DNA倍體分析在良惡性胸腹腔積液鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值

吳紅梅，李飛，張洪福

（廣東省高州市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 高州 525200）

正常情況下，人體胸膜腔內(nèi)有5～15 ml的液體，在呼吸運(yùn)動(dòng)時(shí)起到潤滑作用，人體腹腔內(nèi)亦存在200 ml以下的液體以潤滑腸道，而當(dāng)胸腔或腹腔內(nèi)的液體超過該限度時(shí)，則稱為胸腔積液或腹腔積液，此時(shí)說明機(jī)體可能處于病理狀態(tài)。胸腹腔積液可由心血管疾病、惡性腫瘤、肝硬化及腎臟疾病等多種病因引起，及時(shí)診斷并采取正確的治療方法至關(guān)重要。以往多采取脫落細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查來確定其良惡性，通常需要多次抽取積液來進(jìn)行確診，還有少部分患者即使經(jīng)過反復(fù)檢查仍未能獲得確診，可能導(dǎo)致病情貽誤，因此，探索更為簡便而準(zhǔn)確的診斷方法是目前國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)問題。流式細(xì)胞儀脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）倍體分析是近十年來應(yīng)用于診斷早期惡性腫瘤的重要方法之一[1-2]，但是目前國內(nèi)對(duì)于該技術(shù)的應(yīng)用尚未十分成熟。本研究將其與以往常用的脫落細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行對(duì)比，以探討DNA倍體分析在良惡性胸腹腔積液鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月-2018年1月本院臨床科室送檢的胸腹腔積液標(biāo)本150例，其中男82例，女68例；年齡20～88歲，平均（67.98±10.42） 歲。所有患者均經(jīng)影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室、病理組織學(xué)檢查以及臨床表現(xiàn)明確診斷，將惡性胸腹腔積液70例納入惡性組，其中肺癌33例，乳腺癌12例，惡性胸膜間皮瘤1例，肝癌14例，卵巢癌10例，將良性腹腔積液80例納入良性組，其中結(jié)核性胸膜炎49例，肺炎5例，心力衰竭4例，肝硬化22例。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有患者均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

每例標(biāo)本均同時(shí)進(jìn)行脫落細(xì)胞學(xué)檢查和DNA倍體分析。脫落細(xì)胞學(xué)檢查方法：行巴氏染色后制片，由病理科醫(yī)生進(jìn)行讀片，診斷結(jié)果包括：① 未見到癌細(xì)胞；②見到少許異型細(xì)胞；③見到重度不典型異型細(xì)胞；④可疑癌細(xì)胞；⑤見到癌細(xì)胞。DNA倍體分析方法：將標(biāo)本制備成單細(xì)胞懸液，碘化吡啶染色，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行DNA定量分析，將不易區(qū)分的群體細(xì)胞分為G1期、S期和G2期3個(gè)亞群，再使用CellQuest軟件獲取DNA數(shù)據(jù)，ModFit軟件分析DNA倍體和細(xì)胞周期，采用DNA指數(shù)（DNA index, DI）表示細(xì)胞的倍體，二倍體DI=1.0±0.1，異倍體DI＜0.9或＞1.1。計(jì)算兩種方法的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確度。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%；陽性預(yù)測(cè)值=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/（假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù)） ×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。靈敏度可反映正確識(shí)別患者的能力，特異度可反映正確鑒別實(shí)際非患者的能力，陽性預(yù)測(cè)值反映篩檢陽性者患目標(biāo)疾病的可能性，陰性預(yù)測(cè)值可反映篩檢陰性者中真正未患病的可能性，準(zhǔn)確度可反映正確診斷患者與非患者的能力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各診斷效能為計(jì)數(shù)資料，以百分比（%）表示，兩種方法的診斷效能比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者兩種檢測(cè)方法分析結(jié)果比較

DNA倍體分析結(jié)果和脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果如表1所示。

表1 兩組兩種檢測(cè)方法分析結(jié)果比較 例

2.2 兩種檢測(cè)方法診斷效能評(píng)價(jià)比較

DNA倍體分析的靈敏度顯著高于脫落細(xì)胞學(xué)檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），陰性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確度高于脫落細(xì)胞學(xué)檢查，特異度和陽性預(yù)測(cè)值低于脫落細(xì)胞學(xué)檢查，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩種檢測(cè)方法的診斷效能評(píng)價(jià)比較 %

3 討論

一直以來，脫落細(xì)胞學(xué)檢查在良惡性胸腹腔積液的鑒別診斷中占據(jù)著重要地位[3-5]，但該方法既需要良好的臨床檢驗(yàn)技能，也需要完善的病理學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)和診斷經(jīng)驗(yàn)，其結(jié)果容易受細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞形態(tài)變化是否典型以及病理醫(yī)師對(duì)讀片結(jié)果的主觀偏差等各種因素的影響[6]，因此診斷的靈敏度受到限制，需要探尋一種操作更為簡便，診斷結(jié)果更為準(zhǔn)確的方法來提高惡性胸腹腔積液的陽性檢出率。

通常情況下，正常組織細(xì)胞中染色體數(shù)目和DNA含量是固定的，細(xì)胞分裂周期中，DI的值是波動(dòng)的，二倍體DI為0.9～1.0，四倍體DI為1.90～2.10，正常人體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞為二倍體，僅有少數(shù)為異倍體，但是腫瘤細(xì)胞尤其是惡性腫瘤細(xì)胞大多會(huì)發(fā)生染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常的情況，其DNA含量也會(huì)隨之改變[7-8]。DNA倍體分析屬于DNA定量分析技術(shù)，可通過檢測(cè)組織細(xì)胞核內(nèi)DNA的數(shù)量得出相對(duì)客觀的結(jié)果，能準(zhǔn)確識(shí)別出所測(cè)標(biāo)本中出現(xiàn)異倍體改變的細(xì)胞，從而有助于早期判斷細(xì)胞是否發(fā)生惡變[9]。有研究證實(shí)[10-12]，DNA倍體分析結(jié)果中的細(xì)胞DI值與異倍體細(xì)胞的數(shù)量、細(xì)胞增殖以及惡變程度均有密切相關(guān)性，且在呼吸系統(tǒng)腫瘤、消化系統(tǒng)腫瘤及婦科腫瘤等的早期診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮重要作用。

本研究將DNA倍體分析與脫落細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，DNA倍體分析的靈敏度為78.57%，顯著高于脫落細(xì)胞學(xué)檢查的61.43%，說明相對(duì)于傳統(tǒng)的脫落細(xì)胞學(xué)檢查，該方法篩查出真正為惡心胸腹水患者的能力更好，導(dǎo)致惡性胸腹水患者DNA異倍體為陰性的原因可能為腫瘤細(xì)胞尚未脫落至漿膜腔、所測(cè)標(biāo)本中腫瘤細(xì)胞聚集成團(tuán)或者二倍體腫瘤高分化等影響讀片結(jié)果所致。本研究還顯示，DNA倍體分析的陰性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確度高于脫落細(xì)胞學(xué)檢查，特異度和陽性預(yù)測(cè)值低于脫落細(xì)胞學(xué)檢查，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明該方法在顯著提高診斷靈敏度的同時(shí)，并未明顯降低其他診斷效能，而且在準(zhǔn)確度方面具有一定優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，與脫落細(xì)胞學(xué)檢查相比，DNA倍體分析在良惡性胸腹腔積液的臨床鑒別診斷中具有更高的靈敏度，且保證了較高的特異度和準(zhǔn)確度，其操作簡單、重復(fù)性好、人為因素影響小，臨床應(yīng)用價(jià)值更高。在今后的研究中，筆者將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，并采取多中心協(xié)作的方法，對(duì)DNA異倍體的數(shù)量和程度與腫瘤轉(zhuǎn)移部位、病情程度和預(yù)后等的相關(guān)性進(jìn)行深入分析，為惡性腫瘤的早期診斷、治療和預(yù)后判斷提供更為科學(xué)的依據(jù)。