豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒三聯(lián)活疫苗創(chuàng)制與應(yīng)用

主要完成人：

馮 力（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

時(shí)洪艷（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

陳建飛（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

佟有恩（哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司），

張 鑫（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

王牟平（哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司）

提名單位：黑龍江省

豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和豬輪狀病毒（PoRV）引起的豬病毒性腹瀉可導(dǎo)致7日齡以內(nèi)仔豬死亡率高達(dá)100%，導(dǎo)致“連窩端”，被譽(yù)為哺乳仔豬死亡的“第一殺手”，且無有效治療藥物，每年因此造成的經(jīng)濟(jì)損失超過百億元。針對(duì)我國(guó)這三種病毒普遍存在且混合感染日趨嚴(yán)重的現(xiàn)實(shí)問題，為遏制其帶來的嚴(yán)重產(chǎn)業(yè)危害，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所研究員、豬消化道傳染病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)首席科學(xué)家馮力帶領(lǐng)項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)12年科學(xué)攻關(guān)，發(fā)明了我國(guó)首個(gè)安全高效豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒（G5型）三聯(lián)活疫苗（以下簡(jiǎn)稱豬病毒性腹瀉三聯(lián)活疫苗），攻克了三種病毒混合感染無疫苗可用的產(chǎn)業(yè)難題，實(shí)現(xiàn)了豬病毒性腹瀉精準(zhǔn)高效防控。其領(lǐng)銜的“豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒三聯(lián)活疫苗創(chuàng)制與應(yīng)用”項(xiàng)目獲2018年度國(guó)家技術(shù)發(fā)明獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)。

在TGEV、PEDV、PoRV三種病毒中，有兩種冠狀病毒，其血清型單一，但是輪狀病毒血清型眾多，中國(guó)流行情況如何，必須先摸清楚，疫苗的研發(fā)才能有的放矢。為了解疫情，掌握豬腹瀉病的流行和感染狀況，摸清輪狀病毒優(yōu)勢(shì)基因型，馮力及其團(tuán)隊(duì)克服養(yǎng)豬場(chǎng)都建在遠(yuǎn)離城市的農(nóng)村或山區(qū)，交通極不方便的困難，跋山涉水，深入疫情發(fā)生地開展流行病學(xué)調(diào)查，明確了三種病毒是我國(guó)主要腹瀉病原，在眾多的豬輪狀病毒基因型中，G5型為優(yōu)勢(shì)基因型，為疫苗的研發(fā)提供了堅(jiān)實(shí)有力的科學(xué)依據(jù)。

馮力介紹，三聯(lián)活疫苗不是單單把三個(gè)病毒混在一起那么簡(jiǎn)單，為保證三個(gè)病毒混在一起效果不打折，在如何提高效價(jià)方面他們投入了大量的精力。此外，在疫苗株與野毒株的區(qū)分，包括檢驗(yàn)工作上他們同樣遇到了很多難題，但逢山開路、遇水搭橋，難點(diǎn)被他們一一解開。

通過堅(jiān)持不懈的攻關(guān)，他們發(fā)明了適應(yīng)傳代細(xì)胞系的安全性高、免疫原性好且具有獨(dú)特分子標(biāo)記的弱毒株，攻克了三種豬腹瀉病毒難以適應(yīng)細(xì)胞、致弱過程中免疫原性減弱、強(qiáng)弱毒株難以區(qū)分的世界性難題。在病毒致弱過程中，采用敏感細(xì)胞系和未吃初乳仔豬交替繼代，結(jié)合固相病毒蝕斑克隆及全基因組測(cè)序等技術(shù)，優(yōu)選安全性高、免疫原性好的克隆株，獨(dú)創(chuàng)了豬腹瀉病毒分離致弱體系，發(fā)明了安全、穩(wěn)定、免疫原性好并具有獨(dú)特分子標(biāo)記的三種弱毒株，為三聯(lián)活疫苗的創(chuàng)制及產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了關(guān)鍵性基礎(chǔ)。除此之外，他們創(chuàng)建的傳代細(xì)胞系替代原代細(xì)胞系的生產(chǎn)新工藝，突破了原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中外源病毒污染難以控制的技術(shù)瓶頸，能降低生產(chǎn)成本約2/3，為疫苗制造與檢驗(yàn)規(guī)程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了新路徑。

該項(xiàng)目產(chǎn)品2014年獲得國(guó)家二類新獸藥證書，并在2015年3月24號(hào)成功上市。為了將項(xiàng)目科研成果盡快應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)際，馮力及其團(tuán)隊(duì)深入基層，開展豬病毒性腹瀉防控知識(shí)合技術(shù)的宣傳，手把手將技術(shù)教給養(yǎng)殖戶和技術(shù)員。目前，三聯(lián)活疫苗已推廣到我國(guó)除臺(tái)灣、香港、澳門以外的所有省區(qū)市，累計(jì)推廣2560萬頭份，免疫覆蓋仔豬1.54億頭，實(shí)現(xiàn)銷售收入2.01億元。對(duì)三種病毒混合感染引起的腹瀉防控收到了很好的效果，斷奶仔豬數(shù)得到了提升，達(dá)到了一針免疫防控三種疫病的效果。同時(shí)，因?yàn)闇p少了免疫次數(shù)，降低了免疫勞動(dòng)強(qiáng)度，減少了免疫應(yīng)激，極大方便了免疫接種，受到使用者的一致好評(píng)。該項(xiàng)目成果相繼獲得國(guó)家發(fā)明專利2項(xiàng)；國(guó)家二類新獸藥證書1項(xiàng)；黑龍江省技術(shù)發(fā)明獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)1項(xiàng)，中國(guó)專利優(yōu)秀獎(jiǎng)1項(xiàng)，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院杰出科技創(chuàng)新獎(jiǎng)1項(xiàng)；制訂行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)2項(xiàng)；發(fā)表文章百余篇，并被Nature等雜志引用，極大地推動(dòng)了國(guó)內(nèi)外三種腹瀉病防控理論與技術(shù)體系的豐富和完善。