5種常用消毒劑對(duì)錦鯉幼魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)

劉銀華，何國(guó)森，錢(qián) 毅，劉路遙

(1.福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建 福州 350002； 2.福建農(nóng)林大學(xué)，福建 福州 350002)

錦鯉(Cyprinuscarpio)，屬鯉科，雜食性，性情溫和，喜結(jié)群而游，在2～30℃條件下均可生存，適宜生長(zhǎng)溫度為20～26℃，對(duì)溫度突變敏感[1]。錦鯉是一種寓意吉祥的觀賞魚(yú)類(lèi)，在中國(guó)有一千多年的養(yǎng)殖歷史，一直深受人們的喜愛(ài)。隨著錦鯉養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大及水環(huán)境污染的加劇等，各種病害問(wèn)題不斷發(fā)生[2-3]，使用消毒劑來(lái)防治病害就必不可少。因過(guò)量使用消毒劑產(chǎn)生副作用導(dǎo)致養(yǎng)殖生物大量死亡的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，為避免養(yǎng)殖動(dòng)物的中毒死亡，需要把握好消毒劑的毒性及安全濃度范圍。目前，關(guān)于消毒劑對(duì)錦鯉的急性毒性的研究并不多[4-7]。而且，我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖面積廣闊，品種繁多，不同種類(lèi)消毒劑對(duì)不同品種、不同規(guī)格水產(chǎn)動(dòng)物的毒性差異較大。文章通過(guò)探討5種常見(jiàn)消毒劑對(duì)錦鯉幼魚(yú)的急性毒性反應(yīng)，得出該5種藥物在錦鯉幼魚(yú)時(shí)期的半致死濃度和安全用藥濃度范圍，意在給養(yǎng)殖中這幾種消毒劑的使用提供理論參考，能在實(shí)際應(yīng)用中減少相應(yīng)的損失。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)魚(yú)

試驗(yàn)魚(yú)來(lái)自福建省淡水水產(chǎn)研究所榕橋中試基地錦鯉苗種培育池，選擇正常養(yǎng)殖，無(wú)病無(wú)傷，規(guī)格均勻的錦鯉幼魚(yú)作為試驗(yàn)對(duì)象，平均全長(zhǎng)(4.73±0.82)cm，平均體重(1.83±0.35)g。在相同室內(nèi)環(huán)境下暫養(yǎng)48 h，試驗(yàn)開(kāi)始前24 h停止投喂。

1.1.2 試驗(yàn)漁藥

試驗(yàn)選用溴氯海因、三氯異氰尿酸、聚維酮碘、二氧化氯、高錳酸鉀5種市面上常見(jiàn)消毒劑，詳見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)用消毒劑

試驗(yàn)用藥品現(xiàn)配現(xiàn)用，先配成一定濃度的母液，再根據(jù)試驗(yàn)需要按比例稀釋?zhuān)囼?yàn)前藥液用水稀釋?zhuān)靹颉?/p>

1.1.3 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在福建省淡水水產(chǎn)研究所榕橋中試基地養(yǎng)殖車(chē)間內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)濾并曝氣48 h的養(yǎng)殖用山溪水，水溫26～28℃，pH值約為7.5，溶氧大于5 mg/L。試驗(yàn)器材為容積5 L的塑料桶，每桶盛水3 L。

1.2 試驗(yàn)方法

先經(jīng)過(guò)48 h預(yù)試驗(yàn)，分別得到5種藥物對(duì)錦鯉幼魚(yú)的48 h無(wú)死亡濃度和24 h全部致死濃度。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，每種藥物分別設(shè)置5個(gè)濃度梯度組(表2)、1個(gè)對(duì)照組，每組2個(gè)平行，每組10尾魚(yú)。試驗(yàn)采用靜水試驗(yàn)法，在試驗(yàn)過(guò)程中，為保證試驗(yàn)環(huán)境穩(wěn)定，不換水，不增氧，不投喂。前1 h連續(xù)觀察，至第6 h再次觀察并記錄試驗(yàn)魚(yú)的活動(dòng)和死亡情況，之后每6 h觀察一次并記錄，及時(shí)撈出死魚(yú)，以針刺無(wú)反應(yīng)判斷為死亡。

表2 各種試驗(yàn)藥物的濃度

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Karber氏法[8]計(jì)算半致死濃度(LC50)，計(jì)算公式：lgLC50= Xm-i(Σp-0.5)。式中，Xm為最大劑量的對(duì)數(shù)；i為相鄰組濃度對(duì)數(shù)差；P為各濃度組死亡率，∑p為各濃度組死亡率之和，半數(shù)致死濃度LC50為96 h內(nèi)引起試驗(yàn)動(dòng)物死亡一半時(shí)的濃度。

安全濃度SC= 96 h LC50×0.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 錦鯉幼魚(yú)中毒癥狀

試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，低濃度組的錦鯉幼魚(yú)與未加藥品的空白對(duì)照組相比，并無(wú)明顯區(qū)別，處于正?；顒?dòng)狀態(tài)；高濃度組的幼魚(yú)在初入試驗(yàn)容器時(shí)反應(yīng)明顯，在桶內(nèi)快速竄游、打轉(zhuǎn)，甚至有些會(huì)跳出水面，或撞向桶壁。一段時(shí)間后，低濃度組的幼魚(yú)并沒(méi)有發(fā)生太大變化，少部分會(huì)有游動(dòng)緩慢的表現(xiàn)，其活力與對(duì)照組比較稍微減弱；而高濃度組的幼魚(yú)，活力明顯降低，表現(xiàn)出游動(dòng)遲緩，一些出現(xiàn)僵直、平躺在水底的情況，而且體表黏液增多，對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍。

高濃度溴氯海因試驗(yàn)組，錦鯉表現(xiàn)呼吸急促，伏于底部，直至死亡。高濃度三氯異氰尿酸試驗(yàn)組，錦鯉在50 s的時(shí)候就出現(xiàn)個(gè)體下沉，6 min便出現(xiàn)個(gè)體死亡，針刺無(wú)反應(yīng)，2.10 mg/L濃度組在3 h便已死亡過(guò)半，12 h全部死亡；而低濃度的三氯異氰尿酸試驗(yàn)組，隨著時(shí)間的推移，表現(xiàn)也越來(lái)越激烈不安，個(gè)體體表黏液增多，直至死亡。二氧化氯試驗(yàn)組與三氯異氰尿酸試驗(yàn)組幼魚(yú)反應(yīng)癥狀相近，高濃度組幼魚(yú)游動(dòng)迅速，75 mg/L濃度組在20 min左右出現(xiàn)死亡，死亡個(gè)體體表大量黏液，18 h全部死亡。高濃度聚維酮碘試驗(yàn)組在進(jìn)入藥液后，幼魚(yú)呼吸明顯減弱，身體失去平衡側(cè)翻，在桶底抽動(dòng)搖擺，死亡個(gè)體僵硬，1.00 mg/L試驗(yàn)組在15 min左右出現(xiàn)死亡，12 h死亡率達(dá)到95%，0.85 mg/L試驗(yàn)組在45 min左右出現(xiàn)死亡，6 h死亡率達(dá)到60%。低濃度高錳酸鉀試驗(yàn)組，癥狀不明顯，與空白對(duì)照組無(wú)差異，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，魚(yú)缺氧加重，鰓蓋開(kāi)合速度加快。

2.2 半數(shù)致死濃度和安全濃度

根據(jù)各個(gè)試驗(yàn)組的試驗(yàn)魚(yú)死亡情況統(tǒng)計(jì)5種試驗(yàn)藥物對(duì)錦鯉幼魚(yú)的影響，得出 24 h、48 h、72 h、96 h半數(shù)致死濃度(LC50)及安全質(zhì)量濃度(SC )結(jié)果，見(jiàn)表3。

表3 5種藥物對(duì)錦鯉幼魚(yú)的半數(shù)致死濃度和安全濃度

3 討論

3.1 溴氯海因?qū)﹀\鯉幼魚(yú)的安全性

溴氯海因溶于水后，分解成游離態(tài)的活性氯、活性溴和新生態(tài)氧，可以氧化微生物體內(nèi)的磷酸脫氫酶，從而殺滅該微生物[9]。溴氯海因是一種廣譜消毒劑，可作為多種魚(yú)、貝、蝦的殺菌消毒藥物。試驗(yàn)所得溴氯海因?qū)﹀\鯉幼魚(yú)的安全濃度是0.29 mg/L，遠(yuǎn)低于雙齒圍沙蠶(Perinereisaibuhitensis)的21.6 mg/L[10]，也低于鯰魚(yú)(Silurusasotus)的0.56 mg/L[11]，甚至低于水產(chǎn)生產(chǎn)上殺菌消毒常用量(0.3～0.4 mg/L)[9]，說(shuō)明錦鯉對(duì)溴氯海因敏感，在生產(chǎn)中要注意使用劑量。

3.2 三氯異氰尿酸對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全性

三氯異氰尿酸，又叫強(qiáng)氯精，遇水溶解后，產(chǎn)生次氯酸，而次氯酸可釋放活性氯和新生態(tài)氧，抑制細(xì)菌各種硫基酶活性，從而殺滅細(xì)菌[9]。三氯異氰尿酸為廣譜型殺菌劑，對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒均有高于一般消毒劑的殺滅效果[12]。試驗(yàn)所得三氯異氰尿酸對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全濃度為0.057 mg/L，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于泥鰍(Orientalweatherfish)的2.27 mg/L和草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)魚(yú)苗的0.44 mg/L，也遠(yuǎn)低于水產(chǎn)生產(chǎn)中的常用全池潑灑濃度(0.1～0.3 mg/L)[9]，說(shuō)明錦鯉對(duì)三氯異氰尿酸比較敏感，在錦鯉養(yǎng)殖生產(chǎn)中，應(yīng)該慎用或者禁用。

3.3 二氧化氯對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全性

二氧化氯又稱(chēng)百毒清，是一種強(qiáng)氧化劑，作用機(jī)理有別于一般氯制劑，活化后的二氧化氯會(huì)產(chǎn)生新生態(tài)氧，具有極強(qiáng)的氧化作用，可使微生物蛋白質(zhì)失活，快速殺滅微生物[12-13]。二氧化氯對(duì)細(xì)菌、芽孢、病毒、原生動(dòng)物和藻類(lèi)等都有很好的殺滅效果，如大腸桿菌(Escherichiacoli)在消毒劑濃度為100 mg/L的條件下，10 min就能被100%殺滅[14]。二氧化氯對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全濃度(4.960 mg/L)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于生產(chǎn)中常用的潑灑濃度(0.1～0.3 mg/L)[13]，與湘云鯽的試驗(yàn)結(jié)果(3.24 mg/L)一致[15]。且經(jīng)急性毒性試驗(yàn)后幸存的錦鯉又能存活數(shù)天，表明二氧化氯可以在錦鯉的養(yǎng)殖生產(chǎn)中安全使用。

3.4 聚維酮碘對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全性

聚維酮碘，是聚乙烯吡咯烷酮(PVP)與分子碘形成的高分子絡(luò)合物，對(duì)菌膜親和的PVP運(yùn)載的碘與胞膜、胞質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)、酶、脂質(zhì)等失活[12]。聚維酮碘在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用較早，其高效、低毒，可抑制多數(shù)的細(xì)菌、真菌及病毒的生長(zhǎng)繁殖，甚至將其殺死。試驗(yàn)得出聚維酮碘對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全質(zhì)量濃度(0.071 mg/L)遠(yuǎn)低于聚維酮碘在養(yǎng)殖生產(chǎn)中常用的潑灑消毒質(zhì)量濃度(0.2～0.5 mg/L)，且與雙齒圍沙蠶(89.1 mg/L)[10]和暗紋東方鲀(Takifuguobscurus)稚魚(yú)(32.97 mg/L)[16]的試驗(yàn)結(jié)果相差甚遠(yuǎn)，卻與刺參(OplopanaxelatusNakai)幼參(0.09 mg/L)[17]試驗(yàn)結(jié)果相近，可見(jiàn)錦鯉對(duì)聚維酮碘的敏感性較強(qiáng)。

3.5 高錳酸鉀對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全性

高錳酸鉀為黑紫色長(zhǎng)棱形結(jié)晶，味甜無(wú)臭。高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑，易溶于水，產(chǎn)生新生態(tài)氧，快速氧化蛋白使其失活，從而殺滅細(xì)菌。高錳酸鉀對(duì)治療草魚(yú)三代蟲(chóng)(Gyrodactylus)、車(chē)輪蟲(chóng)(Trichodina)、錦鯉的錨頭蚤(Lernaeacyprinacea)等有很好的效果。試驗(yàn)得出高錳酸鉀對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全濃度為0.773 mg/L，高于席敏等的試驗(yàn)結(jié)果(0.495 mg/L)[18]，這可能與試驗(yàn)用魚(yú)的大小差異有關(guān)，但兩個(gè)試驗(yàn)所得高錳酸鉀安全濃度都與生產(chǎn)上常用預(yù)防劑量(2～5 mg/L)差距較遠(yuǎn)[19]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，高錳酸鉀對(duì)錦鯉的24 h LC50和48 h LC50差別不大，而與72 h LC50和96 h LC50差異明顯，這也再次說(shuō)明高錳酸鉀與魚(yú)鰓分泌物作用，會(huì)形成二氧化錳沉淀造成缺氧，隨著時(shí)間的增加，沉淀也越積越多[20]。所以，在錦鯉養(yǎng)殖生產(chǎn)中，高錳酸鉀的使用要非常謹(jǐn)慎，要特別注意增氧。

4 結(jié)論

通過(guò)試驗(yàn)，得到5種消毒劑對(duì)錦鯉幼魚(yú)的安全濃度值為二氧化氯>高錳酸鉀>溴氯海因>聚維酮碘>三氯異氰尿酸，因此其毒性大小依次為三氯異氰尿酸>聚維酮碘>溴氯海因>高錳酸鉀>二氧化氯。