四川檸檬腳腐病的病原菌及其防控技術(shù)

席亞東，劉 旭，劉虹伶，陳慶東，程 蛟，李曉麗，羅家棟*

(1.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，四川 成都 610066；2.四川省安岳縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 安岳 642350；3.四川省宜賓市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 宜賓 644000)

近年來，在四川檸檬產(chǎn)區(qū)，特別是在安岳縣檸檬植株整株干枯死亡現(xiàn)象日益加重，受害檸檬植株主干表皮出現(xiàn)變色、腐爛，頂部葉片黃化。為弄清其發(fā)病原因，筆者從田間采集病指，進(jìn)行室內(nèi)初步鑒定，發(fā)現(xiàn)了腳腐病的病原菌。該病害是一種土傳病害,具有混合侵染或復(fù)合侵染的特征，其發(fā)生危害將給四川檸檬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展造成嚴(yán)重威脅。

1 腳腐病的病原菌

據(jù)報道腳腐敗的病原菌有時為單一病原菌，有時是兩種或兩種以上的病原菌引起發(fā)病。國內(nèi)有12種。主要是：Fusariumoxysporumvar.aurantiacum，屬金黃尖鐮孢霉屬真菌；Phytophthaoracactorum,屬亞疫霉屬菌物；Phytophthoraparasiticavar.nicotianae Tucker,屬寄生疫霉煙草致病變種等。

先宗良等于1986～1989年對四川各柑橘產(chǎn)區(qū)的腳腐病病原做了分離與鑒定實(shí)驗(yàn)。為了查清主要病原，他們采用了分層取樣法分離病原物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，凡取病健交界處稍帶一點(diǎn)褐色腐爛的病組織，均會分離到鐮刀菌，離病健交界處至健部方向15cm以內(nèi),往往會同時分離到疫霉菌和鐮刀菌，只有離病健交界處至健部方向以外,似乎是好組織的病組織中,才會分離到純疫霉菌。在老病斑上,即使離病健交界處至健部方向15cm以外,也分離不到疫霉菌。先宗良等推斷鐮刀菌只不過是疫霉菌寄生以后的腐生菌或柑橘樹組織損傷后的弱寄生,疫霉菌才是導(dǎo)致腳腐病的先行者,是原發(fā)性病原。近10年來，四川省該病原菌的研究鮮有報道。

筆者所采的樣本中未發(fā)現(xiàn)Phytophthaoracactorum和Phytophthoraparasiticavar.nicotianae。本團(tuán)隊(duì)從所分離獲得純菌的形態(tài)學(xué)上，可初步鑒定為鐮刀菌屬Fusariumspp，但其是否為致病菌或?yàn)楦柽M(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。但貴州大學(xué)譚萍等報道的柑橘腳腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌Fusariumoxysporum，與本課題組初步鑒定的結(jié)果具有一致性。Fusariumoxysporum采用常規(guī)組織分離方法。譚萍等報道柑橘葉瓊脂培養(yǎng)基最適合腳腐病分生孢子的產(chǎn)生，其次為燕麥瓊脂培養(yǎng)基，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基最不適合腳腐菌分生孢子的產(chǎn)生。因此，在培養(yǎng)腳腐病的病原菌時選擇合適的培養(yǎng)基尤為重要。

對于由Phytophthaoracactorum和Phytophthoraparasiticavar.nicotianae引起的腳腐病，必須用選擇性培養(yǎng)基分離，即在滅菌培養(yǎng)基中加入青霉素、利福平、五氯硝基苯各50μg/mL，抑制病組織中雜菌生長。于10～15℃中保存疫霉菌，每6個月轉(zhuǎn)接、活化。土壤中的疫霉菌,直接從土壤中分離仍較困難,通常采用誘捕的方法取帶菌土壤于玻璃缸中,加入滅菌水充分?jǐn)噭?靜置待土壤顆粒沉淀后,加入寄主植物材料為誘餌,待誘餌上產(chǎn)生水浸狀小病斑時,采用組織分離法分離。

2 腳腐病流行規(guī)律

以菌絲體或卵孢子在病樹和土壤的病殘體上越冬，成為初侵染源。病原菌也可通過傷口侵入。最適發(fā)病溫度25～28℃，高溫多雨利于流行。在安岳縣，6～9月為發(fā)病的高峰期，一般為雨量高峰后10～15d出現(xiàn)發(fā)病高峰。病原菌可隨土壤和水流傳播。排水性差的土壤較沙土或沙壤土發(fā)病重；病害發(fā)生隨樹齡增長而加重，樹勢弱的發(fā)病重。

3 防治方法

3.1 病原菌檢測

傳統(tǒng)的植物病原真菌鑒定的方法步驟包括形態(tài)觀察、病害標(biāo)本的采集和保存、對病原物的分離、培養(yǎng)、菌種保存等；隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，蛋白質(zhì)聚丙烯酞胺凝膠電泳圖譜技術(shù)、核酸分子雜交、PCR檢測、Real-time PCR檢測技術(shù)等用來檢測病原菌。

3.2 選用耐病粘木

以枳、紅橘、酸橘為砧木；但抗病砧木的利用， 應(yīng)考慮最佳砧穗組合和其它病害的干擾， 及土壤條件的影響；應(yīng)提高嫁接口的位置， 要求不低于30cm。砧木是防治此病的根部措施。

3.3 農(nóng)藝措施

田間清潔，搞好排灌系統(tǒng)，防止果園積水；同時要及時防治天牛、吉丁蟲；在中耕除草時，應(yīng)避免損傷基部樹皮，這對減輕發(fā)病也有一定的作用。對于新種植的檸檬樹，應(yīng)在移栽種植前，進(jìn)行土壤和種苗帶菌的檢測，并做好土壤消毒和田園清潔。

3.4 化學(xué)防治

因國家未有專門登記于檸檬上的殺菌劑，只有參考其他作物的病原菌方法進(jìn)行防治。首先要刮除病組織并帶離果園集中處理，然后涂敷25%瑞毒霉WP100～200倍液、90%三乙膦酸鋁WP200倍液、2%硫酸銅液、1∶1∶10波爾多漿和20%甲霜靈100～200倍液等藥劑，也可用石硫合劑加入新鮮牛糞及少量理發(fā)店的碎毛發(fā)敷病部。