榆干離褶傘液體培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)

高智濤，敖貴彬，宋淑麗

(1.黑龍江省伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春153000；2.伊春森工集團(tuán)鐵力林業(yè)局，黑龍江 伊春153000；3.伊春市友好林業(yè)局，黑龍江伊春153000 )

榆干離褶傘[Lyophyllumulmarium(Bull.:Fr.) Kuhner]菌肉肥厚，香味濃郁的食用菌，在我國(guó)河北、吉林、黑龍江、河南、甘肅、青海等省均有分布，夏秋生于榆、柳、槭等樹(shù)種的干部。目前榆干離褶傘初步馴化栽培成功，但是走出實(shí)驗(yàn)室面向生產(chǎn)，一些技術(shù)問(wèn)題還需要進(jìn)一步研發(fā)。目前榆干離褶傘三級(jí)菌制作都是通過(guò)固體斜面培養(yǎng)基分級(jí)進(jìn)行培養(yǎng)，從一級(jí)菌(試管)→二級(jí)菌(菌袋)→三級(jí)菌(菌袋)出菇，過(guò)程較繁瑣，并且榆干離褶傘其菌絲在二級(jí)菌中生長(zhǎng)極為緩慢，長(zhǎng)滿菌袋需50～60天，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)[1-2]。而利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行接種，菌絲長(zhǎng)滿菌袋僅需要35～45天。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)榆干離褶傘液體培養(yǎng)基中碳氮源、碳氮比、溫度等因素進(jìn)行分析，得出最適合榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)液體培養(yǎng)配方，為進(jìn)一步推廣榆干離褶傘栽培提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

榆干離褶傘菌株來(lái)自黑龍江省林副特產(chǎn)研究所。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 母種培養(yǎng)基。采用PDA培養(yǎng)基。

1.2.2 碳源測(cè)定基礎(chǔ)培養(yǎng)基。蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、pH自然。

1.2.3 氮源測(cè)定基礎(chǔ)培養(yǎng)基。葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、pH自然。

1.2.4 試驗(yàn)培養(yǎng)基。將碳氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蛋白胨、葡萄糖分別以酵母膏、黃豆粉、蔗糖、可溶性淀粉進(jìn)行替換，開(kāi)展碳氮源篩選試驗(yàn)

1.2.5 碳氮比篩選試驗(yàn)。利用得出最適合榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的碳氮源進(jìn)行碳氮比篩選試驗(yàn)，氮素濃度設(shè)定為0.03%，碳氮比設(shè)定分別為15∶1；18∶1；21∶1；24∶1；27∶1。得出適合菌絲生長(zhǎng)的最適碳氮比。

1.2.6 菌絲生長(zhǎng)物理指標(biāo)篩選試驗(yàn)。利用篩選得出的榆干離褶傘液體培養(yǎng)基配方，在不同培養(yǎng)溫度和不同培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)。得出適合菌絲生長(zhǎng)的溫度、時(shí)間。

1.3 方法

1.3.1 碳源篩選。取榆干離褶傘菌種接種到4種不同碳源液體培養(yǎng)基中，在24℃搖床中培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后過(guò)濾出菌絲放入25mL離心管中4000轉(zhuǎn)離心10min，稱重既得菌絲體濕重。每種配方設(shè)置10個(gè)重復(fù)，取平均值。

1.3.2 氮元篩選。取榆干離褶傘菌種接種到4種不同氮源液體培養(yǎng)基中，在24℃搖床中培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后過(guò)濾出菌絲放入50mL離心管中4000轉(zhuǎn)離心10min，稱重既得菌絲體濕重。每種配方設(shè)置10個(gè)重復(fù)，取平均值。

1.3.3 碳氮比篩選。用適合榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的碳氮源制作液體培養(yǎng)基，氮素濃度設(shè)定0.03%，碳氮比設(shè)置為15∶1；18∶1；21∶1；24∶1；27∶1共計(jì)5個(gè)梯度，在24℃搖床中培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后過(guò)濾出菌絲放入25mL離心管中4000轉(zhuǎn)離心10min，稱重既得菌絲體濕重。每種配方設(shè)置10個(gè)重復(fù)，取平均值。

1.3.4 培養(yǎng)溫度篩選。利用篩選后的液體培養(yǎng)基配方制作液體培養(yǎng)基，接種后放入搖床中培養(yǎng)，控制培養(yǎng)溫度為18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃等6個(gè)不同培養(yǎng)梯度，培養(yǎng)5d，培養(yǎng)結(jié)束后過(guò)濾出菌絲放入25mL離心管中4000轉(zhuǎn)離心10min，稱重既得菌絲體濕重。每個(gè)溫度培養(yǎng)10瓶，取平均值。

1.3.5 培養(yǎng)時(shí)間篩選。利用篩選后的液體培養(yǎng)基配方制作液體培養(yǎng)基60瓶，接種后放入24℃搖床中培養(yǎng)，在接種第4天開(kāi)始每天拿出10瓶，過(guò)濾出菌絲放入25mL離心管中4000轉(zhuǎn)離心10min，稱重既得菌絲體濕重。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳氮源對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的影響

圖1 不同碳氮源對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的影響

由圖1可以看出，可溶性淀粉作為碳源菌絲產(chǎn)量最高，其次是葡萄糖、蔗糖。酵母膏作為氮源菌絲產(chǎn)量最高，其次是黃豆粉、蛋白胨。利用可溶性淀粉、酵母膏制作液體培養(yǎng)基培養(yǎng)榆干離褶傘菌種，菌絲體產(chǎn)量最高，菌絲體濕重23.48g/100mL，利用蔗糖、蛋白胨培養(yǎng)榆干離褶傘菌種，菌絲產(chǎn)量最低，菌絲體濕重15.02g/100mL。

2.2 不同碳氮比對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)影響

圖2 不同碳氮比對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的影響

由圖2可以看出，碳氮比為18∶1、21∶1、24∶1時(shí)，菌絲體產(chǎn)量差異性較小，呈遞增趨勢(shì)，碳氮比為27∶1時(shí)，菌絲體產(chǎn)量有所下降，碳氮比在24∶1時(shí)菌絲體最高，菌絲體濕重26.29g/100mL。碳氮比15∶1時(shí)，菌絲體產(chǎn)量最低，菌絲體濕重21.44g/mL。

2.3 不同溫度對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)影響

圖3 不同溫度對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的影響

由圖3看出，培養(yǎng)溫度在18～24℃時(shí)菌絲體產(chǎn)量呈遞增趨勢(shì)，在24℃時(shí)菌絲產(chǎn)量最高達(dá)26.97g/100mL，溫度在24～28℃時(shí)菌絲產(chǎn)量呈遞減趨勢(shì)。

2.4 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)影響

圖4 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)榆干離褶傘菌絲生長(zhǎng)的影響

由圖4可以看出，榆干離褶傘菌絲體培養(yǎng)時(shí)間在4～8天時(shí)呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，第8～9天菌絲體產(chǎn)量變化不大，其第7天產(chǎn)量為29.45g/100mL、第8天產(chǎn)量為29.99g/100mL、第9天產(chǎn)量為30.17g/100mL。

3 小結(jié)與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，榆干離褶傘液體培養(yǎng)基碳源選擇為可溶性淀粉，氮源是酵母膏，碳氮比為24∶1，適合榆干離褶傘菌絲體生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基配方為可溶性淀粉16.49g、酵母膏4.2g、纖維素鈉0.05%，培養(yǎng)溫度為24℃，培養(yǎng)時(shí)間為7～8天，培養(yǎng)菌絲體濕重可達(dá)29.99g/100mL。