針刺夾脊穴對(duì)大鼠胃腸動(dòng)力障礙的作用及機(jī)制

魏峰，宋艷華，程斌，于慧娟，張莉莉

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué)；3濟(jì)南市中心醫(yī)院)

功能性胃腸病是臨床常見(jiàn)病，研究表明針刺對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂具有較好的療效[1，2]。夾脊穴具有改善胃腸運(yùn)動(dòng)障礙，促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)的作用[3]，目前對(duì)其作用機(jī)制的研究多集中于低位中樞神經(jīng)，缺乏對(duì)延髓、下丘腦、海馬等高位中樞神經(jīng)的研究。迷走神經(jīng)背核(DMV)是中樞神經(jīng)調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的最基本核團(tuán)，在調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。DMV通過(guò)釋放谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)等神經(jīng)遞質(zhì)作用于DMV內(nèi)不同受體，實(shí)現(xiàn)對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的調(diào)控。研究表明DMV復(fù)合體微量注射N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)或GABA受體(GABAR)阻斷劑對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)控作用不同[4，5]?；诖?，2016年10月～2018年6月本研究觀察針刺夾脊穴對(duì)胃腸蠕動(dòng)障礙大鼠模型胃腸運(yùn)動(dòng)功能的作用，并考察DMV中的NMDA或GABAR對(duì)夾脊穴促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)功能作用的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑及儀器 SD雄性大鼠45只，180～210 g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(魯)20090001，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由攝食、飲水；室溫18～22 ℃，空氣濕度40%～50%，自然光照明，換氣風(fēng)扇通風(fēng)。硫酸阿托品注射液(天津藥業(yè)集團(tuán))，葡聚糖藍(lán)-2000(上海超研生物科技有限公司)，犬尿烯酸(美國(guó)Sigma 公司)、法克羅芬(美國(guó)Sigma 公司)、荷苞牡丹堿(美國(guó)Selleck公司)、腦立體定位儀立體定位儀(日本Narishige公司)。

1.2 動(dòng)物分組及模型制備 將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、針刺組、針刺+NMDAR拮抗劑組、針刺+GABAR拮抗劑組，每組9只。禁食12 h，除空白對(duì)照組外其余各組皮下注射硫酸阿托品注射液(2 mg/kg)，建立胃腸動(dòng)力障礙模型?？瞻讓?duì)照組皮下注射等量生理鹽水。

1.3 DMV微量注射 各組給予葡聚糖藍(lán)-2000(20 mg/mL)1 mL灌胃，20 min后給予20%烏拉坦腹腔注射麻醉，待麻醉穩(wěn)定后將大鼠俯臥位固定于鼠腦立體定位儀上，剪去頭頂部毛發(fā)，于兩耳連線沿正中切開(kāi)皮膚1.5～2 cm，鈍性分離剝開(kāi)皮下筋膜和骨膜，露出“十”字縫和“人”字點(diǎn)。移動(dòng)鼠腦立體定位儀上下標(biāo)尺，調(diào)節(jié)鼠頭部平面，使“十”字縫與“人”字點(diǎn)高水平，即顱骨水平位。核團(tuán)定位根據(jù)Paxinos和watson大鼠腦立體定位圖譜進(jìn)行DMV定位：P 13.24 mm，R 0.7 mm，H 8.15 mm。確定位置后用牙科鉆(鉆頭直徑l mm)鉆破顱骨。玻璃微量移液器將相應(yīng)藥物注入迷走神經(jīng)運(yùn)動(dòng)背核。針刺+NMDAR拮抗劑組給予犬尿烯酸5 μL，針刺+GABAR拮抗劑組給予荷苞牡丹堿、法克羅芬5 μL，注射于1 min完成[6]?？瞻捉M、模型組和針刺組注射無(wú)菌水5 μL。

1.4 針刺方法 DMV微量注射10 min后，針刺組、針刺+NMDAR拮抗劑組、針刺+GABAR拮抗劑組給予夾脊穴針刺。腧穴定位參照中國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸分會(huì)制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》和華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》，背部夾脊穴：雙側(cè)T8～12各椎下正中旁開(kāi)約3 mm，毫針直刺2 mm后，接SDZ-IV型電子針療儀，電壓9 V，疏密波型，混頻20～100 Hz，刺激30 min。

1.5 觀察指標(biāo) 針刺結(jié)束10 min，脫頸椎處死動(dòng)物，結(jié)扎賁門(mén)、幽門(mén)及回盲部，取出胃及小腸組織。胃排空率：將胃剪碎，使用去離子水將胃內(nèi)色素殘留物充分清洗，至洗液體積為4 mL，混勻，10 000 r/min離心5 min，取上清液測(cè)620 nm處光密度[7]。胃排空率=(1-胃內(nèi)殘留色素吸光度÷標(biāo)準(zhǔn)管色素吸光度)×100%。小腸推進(jìn)率:將小腸平鋪于紙板上，自然拉直，量取幽門(mén)括約肌至色素最前端及至回盲部的距離，二者之比×100%為小腸推進(jìn)率。注：標(biāo)準(zhǔn)管色素吸光度為葡聚糖藍(lán)-2000(20 g/L)1 mL稀釋于2 mL蒸餾水后測(cè)得620 nm處吸光度值。

2 結(jié)果

2.1 針刺夾脊穴對(duì)大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率的影響 與正常組比較，模型組胃排空率、小腸推進(jìn)率低(P均<0.01)；與模型組比較，針刺組胃排空率、小腸推進(jìn)率高(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1針刺夾脊穴對(duì)大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率的影響

2.2 注射GABA受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑對(duì)針刺夾脊穴作用的影響 注射GABA受體拮抗劑荷苞牡丹堿(針刺+荷苞牡丹堿組)或法克羅芬(針刺+法克羅芬組)后胃排空率、小腸推進(jìn)率與針刺組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。注射NMDA受體拮抗劑犬尿烯酸(針刺+犬尿烯酸組)后胃排空率、小腸推進(jìn)率下降，較針刺組低(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2注射GABA受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑對(duì)針刺夾脊穴作用的影響

3 討論

夾脊穴與經(jīng)絡(luò)臟腑存在密切的聯(lián)系，處于督脈和膀胱經(jīng)第一側(cè)線之間。膀胱經(jīng)為十二經(jīng)脈核心，督脈為陽(yáng)脈之海，總督一身之陽(yáng)氣。兩經(jīng)均循行背部，其經(jīng)脈在脊柱兩側(cè)深部相互貫通，夾脊穴位于經(jīng)氣外延重迭覆蓋之處，故夾脊穴可以一穴調(diào)兩經(jīng)，具有整合兩經(jīng)經(jīng)氣之作用。夾脊穴是華佗對(duì)背俞穴的特殊用法，其本身就具體調(diào)理臟腑功能的作用。從解剖位置而言，脊柱兩旁的交感干神經(jīng)節(jié)借節(jié)間支連接成左右兩條交感干，并通過(guò)交通支與脊神經(jīng)聯(lián)系，隨脊神經(jīng)分布到周圍器官或臟器，支配和調(diào)控周圍器官或臟器的功能[8,9]。針刺夾脊穴可刺激脊神經(jīng)前后支、交感神經(jīng)干通過(guò)的脊神經(jīng)，在相應(yīng)脊髓節(jié)段內(nèi)，實(shí)現(xiàn)經(jīng)內(nèi)臟感覺(jué)纖維與內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維的聯(lián)系。故夾脊穴深層的椎旁交感神經(jīng)干、脊神經(jīng)后支和神經(jīng)纖維末梢被認(rèn)為是其針灸效應(yīng)的神經(jīng)生理學(xué)基礎(chǔ)[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，針刺夾脊穴可明顯提高胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率，說(shuō)明夾脊穴具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的作用。本研究中所取的夾脊穴與支配胃腸的內(nèi)臟神經(jīng)處于同一脊神經(jīng)階段，針刺刺激可以通過(guò)激活相應(yīng)的脊神經(jīng)產(chǎn)生神經(jīng)沖動(dòng)至中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)。

支配胃的副交感節(jié)前神經(jīng)元主要位于DMV，公認(rèn)其在調(diào)節(jié)胃腸功能活動(dòng)中發(fā)揮樞紐作用。DMV與中樞和外周神經(jīng)存在廣泛的纖維聯(lián)系，是集內(nèi)臟感覺(jué)傳入和傳出于一體的內(nèi)臟副交感節(jié)前中樞。DMV既可接受來(lái)自胃腸道的感覺(jué)信息，又可接受來(lái)自高級(jí)中樞的信息，并發(fā)出沖動(dòng)通過(guò)副交感運(yùn)動(dòng)神經(jīng)下傳支配胃腸道的運(yùn)動(dòng)[11]。既往研究證實(shí)，DVC是針刺調(diào)整胃運(yùn)動(dòng)和分泌的重要中樞部位[12]。DMV通過(guò)其副交感節(jié)前運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元經(jīng)迷走神經(jīng)傳出釋放乙酰膽堿到節(jié)后神經(jīng)元支配胃腸道運(yùn)動(dòng)，其節(jié)后神經(jīng)元部分為膽堿能興奮性神經(jīng)元，部分是為非腎上腺素能非膽堿能抑制性神經(jīng)元，因此迷走神經(jīng)對(duì)胃運(yùn)動(dòng)具有興奮和抑制兩種效應(yīng)[13]。其中膽堿能纖維是興奮性纖維，末梢釋放乙酰膽堿，通過(guò)M受體促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)功能；而抑制性纖維是非膽堿能非腎上腺素能纖維，末梢釋放肽類遞質(zhì)，引起胃底部的容受性舒張。因此迷走神經(jīng)對(duì)胃運(yùn)動(dòng)具有興奮和抑制兩種效應(yīng)。因此DMV對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)，取決于突觸后GABA受體、NMDA和非NMDA型谷氨酸受體活化。本研究采用GABA受體拮抗劑荷苞牡丹堿、法克羅芬及NMDA受體拮抗劑犬尿烯酸微量注射，觀察二者對(duì)夾脊穴促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用，結(jié)果表明使用荷苞牡丹堿和法克羅芬特異性抑制DMV中GABA受體活化，對(duì)夾脊穴促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)無(wú)明顯影響；而微量注射犬尿烯酸后，夾脊穴促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用被明顯抑制，證實(shí)夾脊穴調(diào)控胃腸功能的作用是通過(guò)DMV中NMDA受體來(lái)介導(dǎo)的。

綜上所述，針刺夾脊穴對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)障礙模型大鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)功能具有促進(jìn)作用，這種促進(jìn)作用與DMV中的NMDA受體關(guān)系密切，而DMV中的GABA受體對(duì)該作用無(wú)明顯影響。這為認(rèn)識(shí)夾脊穴調(diào)節(jié)胃腸功能的中樞機(jī)制提供了新的思路。