì)象的白介素1β表達(dá)：對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織白介素1β表達(dá)為(141.9±20.2)%，實(shí)驗(yàn)組在位內(nèi)膜組織白介素1β表達(dá)為(181.2±46.7)%，在異位內(nèi)膜組織中白介素1β8表達(dá)為(542.1±39.4)%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 兩組研究對(duì)象的白介素1β表達(dá)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

4. CD68與白介素1β、TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥中診斷效能：?jiǎn)我籆D68、白介素1β、TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥中的診斷敏感性、特異性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CD68與白介素1β、TGF-β聯(lián)合檢測(cè)的診斷敏感性、特異性，高于單一CD68與白介素1β、TGF-β檢測(cè)(P<0.05)，見表4。

討論

子宮內(nèi)膜異位癥是育齡婦女人群中最為常見的疾病之一，子宮內(nèi)膜異位癥對(duì)患者的生活質(zhì)量和健康安全等造成一定程度的影響[4-5]。子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)雜發(fā)病機(jī)制使得其確診非常困難，一般情況下，子宮內(nèi)膜異位癥疾病通過腹腔鏡來進(jìn)行相應(yīng)檢查，對(duì)疑似病例進(jìn)行組織學(xué)檢查才能夠確診。巨噬細(xì)胞是先天免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)器，對(duì)腫瘤組織和感染等負(fù)責(zé)恢復(fù)體內(nèi)平衡狀態(tài)。巨噬細(xì)胞被激活之后能夠表達(dá)成環(huán)氧化酶-2、一氧化氮合成酶，繼而釋放多種細(xì)胞因子(白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-8、白細(xì)胞介素-12以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β等)。上述活性產(chǎn)物通過誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜碎片的增殖和血管生成，與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[6-7]。巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用越來越受到人們的廣泛重視。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β通過誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生而促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥病灶的血管生成，研究資料顯示，腹腔液中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β前體能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥病情的發(fā)展[8-9]。

表4 CD68與白介素1β、TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥中診斷效能

注：與單一CD68與白介素1β、TGF-β檢測(cè)分別比較，*P<0.05；AUC表示曲線下面積

子宮內(nèi)膜異位癥患者體液免疫與細(xì)胞免疫均發(fā)生多種改變，體液免疫改變主要表現(xiàn)為出現(xiàn)抗卵巢抗體。細(xì)胞免疫的主要改變體現(xiàn)在各種免疫細(xì)胞的病灶局部作用之中，使得盆腔微環(huán)境的免疫功能也發(fā)生一系列變化。當(dāng)微環(huán)境中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β占優(yōu)勢(shì)時(shí)，可以通過激活SMAD通路向Treg(調(diào)節(jié)性T)細(xì)胞分化，當(dāng)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子共同存在時(shí)會(huì)啟動(dòng)SMAD通路[10]。本文研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組TGF-β在異位內(nèi)膜的陽性率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

本研究中，實(shí)驗(yàn)組患者子宮內(nèi)膜組織CD68表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，說明CD68在子宮內(nèi)膜組織中呈高表達(dá)，加強(qiáng)其表達(dá)水平測(cè)定有助于診斷。實(shí)驗(yàn)組的子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜存在一定缺陷，也就是將活化之后的巨噬細(xì)胞流入腹腔之內(nèi)，其吞噬能力逐漸減弱，無法清除內(nèi)膜細(xì)胞，反而通過分泌機(jī)制來分泌多種細(xì)胞因子[11-13]。實(shí)驗(yàn)組子宮內(nèi)膜組織白介素1β表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。白介素1β通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生反而促進(jìn)內(nèi)膜異位灶的血管生成。子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中的巨噬細(xì)胞數(shù)量顯著高于非子宮內(nèi)膜異位癥患者，在位內(nèi)膜組織和異位內(nèi)膜組織中的巨噬細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)顯著增加趨勢(shì)。

研究結(jié)果顯示，即使子宮內(nèi)膜異位癥患者的巨噬細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)顯著增加趨勢(shì)，但是細(xì)胞吞噬功能卻顯著下降，吞噬功能受損之后會(huì)使得清除異位內(nèi)膜碎片的能力逐漸下降[14-15]。在子宮內(nèi)膜異位癥患者的初期階段中，巨噬細(xì)胞的活性吞噬作用相比起正常而言顯著增高，從而有利于清除早期異位內(nèi)膜碎片。在中期階段中，巨噬細(xì)胞的吞噬作用能夠顯著降低，繼而使得異位內(nèi)膜碎片的清除功能受到一定損傷。本研究中，CD68與白介素1β、TGF-β聯(lián)合檢測(cè)診斷敏感性、特異性，高于單一CD68與白介素1β、TGF-β檢測(cè)(P<0.05)。由此看出，CD68與白介素1β、TGF-β聯(lián)合校測(cè)用于子宮內(nèi)膜異位癥患者中能獲得較高的診斷效能。

綜上所述，巨噬細(xì)胞(CD68)與白介素1β、TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了協(xié)同作用。

(圖1、圖2見封底)