青海地區(qū)產(chǎn)共軛亞油酸乳酸菌分離及其對青貯全株玉米品質(zhì)的影響

陳麗娟，張正友，蔡曉劍，張?jiān)迫A

（1. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036；2. 青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院土壤肥料研究所，青海 西寧 810016；3. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，安徽 合肥 230036）

共軛亞油酸 (conjugated linoleic acid，CLA)是指含有共軛雙鍵的十八碳二烯酸同分異構(gòu)體的混合物的天然活性物質(zhì)，該類物質(zhì)具有抗癌、預(yù)防心血管疾病、減脂等功能作用[1-3]，其中c9，c11-和c10，c12-兩種異構(gòu)體在CLA的生物學(xué)功能中具有重要作用[4-5]。CLA來源主要有人工合成和生物體天然合成兩種，人工合成CLA含有c9，c11-和c10，c12-兩種活性異構(gòu)體含量較低，同時(shí)人工合成存在環(huán)境污染及成本較高問題，因此人工合成CLA難以推廣使用；而乳制品中c9，c11-可占總CLA含量的73%～93%，牛肉中c9，c11-占總CLA的比例為57%～85%[6-7]。目前人類主要通過攝取反芻動(dòng)物畜產(chǎn)品牛奶、牛肉等食物來獲取部分CLA，但這些天然畜產(chǎn)品中CLA的含量達(dá)不到人體理想的需求量[8-10]。因此，研究如何提高畜產(chǎn)品中CLA含量對提升畜產(chǎn)品的品質(zhì)具有十分重要的科學(xué)與實(shí)際意義。

畜產(chǎn)品中CLA的含量受動(dòng)物機(jī)體內(nèi)源酶、消化道微生物作用以及飼料組成成分的影響[11-14]。不同動(dòng)物體內(nèi)CLA內(nèi)源酶的合成或酶活性存在一定的差異，在短時(shí)間內(nèi)很難得以提高。動(dòng)物消化道存在各種有益的微生物，其中一些微生物參與CLA的合成，但在消化道這樣一個(gè)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境中，很難通過改變某類微生物含量來提高其CLA產(chǎn)量。因此，在飼糧中通過外源添加CLA提高畜產(chǎn)品中的CLA含量具有一定可行性。在母豬飼糧中添加1% CLA，其背部最長肌中CLA的含量顯著增加[15]。ISMAIL M M 等[16]利用含有CLA 的飼草每日飼喂奶牛，發(fā)現(xiàn)奶牛的生產(chǎn)胎數(shù)和產(chǎn)奶量顯著提高，同時(shí)牛乳中CLA含量也顯著增加，有效改善了牛奶品質(zhì)。但由于純化CLA的價(jià)格昂貴，作為飼料添加劑，CLA在實(shí)際生產(chǎn)中很難大量使用。研究表明，外源微生物可以有效利用飼糧中的亞油酸、亞麻酸等不飽和脂肪酸為底物進(jìn)行氫化合成CLA[17-18]。因此，利用產(chǎn)CLA的菌株作為青貯菌劑進(jìn)行青貯以提高青貯飼料的CLA含量，從而提高畜產(chǎn)品的CLA含量是一個(gè)切實(shí)可行的途徑。

青貯飼料微生物共生體系中，乳酸菌數(shù)量和種類最多，是影響青貯品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一[19-20]，同時(shí)乳酸菌可以利用細(xì)胞膜上亞油酸異構(gòu)酶高效率轉(zhuǎn)化亞油酸獲得CLA而被廣泛關(guān)注[21-22]。這些產(chǎn)CLA的乳酸菌株多來自于泡菜、奶制品、青貯飼料及人和動(dòng)物的腸道微生物中。Renes等[23]與方麗等[24]分別從傳統(tǒng)的泡菜中分離得到產(chǎn)CLA的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)和鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)。劉春曉[25]從傳統(tǒng)發(fā)酵奶油中分離出產(chǎn)CLA的干酪乳桿菌(L. casei)和副干酪乳桿菌(L.paracasei)。杜波等[26]從玉米(Zea mays)青貯飼料中分離出1株產(chǎn)CLA的植物乳桿菌。Dahiya和Puniya[27]從人糞便中分離得到多株產(chǎn)CLA乳酸菌?？梢娎卯a(chǎn)CLA乳酸菌作為青貯菌劑既可以保證青貯品質(zhì)又可以提高青貯飼料中CLA的產(chǎn)量。此外，相關(guān)研究表明，青貯飼料青貯效果與青貯菌劑的適應(yīng)特性有一定相關(guān)性[28]，青海高原地區(qū)處于高寒環(huán)境，篩選適合該地區(qū)環(huán)境產(chǎn)CLA的微生物將有助于提高當(dāng)?shù)厍噘A飼料的品質(zhì)和生產(chǎn)效率。

1 材料與方法

1.1 青貯樣品及青貯原料

青貯原料為全株玉米，由青海春源畜牧有限公司種植并提供，在乳熟后期收割后使用錘片式粉碎機(jī)粉碎至2～3 cm待用。經(jīng)過測定，全株玉米原料的干物質(zhì) ( dry matter，DM )含量為 28.83%，粗蛋白 ( crude protein，CP )含量為 8.98%，中性洗滌纖 維 ( neutral detergent fiber， NDF ) 含 量 42.19%，酸 性 洗 滌 纖 維 ( acid detergent fiber，ADF) 含量24.05%，粗脂肪 ( ether extract，EE )含量 3.76%。

1.2 培養(yǎng)基

MRS 培養(yǎng)基：蛋白胨 10.0 g、牛肉膏 10.0 g、酵母膏 5.0 g、檸檬酸氫二銨 2.0 g、葡萄糖 20.0 g、吐溫 80 1.0 mL、乙酸鈉 5.0 g、磷酸氫二鉀 2.0 g、硫酸鎂 0.58 g、硫酸錳 0.25 g、瓊脂 18.0 g、蒸餾水1 000 mL、pH 6.2～6.6，121 ℃ 滅菌 15 min。

試劑：亞油酸(LA)和共軛亞油酸(CLA)分別購自Sigma公司；DNA和RNA提取試劑盒購自Invitrogen；細(xì)菌通用引物為上海生工合成，其他常規(guī)試劑均為國產(chǎn)或進(jìn)口分析純。

1.3 菌株初篩

取自然青貯全株青貯樣品200 g，通過四分法將樣品縮小至10 g后，將其投入到無菌的燒瓶中，加500 mL無菌生理鹽水，充分?jǐn)嚢韬箪o置30 min，利用無菌紗布將該生理鹽水過濾到另一無菌燒杯中，并按10倍稀釋法將過濾后的液體進(jìn)行等梯度稀釋。隨后分別從每個(gè)梯度洗脫液中吸取適量液體放置于MRS培養(yǎng)基上，并涂均勻。37 ℃培養(yǎng)72 h后，挑選單個(gè)菌落進(jìn)行平板劃線分離，直至出現(xiàn)完整的單菌落并保存該菌株。

1.4 菌株復(fù)篩

產(chǎn)CLA微生物以亞油酸為底物將其轉(zhuǎn)化為CLA，CLA在233 nm處的紫外區(qū)有特征吸收峰，因此用紫外分光光度計(jì)在該波長下掃描檢測樣品，在233 nm處有特征吸收峰即表明被檢查樣品中含有CLA，暗示接種到培養(yǎng)基中的菌株具有將亞油酸轉(zhuǎn)化為CLA的功能，即可確認(rèn)該菌具有產(chǎn)CLA的能力。

將初篩所得菌種按5%接種量接種于10 mL含有亞油酸的MRS液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中亞油酸濃度為0.5 g·L-1。以不接入菌種、其他條件相同的發(fā)酵培養(yǎng)液為空白對照，37 ℃靜置培養(yǎng) 72 h，使用紫外可見分光光度計(jì)(SP-756)在波長233 nm進(jìn)行掃描。

1.5 菌株鑒定

形態(tài)學(xué)鑒定：采用稀釋平板法，在MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得單菌落，取生長良好的菌落，在菌落表面滴幾滴3%的戊二醛固定液在4 ℃下固定2 h。用DEPC水浸泡過的鐵勺輕刮菌體于滅菌過的 2 mL 離心管，10 000 r·min-1離心 2 min 后換入新的3%戊二醛固定4 h。將固定后的菌體加入0.1 mol·L-1的PBS 緩沖液 (pH 7.2，下同)中，清洗3遍，每次 20 min。用30%、50%、70%、80%、95%、100% 共6種濃度的乙醇溶液對樣品進(jìn)行脫水處理，每種濃度在4 ℃下處理20 min，置換到100%丙酮(或乙酸異戊酯)中，4 ℃，兩次，每次20 min。臨界點(diǎn)干燥處理，鍍膜，掃描電鏡觀察其表面形態(tài)變化。

分子生物學(xué)鑒定：參照CTAB法提取，提取菌株中總DNA。以提取的菌株DNA為模板，細(xì)菌16S rDNA通用引物為27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)體系：Taq DNA Polymerae (5 U·μL-1)為 0.25 μL；5 × Taq Buffer為 10 μL；dNTP 為 1 μL；模板為 2 μL；上下游引物各2 μL；ddH2O補(bǔ)至50 μL。細(xì)菌反應(yīng)條件：94 ℃ 預(yù)變性 5 min；94 ℃ 變性 45 s，55 ℃ 退火 1 min，72 ℃ 延伸 1 min，35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min；4 ℃保溫。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測，檢測合格后用2%的瓊脂糖凝膠回收目的條帶，使用膠回收試劑盒純化后，送至上海生工測序。利用NCBI網(wǎng)站的在線Blast軟件對進(jìn)行同源性對比。

1.6 全株玉米青貯處理

青貯試驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)處理，對照組不接種青貯菌劑(接種量為0)，不產(chǎn)CLA的植物乳桿菌設(shè)置兩個(gè)濃度 (LP-1：接種量為 1 × 105cfu·g-1；LP-2：接種 量 為 1 × 106cfu·g-1)， 產(chǎn) CLA 的 植 物 乳 桿菌ANCLA2分別設(shè)置兩個(gè)濃度(ANCLA2-1：接種量為1 × 105cfu·g-1；ANCLA2-2：接種量為1 × 106cfu·g-1)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，分別裝入2.5 kg的厭氧發(fā)酵袋中，抽真空，密封，室溫保存40 d。

1.7 樣品采集及分析

飼料樣品采集：開袋后將樣品充分混合，采用四分法采集全株測定飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的含量。全株玉米青貯后根據(jù)氣味、pH、色澤和質(zhì)地等方面進(jìn)行感官評價(jià)，隨后測定乳酸 ( lactic acid，LA)、乙 酸 (acetic acid，AA)、 丙 酸 (propionic acid，PA)和 丁 酸 (butyric acid，BA)及 氨 態(tài) 氮(ammonia nitrogen，NH3-N)含量、干物質(zhì)、粗脂肪、粗蛋白、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和共軛亞油酸。

感官評價(jià)指標(biāo)：參考重慶地方標(biāo)準(zhǔn)DB-50T 669-2016青貯飼料品質(zhì)鑒定，根據(jù)青貯的氣味(1-25分)、質(zhì)地 (1-10分)、pH(1-25分)、色澤(1-20分)和水分(1-20分)進(jìn)行評分。綜合5項(xiàng)得分，評定為優(yōu)等(100-72分)、良好(71-37分)、一般(36-11分)和劣質(zhì)(≤ 10分)4個(gè)等級。

LA含量和揮發(fā)性脂肪酸(AA、PA和BA)及NH3-N含量測定：參照張亞格等[29]的方法對樣品進(jìn)行測定前制備，參照張淑枝等[30]的方法測定LA含量，參照Shao等[31]的方法采用高效氣相色譜儀(Agilent 1260)測定揮發(fā)性脂肪酸含量，參照Weatherburn[32]的方法采用苯酚－次氯酸鈉比色法測定NH3-N含量。

采用索氏抽提法測定EE含量，采用凱氏定氮法測定CP含量，在范氏法(Van Soest)的基礎(chǔ)上使用濾袋分析法測定NDF和ADF含量，使用pH計(jì)測定pH。

CLA測定：以正己烷為溶劑，將CLA標(biāo)準(zhǔn)品配成不同濃度的溶液，以正己烷為參比，在233 nm處測定其吸收值，以CLA的質(zhì)量濃度 (pg· mL-1)為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。發(fā)酵液中CLA的提取及測定按薛秀恒等[33]的方法操作。將所獲得脂肪酸提取物用5 mL正己烷溶解，以不接種的發(fā)酵液提取物為參比，測其吸收值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算發(fā)酵液中CLA的含量。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 17.0軟件對所測數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤表示測定結(jié)果，分別對不同菌劑處理進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan法對各測定數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株形態(tài)學(xué)和分子生物鑒定

菌株在MRS固態(tài)培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h后，菌落凸起，表面光滑，呈圓形，乳白色(圖1A)。掃描電鏡觀察分離菌株呈現(xiàn)桿狀，兩端為圓形，無芽孢(圖1B)。根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》[34]，初步鑒定該菌屬于桿菌細(xì)菌。菌株16S rDNA測序結(jié)果在NCBI中進(jìn)行同源性比較分析，發(fā)現(xiàn)該菌株16 S rDNA 與 L. plantarum strain 10CH 的 16S rDNA 相似度為98%。分子生物學(xué)鑒定結(jié)果與形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果一致，確定該菌為植物乳桿菌，命名為ANCLA2。

圖1 ANCLA2菌株形態(tài)學(xué)鑒定Figure 1 Morphological identification of the ANCLA2 strainA：ANCLA2 菌落在MRS中形態(tài)特征；B：ANCLA2掃描電鏡形態(tài)特征。A： The colony characteristics of the ANCLA2 strain on the MRS；B：The structure characteristics of the ANCLA2 strain in the SEM.

2.2 ANCLA2處理對全株玉米青貯感官品質(zhì)影響

試驗(yàn)主要從色澤、氣味、水分和質(zhì)地4個(gè)方面對對照組和試驗(yàn)組全株玉米進(jìn)行感官評定(表1)。對照組香味較弱，刺鼻味，有微褐色存在，呈濕潤狀態(tài)，結(jié)構(gòu)清晰，等級為良好。試驗(yàn)組LP-1、LP-2、ANCLA2-1和ANCLA2-2青貯料顏色均呈現(xiàn)有光澤綠色，均有芳香酒酸味，呈蓬松、濕潤狀態(tài)，質(zhì)地清晰，結(jié)構(gòu)保持良好。但LP-2組綠色略強(qiáng)于LP-1組，同樣ANCLA2-2組綠色略強(qiáng)于ANCLA2-1組，試驗(yàn)組的pH均低于對照組。綜合評分試驗(yàn)組均高于對照組，試驗(yàn)組均在優(yōu)質(zhì)范圍內(nèi)，對照組在良好級別。

表1 ANCLA2處理對全株玉米青貯感官品質(zhì)影響Table 1 Effect of ANCLA2 on organoleptic properties of whole corn silage

2.3 ANCLA2處理對全株玉米青貯品質(zhì)影響

青貯40 d之后，ANCLA2-2組乳酸含量顯著高于 ANCLA2-1 處理組 (P＜0.05)，同時(shí) LP-2 處理組乳酸含量顯著高于LP-1組(P＜0.05)，對照組乳酸含量最低，處理組間ANCLA2-2組的乳酸含量高于LP-2組，但差異不顯著(P ＞ 0.05)(表2)。乙酸含量 ANCLA2-1 組產(chǎn)量顯著高于其他組 (P＜0.05)，對照、LP-1、LP-2和ANCLA2-2組之間無顯著差異(P ＞ 0.05)。對照組和ANCLA2-1組丙酸含量顯著高于其他組 (P＜0.05)，ANCLA2-2 和 LP-2 處理組的丙酸含量顯著低于其他處理組(P＜0.05)，但ANCLA2-2 和 LP-2 處理組間差異不顯著 (P ＞ 0.05)。對照組檢測到微量丁酸，其他組無丁酸產(chǎn)生。對照組氨態(tài)氮占總氮比顯著高于試驗(yàn)組(P＜0.05)，試驗(yàn)組LP-1氨態(tài)氮占總氮比顯著高于LP-2組(P ＜0.05)，ANCLA2-1氨態(tài)氮占總氮比顯著高于ANCLA2-2組 (P＜0.05)，LP-1 和 ANCLA2-1 組間氨態(tài)氮占總氮比差異不顯著 (P ＞ 0.05)，LP-2 和 ANCLA2-2組間氨態(tài)氮占總氮比差異不顯著(P ＞ 0.05)。

2.4 ANCLA2全株玉米青貯營養(yǎng)成分影響

全株玉米青貯后，對照組干物質(zhì)含量顯著高于試驗(yàn)組 (P＜0.05)，LP-1 和 LP-2 處理組干物質(zhì)含量差異不顯著 (P ＞ 0.05)，ANCLA2-1 處理組干物質(zhì)含量顯著高于 ANCLA2-2 (P＜0.05)，ANCLA2-2 處理組干物質(zhì)顯著低于 LP-1和 ANCLA2-1 組 (P＜0.05)(表3)。ANCLA2-2和LP-2處理組粗蛋白含量無顯著差異 (P ＞ 0.05)，但顯著低于其他處理組 (P ＜0.05)。對照組NDF含量顯著低于試驗(yàn)組(P ＜0.05)，ANCLA2-1處理組NDF含量顯著高于其他3個(gè)試驗(yàn)組(P＜0.05)，其他3個(gè)試驗(yàn)組間無顯著差異(P ＞ 0.05)。對照組ADF含量顯著低于其他處理組(P＜0.05)，試驗(yàn)組之間ADF含量無顯著差異(P ＞ 0.05)。ANCLA2-2 處理組粗脂肪含量顯著高于其他處理組(P＜0.05)，試驗(yàn)組粗脂肪含量顯著高于對照組 (P＜0.05)，LP-1 和LP-2 組粗脂肪含量差異不顯著(P ＞ 0.05)。對照組CLA含量顯著低于其他試驗(yàn)組(P＜0.05)，ANCLA2-2組CLA 含量顯著高于其他處理組 (P＜0.05)，LP-1 和 LP-2 間無顯著差異 (P ＞ 0.05)。

表2 ANCLA2處理對全株玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)影響Table 2 Fermentation sensory quality of whole corn silage

3 討論

青貯菌劑是制作優(yōu)質(zhì)青貯飼料的保證，但目前青貯菌劑的添加主要是為了促進(jìn)發(fā)酵，提高乳酸濃度、迅速降低青貯料pH，抑制丁酸和氨態(tài)氮的生成[35-36]，而在具有普通青貯菌劑功能的基礎(chǔ)上挖掘具有特定功能性青貯菌劑可為新型畜產(chǎn)品飼料的開發(fā)提供新方向。杜波等[26]從南方青貯飼料中分離到一株產(chǎn)CLA菌株，該菌株具有較好的產(chǎn)CLA能力。但在以畜牧為主產(chǎn)業(yè)的青海地區(qū)，由于環(huán)境溫度較低，外源菌劑難以適應(yīng)高寒環(huán)境，導(dǎo)致飼料青貯后在短時(shí)間內(nèi)不易使溫度上升到30 ℃。而如果短時(shí)間內(nèi)青貯溫度達(dá)不到微生物生長繁殖的要求，一些腐敗菌就會(huì)快速繁殖，從而影響青貯飼料品質(zhì)[37-38]。因此，分離適應(yīng)青海高寒地區(qū)的產(chǎn)CLA青貯微生物具有重要意義。本研究從青海高寒地區(qū)自然青貯玉米中成功分離得到產(chǎn)CLA植物乳桿菌ANCLA2。用該菌反接回全株玉米中青貯后，青貯玉米的pH低于對照組，感官評定屬于優(yōu)質(zhì)，而對照組屬于良好。青貯中pH的高低與乳酸、乙酸及丙酸含量有一定相關(guān)性，試驗(yàn)結(jié)果表明全株玉米接種ANCLA2菌后，青貯中乳酸含量提高，丙酸含量顯著低于對照組，但乙酸含量除ANCLA2-1組高于其他組，其他各組之間無顯著差異。這與Srigopalram等[39]將乳酸菌接種到意大利黑麥草(L. multiflorum)青貯后，青貯料pH顯著降低結(jié)果相似。Xu等[40]利用L. brevis和 L. parafarraginis青貯玉米秸稈，青貯pH顯著降低，乙酸含量增加。氨態(tài)氮和丁酸的生成與pH的高低有一定相關(guān)性。賈婷婷等[41]將植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌和布氏乳桿菌(L. buchneri) 3種乳酸菌分別接種到燕麥(Avena sativa)中青貯，燕麥青貯飼料的pH、丙酸和氨態(tài)氮含量顯著低于對照組。侯建建等[42]利用高濃度植物乳桿菌處理的苜蓿(Medicago sativa)青貯飼料表現(xiàn)出高乳酸，低氨態(tài)氮，低pH，與本研究表現(xiàn)一致。本研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組ANCLA處理組和LP處理組的氨態(tài)氮和丁酸的含量均低于對照組，試驗(yàn)組中有害微生物得到有效抑制。

表3 產(chǎn)CLA乳桿菌菌劑處理對全株玉米青貯營養(yǎng)成分影響Table 3 Fermentation quality of whole corn silage

本研究中試驗(yàn)組LP-1和ANCLA2-1處理組粗蛋白含量低于對照組，但無顯著差異(P ＞ 0.05)，隨著菌體LP和ANCLA2接種量增加，試驗(yàn)組粗蛋白含量顯著低于對照組(P＜0.05)。主要是青貯過程中由于微生物需要營養(yǎng)(如能量和蛋白質(zhì)等各種物質(zhì))來維持自身的生長，會(huì)導(dǎo)致青貯原料中糖、淀粉和蛋白等營養(yǎng)物質(zhì)的損失，而菌體蛋白的增長量不足以彌補(bǔ)青貯原料蛋白損失，導(dǎo)致青貯后蛋白含量降低[36]。Sucu等[43]報(bào)道，玉米青貯后蛋白含量降低，與本研究結(jié)論相似。但Hoffman和Funk[44]在研究青貯時(shí)間和接種量對玉米蛋白質(zhì)的影響報(bào)道中發(fā)現(xiàn)，青貯后蛋白含量無顯著差異(P ＞ 0.05)。不同研究的青貯后蛋白質(zhì)變化差異可能與青貯原料，青貯時(shí)間，菌種種類及接種量等有關(guān)。玉米等農(nóng)作物秸稈的主要組成是纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，其中木質(zhì)素將纖維素和半纖維素層層包裹，同時(shí)纖維素的基本組成單位是纖維二糖，因此，青貯后纖維含量的降低就存在青貯微生物分泌相關(guān)的纖維降解酶對相關(guān)纖維進(jìn)行降解。侯美玲等[45]報(bào)道，乳酸菌也可顯著降低試驗(yàn)組中牧草的NDF和ADF含量。但本研究中，青貯前后中性洗滌纖維，酸性洗滌纖維均顯著性高于對照(P＜0.05)，可能是由于本研究中全株玉米干物質(zhì)損失量高于纖維的降解。

青貯前后粗脂肪含量的變化主要是由于參與青貯微生物能夠利用系統(tǒng)中營養(yǎng)物質(zhì)合成粗脂肪，王啟芝等[46]報(bào)道，米曲霉可以提高玉米秸稈青貯后粗脂肪含量，同樣本研究ANCLA2處理組中粗脂肪含量顯著高于對照組(P＜0.05)，可能與青貯后干物質(zhì)降低、同時(shí)ANCLA2菌促進(jìn)粗脂肪的合成有關(guān)。ANCLA2處理組的CLA含量顯著高于對照組和LP處理組(P＜0.05)，主要是全株玉米中存在大量的不飽和脂肪酸，ANCLA2菌株可以利用該不飽和脂肪酸進(jìn)行CLA轉(zhuǎn)化，從而提高了青貯后CLA含量。

4 結(jié)論

從青海地區(qū)青貯飼料中選育獲得產(chǎn)CLA的細(xì)菌為植物乳桿菌，并被命名為ANCLA2。從感官角度評價(jià)該菌青貯全株玉米效果和常規(guī)植物乳桿菌青貯效果相當(dāng)，能有效提高青貯飼料中的乳酸和乙酸含量，降低青貯飼料的pH且抑制了青貯飼料中的氨態(tài)氮含量；但ANCLA2菌較高程度地降低了全株玉米干物質(zhì)含量，且隨著接種量增加，干物質(zhì)損失量提高；ANCLA2菌青貯后全株玉米粗蛋白含量降低，NDF含量顯著高于對照組和LP處理組，ADF含量高于對照組，粗脂肪和CLA含量高于其他處理組。ANCLA2菌在保證全株玉米青貯效果的同時(shí)，能提高粗脂肪和CLA含量。