蛋黃免疫球蛋白制備和應(yīng)用研究進(jìn)展

戴 浪

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550025）

免疫球蛋白是指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)，與抗體分子相似的球蛋白，蛋黃免疫球蛋白屬于免疫球蛋白的一種，存在于禽類蛋胚胎內(nèi)部。此前研究表明，蛋黃免疫球蛋白可應(yīng)對(duì)哺乳動(dòng)物抗體中的部分不足，實(shí)現(xiàn)病毒感染等疾病的治療。本文以自身經(jīng)驗(yàn)和文獻(xiàn)為基礎(chǔ)，對(duì)蛋黃免疫球蛋白制備和應(yīng)用做綜述：

1 蛋黃免疫球蛋白的制備

1.1 制備方法

蛋黃免疫球蛋白的制備方法較為多樣，但效率和成本存在差異，早在20世紀(jì)末期，已有學(xué)者嘗試應(yīng)用化學(xué)方法進(jìn)行分離提取實(shí)現(xiàn)制備。多年來該方法經(jīng)不斷改進(jìn)，已經(jīng)較為成熟。一般分離制備步驟為，取若干蛋黃投入Tris緩沖液中，對(duì)混合物進(jìn)行低溫放置處理，溫度應(yīng)在4℃上下，使混合物自然反應(yīng)生成沉淀。提取其上層清液，放入適量硫酸葡聚糖、氯化鈣，與提取物進(jìn)行反應(yīng)，將混合溶液放置于30℃環(huán)境下，再置入硫酸銨進(jìn)行處理。該方法可獲取約75%左右的蛋黃免疫球蛋白。

另一種分離方法為，取若干蛋黃，置入蒸餾水中進(jìn)行稀釋，使混合物的酸堿性趨向7.0，之后做凍融處理，以離心機(jī)處理混合物，去除沉淀，提取上層清液，將硫酸銨置入清液中獲取蛋黃免疫球蛋白。該方法可獲取約60～70%左右的蛋黃免疫球蛋白，較第一種方式效率略低，但制作過程較為簡(jiǎn)單，成本小。此外，近年來也有學(xué)者提升聚乙二醇提取法、親脂溶劑沉淀法，不同方式下的工藝流程存在差異，效率和成本也不盡相同。目前來看，親脂溶劑沉淀法效率最高，但成本和流程也最高、最復(fù)雜，因此推廣情況尚不理想。

1.2 現(xiàn)有工藝的不足

當(dāng)前蛋黃免疫球蛋白制備方法的不足體現(xiàn)在三個(gè)方面，一是純度不足、二是成本高、三是無法進(jìn)行量產(chǎn)。純度不足的問題在各類方法中均所有體現(xiàn)，理論上看，反應(yīng)顆粒越小、反應(yīng)行為進(jìn)行的越徹底，但無論采用提取法、沉淀法，都需要持續(xù)進(jìn)行多種混合溶液的制備、物質(zhì)提取，在此過程中，化學(xué)反應(yīng)、物理反應(yīng)均不完全以分子為基本單位進(jìn)行，反應(yīng)物一般為分子團(tuán)，內(nèi)部分子的活力即便沒有受到影響，也無法完全參與到反應(yīng)活動(dòng)中，生成物的純度有限。

成本方面的問題，并非廣泛存在于所有的蛋黃免疫球蛋白制備方法中。采用蒸餾水稀釋法的情況下，成本較小，但制備效率不足，其他方式多面臨成本較高的問題。如親脂溶劑沉淀法，其制備效率是蒸餾水稀釋法的2.7～2.9倍，但制備成本也高出1.7倍以上，由于蛋黃免疫球蛋白的用量相對(duì)有限，因此高成本制備方法并不被所有研究部門廣泛應(yīng)用。量產(chǎn)問題目前主要困擾醫(yī)藥行業(yè)，一方面蛋黃免疫球蛋白活力無法長(zhǎng)期保持，另一方面部分疾病范圍性爆發(fā)（如流行疾?。?duì)相關(guān)物質(zhì)的用量要求又相對(duì)較大，如何解決用量、成本和制備效率之間的矛盾，也為未來研究的熱點(diǎn)問題。

2 蛋黃免疫球蛋白應(yīng)用

2.1 感染治療

在較早進(jìn)行蛋黃免疫球蛋白研究的西方國(guó)家。技術(shù)人員最初進(jìn)行的活體實(shí)驗(yàn)以家禽作為對(duì)象，對(duì)感染了鼠傷寒沙門氏菌的病雞進(jìn)行治療，在皮下注射和口服藥物的綜合作用下，病雞體內(nèi)的抗體水平出現(xiàn)變化，但并不顯著。其后研究人員又對(duì)患病的哺乳動(dòng)物（腹瀉的貓）進(jìn)行治療，貓?bào)w內(nèi)的抗體水平明顯變化，且鼠傷寒沙門氏菌已經(jīng)基本消失，腹瀉情況在1d后出現(xiàn)緩解，連續(xù)治療3d，貓的腹瀉病情消失。為了解蛋黃免疫球蛋白的治療效果，研究人員又尋找到感染了輪狀病毒的貓，并通過注射和服藥的方式進(jìn)行疾病治療。在病貓的排泄物中，可檢出輪狀病毒，且隨著用藥的深入，輪狀病毒的檢出量明顯減少。這表明蛋黃免疫球蛋白已經(jīng)發(fā)揮治療作用。其后的人體組織體外實(shí)驗(yàn)也證明，蛋黃免疫球蛋白可實(shí)現(xiàn)病毒性腹瀉和感染預(yù)防、治療。

2.2 實(shí)驗(yàn)分析

蛋黃免疫球蛋白在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用由來已久，早在20世紀(jì)后期，科學(xué)家就應(yīng)用蛋黃免疫球蛋白進(jìn)行凝膠擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)可降低凝膠中沉淀物的產(chǎn)生量。在生物實(shí)驗(yàn)中，研究人員發(fā)現(xiàn)適量應(yīng)用蛋黃免疫球蛋白，可以提升部分復(fù)方類藥物的藥敏性，很多無法產(chǎn)生治療效果的藥物，加入蛋黃免疫球蛋白后，可以重新起效。此外，也有人員在研究中發(fā)現(xiàn)，蛋黃免疫球蛋白能夠改善實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精確性，如酰胺酶實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用蛋黃免疫球蛋白使其敏感性下限達(dá)到0.2ng/ml，可以有限指導(dǎo)研究和制藥活動(dòng)。

一些新型病毒、病毒變種的體外實(shí)驗(yàn)中，蛋黃免疫球蛋白同樣應(yīng)用廣泛。由于不同病原體在經(jīng)過藥物作用后，往往會(huì)改變自身形態(tài)，產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致藥物治療效果下降（藥敏性下降）。新的病毒也在現(xiàn)代醫(yī)療工作中不斷被發(fā)現(xiàn)，這對(duì)醫(yī)療工作，尤其是制藥工作提出了更多挑戰(zhàn)。蛋黃免疫球蛋白的作用機(jī)理相對(duì)明確，雖然無法單獨(dú)用于廣譜抗病毒，但研究人員近年來不斷嘗試?yán)脧?fù)方藥物治療疾病、殺滅病毒，又使蛋黃免疫球蛋白擁有了更廣闊的作用空間。目前很多研究依然處于實(shí)驗(yàn)階段，無論結(jié)果如何，都能為醫(yī)藥工作提供更多參考。

綜上所述，蛋黃免疫球蛋白在醫(yī)療領(lǐng)域擁有廣泛的應(yīng)用前景，其制備工藝雖然成熟，但也面臨成本、效率等方面的不足，應(yīng)在后續(xù)工作中謀求改進(jìn)。