口蹄疫O型抗體不同檢測方法的比較和分析

口蹄疫病毒以傳播速度之快，發(fā)病率之高被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)和聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)將其列為A類烈性傳染病之首，我國將其列為一類傳染病首位。目前，發(fā)達(dá)國家控制FMD主要采取撲殺，無害化處理等措施，從源頭控制FMD的流行；亞洲、非洲、歐洲一些國家主要以疫苗免疫來防控口蹄疫的發(fā)生與流行。疫苗免疫后抗體效價的評價，這就需要根據(jù)免疫計劃，定時采血評價免疫效果。以下是本實驗室通過三種試劑盒對同一批血樣檢測結(jié)果的分析。

正向間接血凝試驗是將抗原吸附(致敏)于與免疫無關(guān)的顆粒性載體(紅細(xì)胞)表面，然后與相應(yīng)的抗體作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下發(fā)生肉眼可見的特異性凝集現(xiàn)象。在基層動物防疫工作中，由于各方面條件不足，為了準(zhǔn)確進(jìn)行免疫效果評估和疫情預(yù)測，正向間接血凝試驗成為小型養(yǎng)殖戶和基層首選的試驗方法。

正向間接血凝（HIA）、液相阻斷ELISA、金標(biāo)試紙條是現(xiàn)階段常用的口蹄疫O型抗體檢測方法，但在實際應(yīng)用中過程中仍存在某些問題，主要是不同檢測方法的檢測結(jié)果存在差異，造成結(jié)果解釋困難。為更好分析實際檢測結(jié)果，科學(xué)理解和選擇檢測方法，本試驗選用了3種不同的檢測方法進(jìn)行對比試驗，對口蹄疫O型抗體不同檢測方法之間的一致性和差異性結(jié)果進(jìn)行了詳細(xì)全面分析。

一、材料與方法

1.待檢血樣。規(guī)模化豬場提供豬血清共計100份，除去溶血和其他可用檢測血清48份。

2.檢測試劑。（1）正向間接血凝方法抗原、陽性血清、陰性血清由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司研發(fā)部提供；（2）口蹄疫病毒O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號為20180103101-1；（3）口蹄疫O型抗體金標(biāo)檢測試劑盒。

3.判定標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)各試劑盒操作規(guī)程，最終試驗數(shù)據(jù)依據(jù)各說明書判定標(biāo)準(zhǔn)確定。

正向間接血凝抗體效價≥1：25判定為免疫合格；

液相阻斷 ELISA抗體（豬）效價≥1∶64，保護(hù)率達(dá)到99%判定為免疫合格；

待檢血清稀釋至1∶16，檢測試紙條質(zhì)控帶顯示紅色條帶（質(zhì)控帶不顯示紅色視為無效），檢測帶也顯示紅色條帶視為陽性；及判定為免疫合格；檢測帶不顯示紅色條帶視為陰性；判定為免疫不合格。

二、結(jié)果

表1 金標(biāo)試紙條、間接血凝、液相ELISA檢測豬O型口蹄疫免疫抗體結(jié)果

表2 豬血清樣品抗體檢測效價

[續(xù)表]

表3 間接血凝和液相阻斷ELISA方法檢測結(jié)果的一致性比較

表4 間接血凝和液相阻斷ELISA方法檢測結(jié)果的一致性比較

通過實驗數(shù)據(jù)；間接血凝和金標(biāo)試紙條與液相阻斷ELISA檢測的結(jié)果基本相近，符合率都在95%以上。

三、分析

間接血凝試驗雖具有使用儀器設(shè)備少操作簡便快速，抗原價格較低等優(yōu)點，但在結(jié)果判定上存在一定的主觀性，實驗員的判斷力不一樣，就很有可能出現(xiàn)不同的結(jié)果，即便對于同一操作者，每次的試驗判斷結(jié)果都可能有一定的偏差，而且間接血凝試驗對血樣的要求較高，不同批次試劑穩(wěn)定性也常不一。這就導(dǎo)致檢測結(jié)果與液相阻斷ELISA有一定的偏差，符合率也就有了出處。金標(biāo)試紙作為一種新的檢測方法，具有方便快捷，特異敏感，穩(wěn)定性強(qiáng)，不需要特殊設(shè)備和試劑，結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點，因此特別對中小養(yǎng)殖戶對豬、牛及羊最佳免疫加強(qiáng)期的確定及免疫后抗體評估十分方便。

四、討論

目前預(yù)防和控制口蹄疫的主要方法依然是疫苗免疫接種通過免疫接種提高畜群整體抗體水平是預(yù)防口蹄疫的重要手段，抗體水平監(jiān)測是對免疫效果的直觀評估，免疫動物血清抗體越高，保護(hù)率越好。以上采用的三種評估免疫抗體的方法都有自身的利弊：其中間接血凝試驗，溫度對其影響很大，主要是由于溫度較高時，抗原抗體結(jié)合速度較快，所以血凝較快，不易掌握觀察時間，且易判為假陽性，判定時需要與對照孔反復(fù)比較。金標(biāo)試紙條對不同性質(zhì)，不同動物的血清清檢測，靈敏度有所差異，同時是由于金標(biāo)試紙的半定量特性決定，在一定范圍檢測的顯色強(qiáng)度不會改變；但當(dāng)超過一定的范圍顯色強(qiáng)度改變明顯，對血清抗體的判定有一定干擾，用金標(biāo)試紙條法確定不同免疫動物的抗體效價進(jìn)而來確定最佳免疫期是必須要稀釋三個以上滴度。液相阻斷ELISA靈敏性和特異性高，重復(fù)性好，結(jié)果判定科學(xué)且不受檢驗人員主觀性影響，但要求技術(shù)人員操作熟練，使用儀器設(shè)備多，操作步驟繁瑣，試驗所需時間長，且試劑價格稍貴。