簡述納他霉素生產(chǎn)菌種搖瓶液的兩種檢測方法

李 梅

(浦城縣投資開發(fā)公司,福建 浦城 353400)

納他霉素是一種無臭、無味、低劑量且安全性高的食品防腐劑。既可以廣泛有效的抑制各種霉菌，酵母菌的生長，又能抑制真菌毒素的產(chǎn)生，可廣泛用于食品防腐保鮮以及抗真菌治療[1-2]。

在納他霉素產(chǎn)生菌的菌種選育中，需要建立一種對納他霉素組分和含量的快速檢測方法。由于干擾納他霉素分析的因素較多，本文主要選擇生物分析法和色譜分析法。

1 納他霉素生產(chǎn)菌種搖瓶液的制備

(1)搖瓶種子瓶配方：玉米淀粉2%,G糖0.8%,黃豆餅粉1%；酵母粉0.8%,蛋白胨0.5%,碳酸鈣0.2%。

(2)搖瓶發(fā)酵瓶配方：玉米淀粉6%,G糖0.75%,黃豆餅粉1.7%；酵母粉1.0%,碳酸鈣0.2%。

(3)納他霉素生產(chǎn)斜面菌種接種入種子瓶培養(yǎng)16h至搖瓶液無染菌種子液顏色變黃，有掛壁菌絲后，轉(zhuǎn)接入搖瓶發(fā)酵瓶培養(yǎng)2天下?lián)u床進行檢測。

2 納他霉素生產(chǎn)菌種搖瓶液生物分析法和色譜分析法

2.1 納他霉素效價的生物檢測法

2..1.1 含有搖瓶液的瓊脂培養(yǎng)基制備

吸取不同的菌號的1mL搖瓶液到瓊脂培養(yǎng)基中倒平皿備用。每個菌號3～5個重復(fù)。

2.1.2 制備酵母菌肉湯培養(yǎng)液

2g的酵母粉倒入25mL的肉湯培養(yǎng)液中40℃培養(yǎng)30min，肉眼可看肉湯培養(yǎng)中產(chǎn)生大量的氣泡，肉湯變渾濁。

2.1.3 將制備好的酵母菌肉湯培養(yǎng)液倒入含有搖瓶液的瓊脂培養(yǎng)基平皿中28℃培養(yǎng)24h。

2.1.4 觀察抑菌圈的大小

用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈的大小，同一菌號的抑菌圈加和取平均值。選擇抑菌圈大的菌株進行重復(fù)上搖瓶。

生物分析法利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基中的擴散滲透作用，將已知濃度的標(biāo)準溶液和未知濃度的樣品在含有敏感性搖瓶液的瓊脂表面進行擴散滲透，由于對被試菌的抑制作用而產(chǎn)生抑菌圈，抑菌圈的大小和抗生素的濃度之間有一定的比例關(guān)系。生物分析法利用抗生素抑制敏感菌的特點，適用于生產(chǎn)菌種的選育的實際情況。

2.2 納他霉素效價的高效液相色譜法(HPLC)

納他霉素效價的高效液相色譜法(HPLC)具有操作簡單、精密度高等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于檢測納他霉素效價。大部份采用C18反相柱，納他霉素在303nm左右有最大吸收峰，故檢測器采用UV檢測器。

2.2.1 搖瓶液的前處理

把搖瓶液稀釋100倍。

2.2.2 進高壓液相色譜儀

吸取0.1UL的搖瓶液入高壓液相色譜儀，每個菌號做3～5個重復(fù)，直接測定讀數(shù)。求平均值選擇效價高的菌株進行進行重復(fù)上搖瓶

3 結(jié)語

納他霉素分析干擾因素較多，生物分析法較為直觀，操作不復(fù)雜，較適用于生產(chǎn)菌種大批量的篩選；高壓液相色譜法測定的結(jié)果較為準確，一次性設(shè)備投資較大。