植物源性食品中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留的LC-MS/MS檢測方法研究

司文帥，張 穎，張其才，韓奕奕，楊曉君，白 冰，宋衛(wèi)國*

(1上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，上海 201403；2上海健康醫(yī)學(xué)院，上海 201318；3上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，上海 201708)

氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰均為近幾年國內(nèi)外農(nóng)藥企業(yè)推出的高效、低毒新型農(nóng)藥，也是上海市農(nóng)業(yè)部門推薦使用的農(nóng)藥品種，被廣泛應(yīng)用于水果、蔬菜和糧食等作物。但是，目前在相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中無對應(yīng)的檢測方法，不利于上海地產(chǎn)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的監(jiān)測控制，所以十分有必要開展以上3種農(nóng)藥殘留快速、準(zhǔn)確的檢測方法研究。

目前，關(guān)于水果、蔬菜和糧食中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的殘留檢測方法主要有氣相色譜法[1]、液相色譜法[2-4]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5-6]和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-8]，前處理多采用固相萃取小柱和分散固相萃取凈化。本研究建立的分散固相萃取方法具有快速、簡單、高效的特點(diǎn)，結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)特點(diǎn)，可以提高氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留檢測的準(zhǔn)確度和精密度。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(電噴霧離子源，美國Waters公司)、BEH C18 色譜柱(1.7 μm，2.1 mm×100 mm，美國Waters公司)、MX-F渦動(dòng)混合器(中國DRAGONLAB公司)、5415D離心機(jī)(美國eppendorf公司)、無水MgSO4、C18和PSA凈化劑、0.22 μm有機(jī)濾膜(中國安譜公司)。

氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%，德國Dr.Ehrenstorfer公司)，乙腈和甲醇(色譜純，美國默克公司)；甲酸和乙酸銨(色譜純，美國默克公司)；實(shí)驗(yàn)室用水為一級水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配置

準(zhǔn)確稱取氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件

流動(dòng)相A為甲醇，B為10 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液；流速：0.4 mL/min；梯度洗脫程序：0 min，5%A；0—1.0min，95%A；1.0—3.0min，95%A；3.0—3.6min，5%A；3.6—4.0min，5%A。柱溫：45℃；進(jìn)樣量：5 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI)正離子模式；毛細(xì)管電壓：2.5 kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：450℃，霧化氣(氮?dú)?流速：1 000 L/h；錐孔氣(氮?dú)?流速：150 L/h；碰撞氣(氬氣)流速：0.11 L/h。

1.3.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取樣品10 g(精確到0.01 g)于50 mL離心管中，加入乙腈20 mL，高速渦旋混勻20 min，然后加入氯化鈉約5 g，立即渦旋混勻約30 s，于8 000 r/min離心5 min，上清液備用。

吸取提取液約1.5 mL于加有無水硫酸鎂150 mg、C1850 mg和PSA 50 mg的2 mL塑料離心管中，渦流混勻30 s后于8 000 r/min離心5 min。取上清液0.5 mL，加一級水0.5 mL，混勻，過0.22 μm濾膜后LC-MS/MS測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取與凈化

在水稻、西瓜、青菜、番茄和黃瓜5種樣品中添加氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(添加水平20 μg/kg)，對比水、乙腈和0.2%甲酸乙腈3種溶劑的提取效果。結(jié)果表明：水溶液中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺回收率分別為7%、6%、4%；而乙腈和0.2%甲酸乙腈溶液中3種農(nóng)藥的平均提取回收率分別約為95%、96%，無明顯差異，因此確定用20 mL乙腈為提取溶液。

稱取加標(biāo)樣品10g(添加水平20 μg/kg)，按照1.3.3所述方法處理，比較幾種凈化材料對樣品的凈化效果(表1)。綜合考慮回收率和凈化效果，本試驗(yàn)選擇150 mg無水MgSO4、50 mg C18和50 mg PSA對樣品進(jìn)行凈化。

2.2 質(zhì)譜和液相條件的優(yōu)化

在全掃描采集模式下，對比正、負(fù)離子模式下氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的響應(yīng)，結(jié)果表明：正離子模式下，氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的響應(yīng)高于負(fù)離子模式時(shí)的響應(yīng)，因此選取電噴霧正離子模式作為電離模式。在MS/MS模式下，以[M+H]+離子為母離子得到二級碎片離子的全掃描質(zhì)譜圖，選擇豐度相對高和相對分子質(zhì)量較大的碎片離子，優(yōu)化碰撞能量，以化合物的特征碎片離子的靈敏度達(dá)到最大時(shí)的碰撞能量為最佳碰撞能量，最終質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表1 凈化材料比較

表2 氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺MS參數(shù)

分別以甲醇-10mmol/L乙酸銨水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、甲醇-10 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液和甲醇-水溶液作為流動(dòng)相，考慮不同流動(dòng)相對待測化合物測定的影響。當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-10 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液時(shí)，氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的峰型最好,儀器響應(yīng)最佳。

表3 線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

2.3 線性范圍

表3結(jié)果表明，在2—100 μg/L范圍內(nèi)，氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的濃度與儀器響應(yīng)呈良好線性，r2>0.998，方法檢出限為2 μg/kg，定量限為5 μg/kg。

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精確度測定

在水稻、西瓜、青菜、番茄和黃瓜中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺添加濃度分別為10 μg/kg、20 μg/kg和40 μg/kg時(shí)，測定計(jì)算結(jié)果顯示，方法的回收率為88.2%—107.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%—8.2%(表4—6)。試驗(yàn)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均可以滿足分析方法要求。

表4 氟吡菌胺的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

表6 氯蟲苯甲酰胺的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留可以用LC-MS/MS方法進(jìn)行分析，樣品經(jīng)乙腈渦旋提取20 min，采用無水MgSO4、PSA和C18分散固相萃取凈化，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜外標(biāo)法定量。在水稻、西瓜、青菜、番茄和黃瓜中該方法的3個(gè)濃度添加回收率為88.2%—107.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%—8.2%，能滿足植物源性食品中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留分析的要求，可以用于市場監(jiān)測和風(fēng)險(xiǎn)評估，保障消費(fèi)者食品安全。