不同種類牛奶的致齲性研究

羅彥妮

九江學(xué)院附屬口腔醫(yī)院,江西省九江市 332000

齲病是口腔的常見病多發(fā)病，并已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康及生活質(zhì)量的疾病。牛奶在兒童成長(zhǎng)過程中扮演著重要的一角，牛奶中有些成分產(chǎn)生一定的防齲作用，但牛奶含有乳糖，現(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了牛奶中含有的乳糖存在一種潛在的致齲性，雖然乳糖比蔗糖的致齲作用要小，但是最近一項(xiàng)體外研究表明，牛奶具有與單獨(dú)乳糖相當(dāng)?shù)闹慢x水平，鑒于牛奶成分的復(fù)雜性，有可能推測(cè)其中一些成分的變化可能導(dǎo)致其致齲性[1]。盡管現(xiàn)在市面上有各種各樣牛奶類型，但是關(guān)于每種牛奶的致齲效果或牛奶當(dāng)中的成分和其致齲性如何變化的科學(xué)證據(jù)都很少，有關(guān)報(bào)道表示脂肪水平的變化也可能導(dǎo)致牛奶致齲性的變化，因?yàn)橹竞椭舅峋哂幸欢ǖ目过x作用，對(duì)防齲效果會(huì)產(chǎn)生一定影響，但不同濃度脂肪的牛奶具體致齲效果如何大多是未知的[2]。因此，本研究選取2017年1—4月我院收治的45例正畸兒童口中被拔除的前磨牙100顆為研究對(duì)象，比較市售不同脂肪濃度的牛奶在離體牙齒模型中的致齲性，并評(píng)估其對(duì)變形鏈球菌生物膜的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1—4月我院收治的45例正畸兒童口中被拔除的前磨牙100顆為研究對(duì)象。45例患兒中，男24例，女21例，年齡12～16歲，平均年齡(13±1.2)歲。將100顆前磨牙按照隨機(jī)數(shù)字表法分為脫脂牛奶組、半脫脂牛奶組、全脂牛奶組、10%蔗糖添加牛奶組、0.9%氯化鈉組共5組，每組20顆?；純杭{入標(biāo)準(zhǔn)：(1)兒童無齲齒；(2)家屬具有較強(qiáng)的預(yù)防保健意識(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有口腔潰瘍疾病的兒童；(2)患有心、肝、腎功能衰竭等疾病；(3)患有自閉癥的兒童。

1.2 研究方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料：選用因正畸而拔除的健康前磨牙，無菌消毒玻璃器皿，培養(yǎng)皿，便攜數(shù)字pH計(jì)(HI9126-02,Hanna儀器)耦合的微電極(HI 1083)恒溫箱，脫脂牛奶、半脫脂牛奶和全脂牛奶各50ml，添加10%的蔗糖牛乳、0.9%的氯化鈉溶液，次氯酸鈉消毒液，環(huán)氧乙烷消毒平板，金剛石盤，拋光盤，片切機(jī)，離心機(jī)，24孔板等。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法：使用牙釉質(zhì)牙本質(zhì)平板培養(yǎng)變形鏈球菌UA159的生物膜。每天將平板/生物膜暴露3次，以商業(yè)脫脂、半脫脂、全脂牛奶和10%蔗糖添加牛奶作為正面對(duì)照，以0.9%氯化鈉作為負(fù)面對(duì)照，分析生物膜的細(xì)菌數(shù)量、生物量、蛋白質(zhì)和多糖產(chǎn)量，通過表面顯微硬度的損失和培養(yǎng)基pH值測(cè)量生物膜的酸性來評(píng)估板坯的脫礦值。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)步驟：取牙齒片切成4mm×7mm×1mm的模型，再50g力下進(jìn)行壓痕，先用唾液浸泡形成生物膜，再放入變形鏈球菌培養(yǎng)，取牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)，再放入牛奶液中浸泡，每次浸泡5min，再測(cè)定變形鏈球菌的數(shù)量，牙釉質(zhì)的脫礦程度以及細(xì)菌數(shù)。具體步驟為：(1)板坯制備：牙齒儲(chǔ)存好并用次氯酸鈉消毒，用金剛石盤、片切機(jī)、拋光盤獲得牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)板(4mm×7mm×1mm)，初始SH通過3個(gè)相互間隔100μm的knop壓痕，以50g的力在ve秒下測(cè)定，為了保持相同的初始SH，只有SH為(361.51±11.17)kg/mm的牙釉質(zhì)和(58.04±6.24)kg/mm的牙本質(zhì)才選用。測(cè)量板坯最終的SH值，以估計(jì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間產(chǎn)生的脫礦量，SH的損失已被用廣泛用作評(píng)估脫礦值的可靠方法。環(huán)氧乙烷消毒平板，再用超濾10.22微型混合人工唾液覆蓋30min，以便在牙釉質(zhì)上形成獲得性薄膜利于細(xì)菌初始黏附。(2)生物膜變球練鏈菌在牙釉質(zhì)平板上生長(zhǎng)5d，并在牙本質(zhì)的平板上生長(zhǎng)4d，因?yàn)檠辣举|(zhì)相對(duì)牙釉質(zhì)更容易產(chǎn)生酸溶，出于這個(gè)原因，實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)度，牙本質(zhì)縮短了24h，較長(zhǎng)的牙本質(zhì)暴露時(shí)間會(huì)使得不能作為顯微硬度評(píng)估。為了模擬兒童常見的牛奶攝入的時(shí)間模式，每天使用3次，上午8：30，中午12：30，下午4：30，每次使用時(shí)間為5min，培養(yǎng)基每天換2次，第1次處理上午8點(diǎn)前，第2次處理為下午5點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)階段后，將生物膜與平板分離，并分析細(xì)菌的干重，可溶性的多糖，不可溶性的胞內(nèi)胞外多糖產(chǎn)生，再測(cè)定板坯中的SH與初始評(píng)估進(jìn)行比較，以獲得表面顯微硬度損失百分比(%SHL),通過每天2次培養(yǎng)基的pH測(cè)量，評(píng)估生物膜的產(chǎn)酸性。

1.3 觀察指標(biāo) 在相同條件的前提下，通過對(duì)變形鏈球菌的培養(yǎng)，計(jì)算實(shí)驗(yàn)后牙釉質(zhì)脫礦程度指數(shù)，測(cè)定變形鏈球菌生物膜ΔpH值(產(chǎn)酸水平)、變形鏈球菌生長(zhǎng)情況(OD600)來分析脫脂牛奶、半脫脂牛奶和全脂牛奶三種不同種類牛奶致齲性。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，各組均對(duì)牙釉質(zhì)脫礦和變形鏈球菌產(chǎn)酸有不同程度的影響，從全脂組到半脫脂組，再到脫脂組、再到蔗糖組，牙釉質(zhì)和牙本質(zhì)脫礦程度指數(shù)逐漸升高，且均高于對(duì)照組，每組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。變形鏈球菌生物膜ΔpH值和OD600逐漸升高，且均高于對(duì)照組，每組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。具體見表1。

表1 牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)脫礦程度指數(shù)、變形鏈球菌生物膜ΔpH值及其生長(zhǎng)情況比較

3 討論

根據(jù)我國(guó)2015年第四次口腔流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告顯示，12歲兒童恒牙齲病患病率為34.5%，比十年前上升了7.8個(gè)百分點(diǎn)，5歲兒童的乳牙齲的患病率為70.9%，比十年前升了5.8個(gè)百分點(diǎn)，其中農(nóng)村地區(qū)高于城鎮(zhèn)[3]。有報(bào)道指出，牛奶中的許多成分具有抗齲功能，包括鈣、磷酸鹽、脂肪、維生素、鐵、硼化物、碘化物和酶,同樣牛奶中白蛋白也具有抗齲作用[4]，這些蛋白質(zhì)導(dǎo)致口腔生物膜內(nèi)鈣和磷酸鹽增加，除白蛋白外，乳鐵蛋白、溶菌酶和乳中存在的抗體也具有抗齲作用。

鑒于牛奶成分的復(fù)雜性，有可能推測(cè)其中一些成分的變化可能導(dǎo)致其致齲性。盡管現(xiàn)在市面上有各種各樣牛奶類型，但是關(guān)于每種牛奶的致齲效果或牛奶當(dāng)中的成分和其致齲性如何變化的科學(xué)證據(jù)都很少，有關(guān)報(bào)道表示脂肪水平的變化也可能導(dǎo)致牛奶致齲性的變化，因?yàn)橹竞椭舅峋哂幸欢ǖ目过x作用，對(duì)防齲效果會(huì)產(chǎn)生一定影響[5-6]。

因此，本研究的目的是比較市售不同脂肪濃度的牛奶在離體牙齒模型中的致齲性，并評(píng)估其對(duì)變形鏈球菌生物膜的影響，結(jié)果顯示，各組均對(duì)牙釉質(zhì)脫礦和變形鏈球菌產(chǎn)酸有不同程度的影響，從全脂組到半脫脂組，再到脫脂組、再到蔗糖組，牙釉質(zhì)和牙本質(zhì)脫礦程度指數(shù)逐漸升高，且均高于對(duì)照組，每組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。變形鏈球菌生物膜ΔpH值和OD600逐漸升高，且均高于對(duì)照組，每組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。盡管牛奶中有些成分產(chǎn)生一定的防齲作用，但牛奶含有乳糖，現(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了牛奶中含有的乳糖存在一種潛在的致齲性牛奶效應(yīng)，雖然乳糖比蔗糖的致齲作用要小，但是一些體外研究表明[7-8]，牛奶具有與單獨(dú)乳糖相當(dāng)?shù)闹慢x水平。乳糖可能促進(jìn)變形鏈球菌生物膜的形成并促進(jìn)變形鏈球菌生長(zhǎng)，并降低對(duì)變形鏈球菌的產(chǎn)酸抑制作用，使ΔpH值升高。調(diào)味牛奶具有致齲性，蔗糖本身就具有致齲作用，再結(jié)合牛奶中的乳糖則加強(qiáng)了致齲性。因此提倡食用普通牛奶，并勸阻食用對(duì)牙齒有害的致齲飲料。無乳糖牛奶使得牙釉質(zhì)和牙本質(zhì)中發(fā)生低脫礦量，pH值保持在脫礦預(yù)值以上，由于這些產(chǎn)品被人們高度消費(fèi)，尤其是兒童，這些調(diào)查結(jié)果可能會(huì)引起口腔人士和公眾的高度關(guān)注。

目前國(guó)內(nèi)外的研究大多是研究各種菌類、糖類、氟制劑等對(duì)齲病的致病性和抑制性的研究，對(duì)于脂肪含量不同的牛奶的致齲性研究相關(guān)報(bào)道較少[9]。含益生菌是一種活的微生物，當(dāng)其用量足夠時(shí)，可為宿主帶來健康益處，兒童使用益生菌改善口腔健康可以使非致病菌取代致齲細(xì)菌，有益生菌的牛乳可有效預(yù)防齲齒。不添加糖的乳制品可以推薦為餐后甜點(diǎn)，特別是給兒童，這有助于降低齲齒的發(fā)生率[10]。

綜上所述，脂肪水平的變化也可能導(dǎo)致牛奶的致齲性的變化，與脫脂牛奶相比，全脂牛奶具有一定抗齲效果，另外，與沒有添加蔗糖的牛奶相比，添加了蔗糖的牛奶有一定的致齲性。所以應(yīng)提倡使用含脂牛奶，并勸阻使用對(duì)牙齒有害的致齲飲料。