羅布麻茶黃酮的分離富集及其抗氧化、抗疲勞活性

,*

(1.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院,青海西寧 810016; 2.青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院,青海西寧 810016)

羅布麻(ApocynumvenetumL.),屬于夾竹桃科多年生宿根草本植物,分為紅麻和白麻兩種,也被稱為野麻、茶葉花、澤漆麻等[1],廣泛生長在鹽堿和沙漠等地帶,主要集中在新疆、內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏、青海等地區(qū),最早在新疆羅布泊發(fā)現(xiàn),故取名為羅布麻[2]。據(jù)董正鈞[3]考證,羅布麻是一種傳統(tǒng)的藥用植物,即明代《救荒本草》中記載的澤漆,書中寫到 “采摘嫩葉,用鍋蒸,再曬干做茶吃亦可”。羅布麻茶是羅布麻的干燥葉,其飲用歷史已有3000多年[4]。相關(guān)研究證實(shí)羅布麻具有廣泛的藥理功效,如抗疲勞、降血壓及抗氧化等作用[5-6],因此其天然綠色的抗氧化、抗疲勞活性成分日益受到研究學(xué)者的青睞[7]。

隨著國內(nèi)外學(xué)者對(duì)羅布麻研究的深入,發(fā)現(xiàn)黃酮化合物是羅布麻發(fā)揮其功能作用的主要成分[8-9]。王亞寧[10]對(duì)新疆羅布麻花中的黃酮進(jìn)行了研究,結(jié)果表明其黃酮具有顯著的降血脂功效;徐天資等[11]對(duì)黃秋葵黃酮采用小鼠負(fù)重游泳進(jìn)行抗疲勞活性研究,發(fā)現(xiàn)黃秋葵黃酮能顯著延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間,具有抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用;Geetha等[12]研究了沙棘粗黃酮的抗氧化活性,證明了沙棘中粗黃酮具有保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷和清除自由基的作用。

青藏高原羅布麻資源豐富,但尚未進(jìn)行開發(fā)利用,青藏高原高寒缺氧,特殊生境下羅布麻化學(xué)成分積累及生物活性可能具有其獨(dú)特性。目前關(guān)于青藏高原特殊生境中羅布麻化學(xué)成分及藥理活性研究還未見報(bào)道,本論文以青海地區(qū)羅布麻茶為原料,選用不同柱色譜材料對(duì)羅布麻茶黃酮進(jìn)行分離富集,并分別通過自由基清除率的測定和小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)對(duì)其體外抗氧化活性及體內(nèi)抗疲勞作用進(jìn)行評(píng)價(jià),以期為青藏高原地區(qū)羅布麻功能性食品的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

羅布麻茶 采自青海貴德,自制成茶;SPF級(jí)昆明小鼠 雄性,體重18～22 g,購于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所,合格證號(hào):SCXK(甘)2015-0001;蘆丁(≥98%) 上海金穗生物科技有限公司;ABTS(2′-聯(lián)氨-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)、DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼) 南京奧多富尼生物科技有限公司;肌糖原(MG)、肝糖原(LG)、血清尿素氮(BUN)、乳酸脫氫酶(LDH)、考馬斯亮藍(lán)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)等測試盒 南京建成生物工程研究所;D101、D218、D315、AB-8、HPD-600、聚酰胺樹脂 江蘇長豐化工有限公司;呀啦嗦牌紅景天膠囊 青?？灯丈锟萍脊煞萦邢薰?無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、亞硝酸鈉、硝酸鋁等 天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

14-0807型超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司;UV-2600型紫外可見分光光度計(jì) 日本島津有限公司;SM600型酶標(biāo)儀 上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司;ZF-1型紫外分析儀 杭州齊威儀器有限公司;H/T16MM型離心機(jī) 湖南赫西儀器裝備有限公司;XW-80A型漩渦混勻器 上海馳唐電子有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 羅布麻茶黃酮粗提物的制備 稱取300 g羅布麻茶,粉碎后過60目篩,按照1∶20 (g/mL)的料液比加入70%的乙醇溶液,在溫度60 ℃,功率 180 W條件下超聲提取40 min,過濾,濾液濃縮至約100 mL,加入石油醚萃取除色素,水相用乙酸乙酯萃取,收集乙酸乙酯層,濃縮至膏狀,備用。

1.2.2 靜態(tài)吸附試驗(yàn) 參考閔建華[13]的方法。分別稱取D101、D218、D315、AB-8、HPD-600、聚酰胺樹脂各5.0 g,加入50 mL羅布麻茶黃酮粗提液,搖勻,靜置吸附24 h,得到吸附液,測定黃酮含量;吸附后的樹脂加入80%乙醇溶液,解吸24 h,得到醇洗液,測定黃酮含量,分別計(jì)算吸附率和解吸率。

式(1)

式(2)

式中:c1-上樣液中黃酮的質(zhì)量濃度;V1-上樣液的體積;c2-吸附液中黃酮的質(zhì)量濃度;V2-吸附液的體積;c3-醇洗液中黃酮的質(zhì)量濃度;V3-醇洗液的體積。

1.2.3 黃酮質(zhì)量濃度的測定 參照李艷提等[14]的方法,采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉體系顯色法。以蘆丁為標(biāo)品,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=25.165x+0.054,R2=0.9925。取0.04 g/mL羅布麻茶黃酮粗提液 1 mL置于10 mL容量瓶,加入5%的NaNO2溶液0.3 mL,搖勻,靜置6 min,再加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL,搖勻,靜置6 min,最后再加入4%的NaOH溶液4 mL,定容至刻度,于333 nm波長下測定吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中黃酮質(zhì)量濃度。

式(3)

式中:C為樣品黃酮濃度,mg/mL;V為樣液體積，50 mL;n為稀釋倍數(shù);M為樣品質(zhì)量,g。

1.2.4 羅布麻茶黃酮的富集 選用靜態(tài)吸附試驗(yàn)優(yōu)選的柱材料,采用濕法裝柱,將羅布麻茶黃酮粗提物沿柱壁緩慢加入,待其充分吸附后,依次用蒸餾水、30%、50%、70%、90%、100%乙醇梯度洗脫,每個(gè)梯度洗脫至流出液無色為止,毛細(xì)管吸取少量洗脫液點(diǎn)樣于濾紙上,噴涂1%三氯化鋁乙醇液顯色,置于365 nm紫外燈下觀察熒光,收集檢測斑點(diǎn)顯黃色的洗脫液,旋蒸濃縮至50 mL后,于-55 ℃條件下真空冷凍干燥,得羅布麻茶黃酮粉末,4 ℃保存,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 羅布麻茶黃酮體外抗氧化活性研究

1.2.4.1 ABTS自由基清除率的測定 參考Zhang Hua等[15]的方法。稱取0.197 g ABTS溶于50 mL蒸餾水中,加入過硫酸鉀,使溶液濃度達(dá)到2.4 mmol/L,在室溫、避光條件下混勻攪拌16 h后,用PBS磷酸緩沖溶液(pH=7.0)將其稀釋至734 nm處吸光度值達(dá)0.700±0.005。以VC為陽性對(duì)照,將上述羅布麻茶黃酮粉末用蒸餾水稀釋至不同濃度(0.05、0.09、0.19、0.38、1.50、3.00、6.00、12.00 mg/mL)后,分別與ABTS溶液按1∶20混勻,室溫反應(yīng)6 min后,于734 nm處測定吸光值,計(jì)算公式如下:

式(4)

式中:A0為空白對(duì)照組吸光度值;A1為樣品溶液吸光度值。

1.2.4.2 DPPH自由基清除率的測定 參考秦嫚嫚等[16]的方法,以VC為陽性對(duì)照,分別移取1.5 mL不同濃度的羅布麻茶黃酮樣品溶液(稀釋系列為0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.70 mg/mL),加入1.5 mL 0.2 mmol/L的DPPH乙醇溶液,在漩渦混勻器上搖勻,室溫、避光靜置60 min后,于518 nm處測定吸光度值,計(jì)算公式同1.2.4.1。

1.2.4.3 羥自由基清除率測定 參考Daniela等[17]的方法。將羅布麻茶黃酮樣品稀釋至不同濃度后(稀釋系列為0.0375、0.075、0.15、0.30、0.60、1.20 mg/mL),依次加入0.03% H2O2標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液和0.03% FeSO4溶液各0.20 mL;最后加入0.03%水楊酸乙醇溶液0.20 mL,充分混勻后,于550 nm處測定吸光值,以VC為陽性對(duì)照,計(jì)算公式同1.2.4.1。

1.2.4.4 鐵離子還原法(FRAP)試驗(yàn) 參考李麗紅[18]的方法。先將NaAc-HAc緩沖液(pH=3.6,300 mmol/L)、10 mmol/L TPTZ和20 mmol/L FeCl3溶液按體積10∶1∶1配制成FRAP工作液。分別吸取4.50 mLFRAP工作液加入到150 μL不同濃度(0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L)的FeSO4溶液中混合,37 ℃水浴條件下反應(yīng)10 min,于593 nm處測定吸光度值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為:y=0.7937x+0. 0548(R2=0.9961)。

取羅布麻茶樣品溶液將其調(diào)整為10 mg/mL,各取150 μL按上述方法進(jìn)行分析測定,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得相同吸光值處對(duì)應(yīng)的FeSO4濃度,還原力用對(duì)應(yīng)的FeSO4濃度(μmol/L)表示,以95%乙醇作為空白對(duì)照,50 μg/mL VC溶液作為陽性對(duì)照,計(jì)算公式如下:

抗氧化能力=OD樣品-OD空白

式(5)

1.2.5 羅布麻茶黃酮抗疲勞活性研究

1.2.5.1 動(dòng)物分組及給藥 將小鼠進(jìn)行1周的適應(yīng)性喂養(yǎng),溫度(24±1) ℃、濕度40%±2%,12 h光照/12 h黑暗,按嚙齒動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)提供食物和飲用水。隨機(jī)分為空白對(duì)照組(雙蒸水)、紅景天陽性對(duì)照組(100 mg/kg bw)、羅布麻茶黃酮低、中高劑量組(50、100、200 mg/kg bw),每組10只,各組小鼠每天定時(shí)、定量灌胃一次,連續(xù)喂養(yǎng)21 d,并每周記錄小鼠體重變化情況。

1.2.5.2 負(fù)重游泳試驗(yàn) 末次灌胃30 min后,在每組小鼠的尾部負(fù)荷重量為體重5%的鉛皮,將其放入水溫為(26±2) ℃、50 cm×40 cm×40 cm的水箱中游泳,直至小鼠的頭沉入水中,經(jīng)8 s后不能露出水面視為力竭,用秒表記錄小鼠從開始游泳至力竭的時(shí)間[19]。

1.2.5.3 生理生化指標(biāo)的測定 小鼠負(fù)重游泳休息30 min后摘眼球取血,脫頸椎處死,解剖,取出各臟器(心、肝、脾、腎)并記錄濕重。將全血以(3500 r/min,4 ℃)離心10 min以獲取血清樣本,嚴(yán)格按照試劑盒方法測定糖原、血乳酸(LD)和血尿素氮(BUN)指標(biāo);肝組織經(jīng)生理鹽水處理后,采用考馬斯亮藍(lán)試劑盒測定其蛋白含量,并嚴(yán)格按照試劑盒操作說明測定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)含量。

1.3 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 樹脂的篩選

以D101、D218、D315、AB-8、HPD600 5種大孔吸附樹脂和聚酰胺樹脂的吸附率和解吸率為考察指標(biāo)。如表1所示,不同類型的樹脂極性、孔徑和比表面積不同[20],導(dǎo)致了對(duì)黃酮類化合物吸附強(qiáng)弱有差異,其中聚酰胺樹脂對(duì)黃酮吸附效果最好,吸附率達(dá)65.08%±0.26%,解吸率達(dá)41.27%±0.18%,可能是因?yàn)榫埘０肥且活惛叻肿泳酆衔?結(jié)構(gòu)中含有重復(fù)單位酰胺鍵(-CONH-),可以與含有酚羥基的黃酮形成氫鍵締合進(jìn)而產(chǎn)生吸附作用[20]。所以優(yōu)選聚酰胺樹脂對(duì)羅布麻茶黃酮進(jìn)行富集。

表1 不同樹脂對(duì)羅布麻茶黃酮的靜態(tài)吸附與解吸附性能Table 1 Absorption and desorption capabilities of different macroreticular resins to total flavoids

2.2 羅布麻茶黃酮體外抗氧化活性結(jié)果

2.2.1 羅布麻茶黃酮對(duì)ABTS+·清除率的測定 ABTS+·是一種醇液呈藍(lán)綠色的亞穩(wěn)態(tài)離子,可使黃酮類化合物褪色,且褪色程度越好,表明自由基清除能力越強(qiáng),常用于機(jī)體抗氧化能力評(píng)價(jià)[21]。由圖1可知,羅布麻茶黃酮對(duì)ABTS+·清除能力隨著質(zhì)量濃度的增加而升高,在12 mg/mL處達(dá)到98.2%±0.16%,與同濃度下陽性對(duì)照組VC的清除效果相當(dāng),表明羅布麻茶黃酮對(duì)ABTS+·清除作用較強(qiáng)。

圖1 羅布麻茶黃酮對(duì)ABTS+·清除率的影響Fig.1 Effect of Apocynum venetum flavone on ABTS+· clearance rate

2.2.2 羅布麻茶黃酮對(duì)DPPH自由基清除率的測定 由圖2可知,羅布麻茶黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用隨著質(zhì)量濃度的增加而上升,當(dāng)濃度達(dá)到0.20 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH·清除率達(dá)98.5%±0.18%,優(yōu)于同濃度下陽性對(duì)照組VC,并且之后隨濃度增加,DPPH·清除率呈現(xiàn)穩(wěn)定趨勢。

圖2 羅布麻茶黃酮對(duì)DPPH·清除率的影響Fig.2 Effect of Apocynum venetumflavone on DPPH· clearance rate

2.2.3 羅布麻茶黃酮對(duì)羥自由基清除率的測定 ·OH是一種對(duì)人體危害較大的活性氧自由基[22]。由圖3可知,在一定濃度范圍下,羅布麻茶黃酮對(duì)羥自由基的清除能力隨質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng),在1.20 mg/mL時(shí)清除率高達(dá)84.9%±0.21%,略低于陽性對(duì)照組VC。

圖3 羅布麻茶黃酮對(duì)羥自由基清除率的影響Fig.3 Effect of Apocynum venetum flavone on hydroxyl radical clearance rate

2.2.4 羅布麻茶黃酮鐵離子還原力的測定結(jié)果 由圖4可知,隨著質(zhì)量濃度的增加羅布麻茶黃酮的鐵離子還原力逐漸增加,當(dāng)黃酮濃度為3.20 mg/mL時(shí),鐵離子還原能力為(865.82±0.0)5 μmol/L FeSO4,僅與0.08 mg/mL VC的鐵離子還原力相當(dāng),可見羅布麻茶中的黃酮具有一定的鐵離子還原能力,但是作用效果與VC相比還是有較大的差距,說明羅布麻茶黃酮抗氧化作用主要表現(xiàn)在對(duì)ABTS及DPPH自由基的清除方面,這可能是羅布麻茶黃酮結(jié)構(gòu)更易與自由基發(fā)生反應(yīng),而與鐵離子相互作用相對(duì)較弱的原因。

圖4 羅布麻茶黃酮對(duì)鐵離子還原力的影響Fig.4 Effect of Apocynum venetum flavone on iron ion reduction ability

2.3 羅布麻茶黃酮抗疲勞試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠體重的影響 如表2所示,灌服不同劑量的羅布麻茶黃酮21 d后,各劑量組小鼠的體重均穩(wěn)步增長。第三周試驗(yàn)結(jié)束時(shí),各劑量組小鼠體重與空白對(duì)照組相比均無顯著差異(P>0.05)。

表2 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠體重的影響Table 2 Effect of Apocynum venetum flavone on body weight of mice

2.3.2 羅布麻茶黃酮對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠臟器濕重的影響 由表3可知,灌服不同劑量的羅布麻茶黃酮21 d后,解剖稱量各組小鼠臟器濕重,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,各劑量組小鼠臟器濕重與空白對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)。表明灌胃不同劑量的羅布麻茶黃酮,并沒有對(duì)小鼠各臟器產(chǎn)生異常變化。

表3 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠臟器濕重的影響Table 3 Effect of Apocynum venetum flavone on wet weight of mice

2.3.3 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間和肝組織蛋白含量的影響 運(yùn)動(dòng)耐力是評(píng)價(jià)機(jī)體抗疲勞能力的重要指標(biāo),而負(fù)重游泳試驗(yàn)是測定運(yùn)動(dòng)性疲勞程度最有效和最常用的試驗(yàn)方法[23]。由表4可知,與空白對(duì)照組比較,除羅布麻茶黃酮低劑量組外,中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間均有所延長,且隨著灌胃劑量的增加,小鼠游泳時(shí)間也逐漸延長,效果與灌胃劑量呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。

表4 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠游泳時(shí)間和肝組織蛋白含量的影響 Table 4 Effect of Apocynum venetum flavone on swimming time and protein content in liver tissue of mice

與空白對(duì)照組相比,羅布麻茶黃酮低劑量組與中劑量組均無顯著性差異,這可能與劑量選擇有關(guān)也可能與小鼠個(gè)體差異有關(guān),尤其是羅布麻茶黃酮中劑量組,小鼠負(fù)重游泳時(shí)間最高值可達(dá)190.42 min,而最低值只有109.92 min,小鼠個(gè)體間差異較大,究竟是個(gè)體差異造成的還是劑量選擇欠佳造成的其具體機(jī)制可能需要通過大量實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步深入研究。另外,灌胃不同濃度的羅布麻茶黃酮21 d后,測定小鼠肝組織蛋白含量,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,各劑量組小鼠蛋白含量與空白對(duì)照組比均無顯著差異(P>0.05),表明羅布麻茶黃酮具有延緩運(yùn)動(dòng)性疲勞產(chǎn)生的作用,且藥物對(duì)小鼠肝組織蛋白無顯著影響。

2.3.4 羅布麻茶黃酮對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠肝糖原和肌糖原含量的影響 研究表明,運(yùn)動(dòng)引起的體力耗竭和肌糖原的消耗是同時(shí)發(fā)生的,在運(yùn)動(dòng)過程中,隨著肌糖原不斷被消耗,機(jī)體為了維持正常血糖水平,消耗肝糖原從而使肝糖原的含量降低[24]。由表5可知,灌胃羅布麻茶黃酮中、高劑量組小鼠的肝糖原和肌糖原含量均有所上升,其中羅布麻茶黃酮高劑量組顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05),且效果優(yōu)于陽性對(duì)照組。

表5 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠糖原的影響 Table 5 Effect of Apocynum venetumflavone on glycogen in mice

2.3.5 羅布麻茶黃酮對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠全血乳酸(LD)和血清尿素氮(BUN)、乳酸脫氫酶(LDH)的影響 運(yùn)動(dòng)過程中由于供氧不足,肌肉產(chǎn)生乳酸,滲透進(jìn)入血液,導(dǎo)致血乳酸含量上升,而乳酸的減少依賴于乳酸脫氫酶的參與,它可以將乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸,減少乳酸的積累,從而延緩疲勞的產(chǎn)生[25]。另一方面,當(dāng)機(jī)體不能通過一定的途徑獲得足夠的能量時(shí),蛋白質(zhì)和氨基酸的分解代謝會(huì)增強(qiáng),血清尿素氮含量也隨之增加[26]。由表6可知,3個(gè)劑量組小鼠的LD含量均極顯著低于空白對(duì)照組(P<0.01),其中羅布麻茶黃酮高劑量組LD含量低于陽性對(duì)照組;且各劑量組小鼠的BUN含量也均比空白對(duì)照組低(P<0.01),其中羅布麻茶黃酮高劑量組效果更佳;而3個(gè)劑量組小鼠的LDH活力均有一定程度提高。說明羅布麻茶黃酮能夠降低運(yùn)動(dòng)后小鼠全血乳酸和血尿素氮含量,提高乳酸脫氫酶活力,加速乳酸的清除。

表6 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠LD、BUN和LDH的影響 Table 6 Effect of Apocynum venetum flavone on LD,BUN and LDH in mice

2.3.6 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響 自由基理論表明,疲勞的產(chǎn)生是由于自由基攻擊線粒體等生物膜,導(dǎo)致膜流動(dòng)性受損和能量代謝發(fā)生紊亂,進(jìn)而導(dǎo)致疲勞[27]。超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)負(fù)責(zé)清除體內(nèi)的氧自由基,它是機(jī)體內(nèi)主要的抗氧化酶,能直接反映機(jī)體的抗氧化水平,而丙二醛是自由基引起脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物之一,可間接顯示機(jī)體清除氧化產(chǎn)物能力和抗氧化活性[28]。如表7所示,各劑量組小鼠的SOD活性均極顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01),其中羅布麻茶高劑量組SOD活性最高,優(yōu)于陽性對(duì)照組;并且3個(gè)劑量組小鼠的GSH-PX活性與空白對(duì)照組相比也都有所提高,其中羅布麻茶黃酮高劑量組效果最佳,GSH-PX活性極顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01);并且3個(gè)劑量組小鼠的MDA含量都有一定程度的降低,羅布麻茶黃酮高劑量組MDA含量極顯著低于空白對(duì)照組(P<0.01)。表明羅布麻茶黃酮能提高力竭游泳后小鼠SOD和GSH-PX的抗氧化酶活性,降低MDA含量,尤其羅布麻茶黃酮高劑量組效果最佳。

表7 羅布麻茶黃酮對(duì)小鼠肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響 Table 7 Effect of Apocynum venetum flavone on oxidative stress index in mice

3 結(jié)論

本論文首次對(duì)青海地區(qū)羅布麻茶黃酮進(jìn)行分離富集和抗氧化、抗疲勞活性研究,發(fā)現(xiàn)聚酰胺樹脂對(duì)羅布麻茶黃酮不僅富集效果好,且得到的總黃酮抗氧化和抗疲勞活性較強(qiáng),其對(duì)羅布麻茶黃酮的吸附率達(dá)65.08%、解吸率達(dá)41.27%,明顯高于其余5種大孔吸附樹脂,研究結(jié)果可為羅布麻茶黃酮富集提供一定參考。

體外抗氧化活性試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)羅布麻茶黃酮濃度為0.20 mg/mL時(shí),其對(duì)DPPH自由基清除率達(dá)98.5%±0.18%,優(yōu)于同濃度下陽性對(duì)照組VC,具有良好的抗氧化能力,具備開發(fā)成新型天然抗氧化劑的潛力?？蛊诨钚栽囼?yàn)發(fā)現(xiàn),羅布麻茶黃酮能延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間,提高糖原的儲(chǔ)備能力,降低血清尿素氮含量,緩解肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)等,部分生化指標(biāo)測定結(jié)果優(yōu)于紅景天陽性對(duì)照組,且與小鼠藥物灌胃劑量呈一定依賴關(guān)系。結(jié)合體外抗氧化活性指標(biāo)推測其抗疲勞作用有可能主要通過增強(qiáng)氧化應(yīng)激能力來實(shí)現(xiàn),羅布麻茶黃酮體外清除自由基能力越強(qiáng)時(shí),體內(nèi)抗氧化酶系活力越高,越能有效地降低脂質(zhì)過氧化造成的細(xì)胞損傷,從而有效緩解疲勞。

此外,羅布麻生長在高寒缺氧地區(qū)可能會(huì)提高其耐缺氧能力,長期低氧適應(yīng)性賦予其較強(qiáng)的抗氧化抗疲勞功能作用。青藏高原羅布麻資源豐富,本研究可為高原地區(qū)羅布麻抗氧化抗疲勞功能性食品的開發(fā)提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)支撐,促進(jìn)該資源的開發(fā)利用。