4種常見(jiàn)藥（毒）物GC-MS定性分析的離子豐度比

劉少丹 ，閔濤 ，辛國(guó)斌 ，張大明

（1.迪安鑒定科學(xué)研究院，浙江 杭州 310000；2.上海迪安司法鑒定有限公司，上海 200000；3.北京市公安司法鑒定中心，北京 100192）

法醫(yī)毒物分析中，氣相色譜-質(zhì)譜（gas chroma?tography-mass spectrometry，GC-MS）定性分析結(jié)果的確認(rèn)主要基于兩部分：一是保留時(shí)間的確認(rèn)；二是質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析。質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析需要在確認(rèn)保留時(shí)間的前提下進(jìn)行。離子豐度比是指物質(zhì)的特征碎片離子的豐度與基峰豐度的比值。通常特征碎片離子相對(duì)豐度的確認(rèn)指標(biāo)是根據(jù)相對(duì)豐度或離子豐度比的大小分段進(jìn)行比較的，目前最常見(jiàn)的分段是按照特征碎片離子相對(duì)豐度或離子豐度比的大小將其分為4段，各段有其相應(yīng)的最大允許偏差[1-8]。但是目前也有一些指南的判定不考慮相對(duì)豐度或離子豐度比的大小[9-14]。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[15-17]中，要求質(zhì)譜特征碎片離子及相對(duì)豐度一致；行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[18]中，則要求譜庫(kù)檢索匹配率不低于90%。另一行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[19]僅要求生物樣本中出現(xiàn)相應(yīng)特征碎片離子即可，對(duì)相對(duì)豐度沒(méi)有提出要求。雖然近年來(lái)發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)方法、規(guī)范或指南性文件中，不同應(yīng)用領(lǐng)域均對(duì)色譜-質(zhì)譜定性判斷給出了明確的判定要求，但是各標(biāo)準(zhǔn)差異較大，即使是同領(lǐng)域的不同標(biāo)準(zhǔn)[4，14]也存在差異，尚不明確其定性判定要求的具體數(shù)值因何而來(lái)。同時(shí)，多數(shù)指南均提出待檢樣本應(yīng)與空白添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液在可比較的濃度、同一批處理及相同的條件下測(cè)定[1-5，9-17]。da SILVA[20]運(yùn)用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatog?raphy-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）研究2種農(nóng)藥檢出限水平的色譜質(zhì)譜圖，采用貝葉斯定理分析數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)相對(duì)豐度的偏差無(wú)法設(shè)定為一個(gè)具體數(shù)值，只有藥物濃度在檢測(cè)限（limit of examination，LOE）以上時(shí)才有陽(yáng)性的可能。MOL等[21]運(yùn)用不同的液相色譜-質(zhì)譜儀研究蔬菜水果中農(nóng)藥的離子豐度比的最大允許相對(duì)偏差，判定范圍為±45%，但是該實(shí)驗(yàn)沒(méi)有考慮濃度與離子豐度比偏差的關(guān)系。另外，質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析不僅與待測(cè)物質(zhì)濃度有關(guān)，還需考慮其他因素，如選擇合適的特征離子（峰）的數(shù)量。多數(shù)指南[1-5，9-13，15-17]中要求，在全掃描或者選擇離子監(jiān)測(cè)（se?lected ion monitor，SIM）模式下需選擇至少3個(gè)碎片，同時(shí)要求所選擇的特征離子的信噪比（S/N）必須大于3。在此基礎(chǔ)上，本研究通過(guò)采用GC-MS全掃描模式對(duì)地西泮、艾司唑侖、敵敵畏和甲拌磷4種常見(jiàn)藥（毒）物進(jìn)行檢測(cè)，以探討GC-MS檢測(cè)血樣中常見(jiàn)藥（毒）物特征碎片離子的離子豐度比的最大允許偏差，以期為質(zhì)譜定性判斷提供科學(xué)可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

GCMS-TQ8030三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（日本島津公司），7890A-5875C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司），3-30K高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司），PL2002-IC電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］，10-XC-88L醫(yī)用低溫箱（合肥市齊美電器有限公司）。

敵敵畏、甲拌磷、地西泮和艾司唑侖標(biāo)準(zhǔn)品（1 mg/mL）均購(gòu)于中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，磷酸三丁酯（99.8%）和鹽酸雙苯戊二氨酯（SKF525A，99.8%）均購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，甲醇、乙醇及乙酸乙酯為分析純。

1.2 GC-MS條件

GC-MS條件1和GC-MS條件2在實(shí)驗(yàn)室1（Lab1）進(jìn)行，GC-MS條件3在實(shí)驗(yàn)室2（Lab2）進(jìn)行。

1.2.1 GC-MS條件1

GCMS-TQ8030三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，色譜柱為Rxi-5MS毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；柱溫：初始溫度100℃，保持1 min，升溫速率為10℃/min，至280℃保持5 min；載氣為He，流速1 mL/min；分流進(jìn)樣，分流比10∶1，進(jìn)樣體積1μL。

質(zhì)譜條件：電子轟擊（electron impact，EI）離子源，電子束能量70 eV，離子源溫度250℃，接口溫度270℃，溶劑延遲時(shí)間為2min；掃描方式為全掃描，掃描范圍m/z50～450。

1.2.2 GC-MS條件2

GCMS-TQ8030三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，色譜柱為DB-5MS毛細(xì)管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；柱溫：初始溫度80℃，保持2 min，升溫速率為10℃/min，至280℃保持5 min；載氣為He，流速1 mL/min；分流進(jìn)樣，分流比10∶1，進(jìn)樣體積1μL。

質(zhì)譜條件同1.2.1節(jié)所述質(zhì)譜條件。

1.2.3 GC-MS條件3

7890A-5875C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，色譜柱為DB-5MS毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；柱溫：初始溫度100℃，保持1 min，升溫速率為10℃/min，至230℃保持5 min；載氣為He，流速1 mL/min；分流進(jìn)樣，分流比10∶1，進(jìn)樣體積1μL。

質(zhì)譜條件同1.2.1節(jié)所述質(zhì)譜條件。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用甲醇配制質(zhì)量濃度為100 μg/mL的甲拌磷和敵敵畏混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A，用乙醇配制質(zhì)量濃度為100 μg/mL的地西泮和艾司唑侖混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B，分別置于-20℃冰箱冷凍保存。使用時(shí)按需稀釋成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

用乙醇配制質(zhì)量濃度均為1 mg/mL的磷酸三丁酯、SKF525A內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，分別置于-20℃冰箱冷凍保存。使用時(shí)稀釋成10μg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液。

分別取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A，逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為 0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)工作液中均含有2μg/mL的內(nèi)標(biāo)磷酸三丁酯，同一質(zhì)量濃度制備12個(gè)。

分別取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B，逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為 0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)工作液中均含有1μg/mL的內(nèi)標(biāo)SKF525A，同一質(zhì)量濃度制備12個(gè)。

1.4 樣品前處理

樣品前處理程序：移取血液0.5mL，加1mL乙酸乙酯，超聲10 min混勻，-4℃下以10 397×g離心5 min，移取上清液600 μL，添加200 μL不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液和200μL內(nèi)標(biāo)工作液，搖勻后，取1μL進(jìn)樣。

抽取編號(hào)為1～20的20個(gè)來(lái)源的空白血樣，配制成質(zhì)量濃度為0、1.0、2.0、5.0 μg/mL的甲拌磷和敵敵畏混合加標(biāo)血樣，同一質(zhì)量濃度的加標(biāo)血樣在每個(gè)來(lái)源的血樣中均制備3個(gè)。抽取編號(hào)為21的空白血樣，按照上述前處理過(guò)程配制成質(zhì)量濃度為0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL的甲拌磷和敵敵畏混合加標(biāo)血樣，同一質(zhì)量濃度的加標(biāo)血樣制備11個(gè)。上述樣本以Lab1的GC-MS條件1進(jìn)樣。共71個(gè)空白血樣，235個(gè)加標(biāo)血樣。

抽取編號(hào)為1～20的20個(gè)來(lái)源的空白血樣，配制成質(zhì)量濃度為0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的地西泮和艾司唑侖混合加標(biāo)血樣，同一質(zhì)量濃度的加標(biāo)血樣在每個(gè)來(lái)源的血樣中均制備6個(gè)。上述樣本以Lab1的GC-MS條件2進(jìn)樣。共120個(gè)空白血樣，600個(gè)加標(biāo)血樣。

抽取編號(hào)為1～20的20個(gè)來(lái)源的空白血樣，配制成質(zhì)量濃度為0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的甲拌磷和敵敵畏混合加標(biāo)血樣，同一質(zhì)量濃度的加標(biāo)血樣在每個(gè)來(lái)源的血樣中均制備3個(gè)。上述樣本以Lab2的GC-MS條件3進(jìn)樣。共60個(gè)空白血樣，300個(gè)加標(biāo)血樣。

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，血樣添加甲拌磷和敵敵畏的檢出限（limit of detection，LOD，信噪比大于3）和2倍檢出限（2LOD）分別為0.05μg/mL和0.10μg/mL，血樣添加甲拌磷和敵敵畏的定量限（limit of quantitation，LOQ，信噪比大于10）和2倍定量限（2LOQ）分別為0.15 μg/mL和0.30 μg/mL；血樣添加地西泮和艾司唑侖的LOD和2LOD分別為0.03 μg/mL和0.06 μg/mL，血樣添加地西泮和艾司唑侖的LOQ和2LOQ分別為0.10μg/mL和0.20μg/mL。配制相應(yīng)質(zhì)量濃度的血液添加樣本，每個(gè)質(zhì)量濃度制備12個(gè)，共96個(gè)加標(biāo)血樣，按照上述前處理方法進(jìn)行前處理。分別以Lab1的GC-MS條件1和GC-MS條件2進(jìn)樣。同時(shí)按照1.3節(jié)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，制備相應(yīng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度制備12個(gè)。

1.5 進(jìn)樣順序

按照空白乙醇試劑、不同質(zhì)量濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作液、不同濃度加標(biāo)血樣的順序循環(huán)進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中均按照0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL的順序進(jìn)樣，在10.0 μg/mL質(zhì)量濃度后添加洗針步驟。Lab1共有835個(gè)加標(biāo)血樣進(jìn)樣，Lab2共有300個(gè)加標(biāo)血樣進(jìn)樣。

按照空白乙醇試劑、不同質(zhì)量濃度檢出限混合標(biāo)準(zhǔn)工作液、不同濃度檢出限加標(biāo)血樣的順序循環(huán)進(jìn)樣。Lab1共有96個(gè)不同質(zhì)量濃度的加標(biāo)血樣進(jìn)樣。

1.6 數(shù)據(jù)處理

本研究選擇的特征碎片離子如表1所示。由于標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比與濃度和信噪比均相關(guān)，本研究為了更好地反映離子豐度比參考值（reference ion ratios，R-I-R）[21]，在分析標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比與濃度關(guān)系時(shí)，選擇相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard devia?tion，RSD）＜10%的離子豐度比，計(jì)算其平均值。在分析標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比與信噪比關(guān)系時(shí)，選擇信噪比大于100的離子豐度比，計(jì)算其平均值。

表1 常見(jiàn)藥（毒）物的特征碎片離子

加標(biāo)血樣的離子豐度比與R-I-R的差值即為絕對(duì)偏差（deviation，D）1，以百分比形式表示。加標(biāo)血樣的離子豐度比的相對(duì)偏差（relative deviation，RD）1為D1與R-I-R的比值。由于離子豐度比具有濃度依賴(lài)性[14]，離子豐度比的絕對(duì)偏差D2是1～21號(hào)加標(biāo)血樣所測(cè)得的離子豐度比與前一次進(jìn)樣的同一濃度混合標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比相減所得。離子豐度比的D2與其相同濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中離子豐度比的比值為加標(biāo)血樣離子豐度比的相對(duì)偏差RD2。

在2個(gè)實(shí)驗(yàn)室、3種色譜條件下，離子豐度比的D1、D2、RD1、RD2經(jīng)SPSS 20.0軟件的兩樣本t檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)2個(gè)實(shí)驗(yàn)室離子豐度比D1、D2、RD1、RD2的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。因此將2個(gè)實(shí)驗(yàn)室加標(biāo)血樣的離子豐度比數(shù)據(jù)合在一起分析。

假陰性率是指加標(biāo)血樣中各物質(zhì)滿足相應(yīng)的絕對(duì)保留時(shí)間為±0.05 min或相對(duì)保留時(shí)間為±0.5%范圍內(nèi)，同時(shí)離子豐度比的信噪比≥3，依據(jù)MOL等[21]對(duì)信噪比進(jìn)行分段，各分段中不滿足離子豐度比假設(shè)的各個(gè)范圍的最大允許偏差的概率。

假陽(yáng)性率是指空白血樣中各物質(zhì)滿足相應(yīng)的絕對(duì)保留時(shí)間為±0.05 min或相對(duì)保留時(shí)間為±0.5%范圍內(nèi)，且相應(yīng)離子豐度比的相對(duì)偏差在±50%范圍內(nèi)的樣本個(gè)數(shù)所占比例。Lab1中共檢測(cè)191個(gè)空白血樣，用來(lái)分析假陽(yáng)性率。

本實(shí)驗(yàn)中一共有1231個(gè)加標(biāo)血樣，總計(jì)7386個(gè)特征碎片離子的離子豐度比。實(shí)驗(yàn)中將不符合要求的數(shù)據(jù)（信噪比小于3或因人為及儀器因素所致不正常的數(shù)據(jù)）剔除，共6453個(gè)有效數(shù)據(jù)。其中有質(zhì)量濃度為2LOQ的24個(gè)混合加標(biāo)血樣（48個(gè)單標(biāo)血樣），總計(jì)144個(gè)離子豐度比，去除不符合要求的數(shù)據(jù)，滿足實(shí)驗(yàn)條件的離子豐度比數(shù)據(jù)有132個(gè)。

2 結(jié) 果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比與濃度和信噪比的關(guān)系

從表2～3可以看出，各標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比在質(zhì)量濃度為2.0 μg/mL及其以上時(shí)，RSD均小于10%。從圖1～2可以看出，當(dāng)信噪比小于100時(shí)，離子豐度比分布散亂，當(dāng)信噪比大于100時(shí)，分布均一。

表2 Lab1標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比在不同質(zhì)量濃度的平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 （n=12）

表3 Lab2標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比在不同質(zhì)量濃度的平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 （n=12）

圖1 Lab1標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比與信噪比的關(guān)系

圖2 Lab2標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比與信噪比的關(guān)系

2.1.2 離子豐度比的參考值

標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比按濃度和信噪比兩種方式計(jì)算，由于兩種計(jì)算方式的離子豐度比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故以濃度方式計(jì)算的離子豐度比作為R-I-R，具體見(jiàn)表4。

表4 標(biāo)準(zhǔn)品的離子豐度比參考值

2.2 加標(biāo)血樣離子豐度比的偏差

2.2.1 加標(biāo)血樣離子豐度比的偏差與R-I-R的關(guān)系

圖3中離子豐度比的D1有99.97%（6 451/6 453）在±20%范圍內(nèi)，98.76%（6 373/6 453）在±10%范圍內(nèi)。圖4中離子豐度比的RD1有93.47%（6031/6453）在±20%范圍內(nèi)，96.02%（6196/6453）在±25%范圍內(nèi)。

2.2.2 加標(biāo)血樣離子豐度比的偏差與質(zhì)量濃度的關(guān)系

從圖5～6可以看出，D2和RD2隨質(zhì)量濃度的增加均呈減小趨勢(shì)。低質(zhì)量濃度（LOD、2LOD、LOQ）時(shí)，95.04%（6 133/6 453）的D2≤10%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，離子豐度比D2的95%置信區(qū)間為（-12.24%，10.26%）。在低質(zhì)量濃度時(shí)，RD2較大甚至超過(guò)±70%。當(dāng)質(zhì)量濃度為2LOQ時(shí)，95.45%（126/132）的RD2≤50%。但是在質(zhì)量濃度≥2.0 μg/mL時(shí)，95%的RD2≤25%。不考慮質(zhì)量濃度的情況下，95.31%（6 152/6 453）的RD2≤35%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，離子豐度比RD2的95%置信區(qū)間為（-32.26%，37.53%）。

圖3 加標(biāo)血樣離子豐度比的D1與R-I-R的關(guān)系

圖4 加標(biāo)血樣離子豐度比的RD1與R-I-R的關(guān)系

圖5 加標(biāo)血樣離子豐度比的D2與質(zhì)量濃度的關(guān)系

圖6 加標(biāo)血樣離子豐度比的RD2與質(zhì)量濃度的關(guān)系

2.2.3 加標(biāo)血樣離子豐度比的RD1與信噪比的關(guān)系

從圖7可以看出，隨著信噪比的增加，RD1分布在±25%范圍內(nèi)。

圖7 加標(biāo)血樣離子豐度比的RD1與信噪比的關(guān)系

2.2.4 加標(biāo)血樣離子豐度比RD1的分布

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析加標(biāo)血樣離子豐度比的RD1，發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)近似正態(tài)分布，平均值為0.02%，標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD）為10.46%，95%置信區(qū)間為（-20.57%，23.55%），詳見(jiàn)圖8。

2.3 假陰性率

在同一最大允許偏差范圍時(shí)，隨著信噪比的增加，假陰性率減小。在同一信噪比范圍內(nèi)，隨著最大允許偏差范圍的增加，假陰性率減小。在信噪比（3～15）范圍內(nèi)，共有33個(gè)數(shù)據(jù)，最大允許偏差為50%時(shí)，假陰性率為3.0%（1/33）。當(dāng)信噪比≥3時(shí)，最大允許偏差為25%時(shí)，假陰性率為3.4%（219/6453）。具體見(jiàn)表5。

在質(zhì)量濃度為L(zhǎng)OD、2LOD、LOQ、2LOQ時(shí)，Lab1中4種藥（毒）物的假陰性率見(jiàn)表6。當(dāng)質(zhì)量濃度≥2LOQ時(shí)，選擇離子豐度比的相對(duì)偏差進(jìn)行判定，假陰性率低于5%。

圖8 加標(biāo)血樣離子豐度比RD1的分布

表5 加標(biāo)血樣中離子豐度比的最大允許偏差范圍對(duì)假陰性率的影響 （%）

表6 低質(zhì)量濃度時(shí)加標(biāo)血樣離子豐度比的假陰性率

2.4 假陽(yáng)性率

本實(shí)驗(yàn)Lab1中191個(gè)空白血樣均不滿足保留時(shí)間判定的要求，故本實(shí)驗(yàn)的假陽(yáng)性率為0。

3 討 論

在國(guó)外的指南性文件中，離子豐度比的偏差是指待檢樣本特征離子的離子豐度比與同一批處理中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[1-2，10-13]或空白添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[3-4，9]離子豐度比之間的差值，國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)則定義為其與添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)之間的差值[7-8，19]。本實(shí)驗(yàn)中，考慮到已知質(zhì)量濃度的實(shí)際樣本較少，同時(shí)實(shí)際樣本的質(zhì)量濃度是不可控的，不能滿足整個(gè)實(shí)驗(yàn)所需的多個(gè)質(zhì)量濃度點(diǎn)，而且如果采用添加樣本，必須考慮回收率問(wèn)題，質(zhì)量濃度的控制就會(huì)出現(xiàn)一定的偏差，因此選擇對(duì)血樣提取后添加樣本的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的偏差來(lái)進(jìn)行定性的最大允許偏差范圍研究。

3.1 加標(biāo)血樣的離子豐度比偏差的判定

在法醫(yī)毒物分析領(lǐng)域，最具有權(quán)威性的指南性文件有兩個(gè)：一是《法庭毒物分析質(zhì)量控制指南》[4]，在此文件中對(duì)于相對(duì)偏差的判定就是采用典型的四段法，即離子豐度比越小，相對(duì)偏差越大；二是《法庭毒物分析實(shí)驗(yàn)室指南》[14]，在這個(gè)文件中規(guī)定特征碎片的離子豐度比的相對(duì)判定指標(biāo)為±20%，說(shuō)明離子豐度比的相對(duì)偏差是相對(duì)獨(dú)立的，與離子豐度比的大小無(wú)關(guān)。

3.2 加標(biāo)血樣的離子豐度比絕對(duì)偏差的判定

實(shí)際應(yīng)用中很少有指南或者文件采用離子豐度比的絕對(duì)偏差來(lái)作為判定指標(biāo)[9-10，13]。就本實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，當(dāng)4種常見(jiàn)藥（毒）物離子豐度比的相對(duì)偏差的判定范圍從±10%增加到±20%時(shí)，陽(yáng)性率并沒(méi)有明顯的改善。低質(zhì)量濃度（質(zhì)量濃度小于2LOQ）的D2較大，導(dǎo)致RD2的范圍擴(kuò)大。因此在分析生物樣品中物質(zhì)時(shí)，應(yīng)盡量改進(jìn)方法，濃縮物質(zhì)的含量，否則在低質(zhì)量濃度情況下易造成假陰性結(jié)果。因此，就本實(shí)驗(yàn)的儀器、藥（毒）物而言，4種常見(jiàn)藥（毒）物加標(biāo)血樣離子豐度比的絕對(duì)偏差設(shè)定在±10%的范圍更加合理。

3.3 加標(biāo)血樣的離子豐度比相對(duì)偏差的判定

在本實(shí)驗(yàn)中，4種常見(jiàn)藥（毒）物加標(biāo)血樣離子豐度比的相對(duì)偏差無(wú)論是相對(duì)參考值還是信噪比而言，都是相對(duì)獨(dú)立的，不符合四段法的判定要求，更符合《法庭毒物分析實(shí)驗(yàn)室指南》[14]的定性判定要求。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果在±25%內(nèi)變化，比其規(guī)定稍大。只要特征碎片有足夠的響應(yīng)，就可以有一個(gè)穩(wěn)定的離子豐度比和較小的相對(duì)偏差，而與特征離子自身離子豐度比的大小無(wú)明顯關(guān)系?？紤]在低質(zhì)量濃度（質(zhì)量濃度小于2LOQ）或低信噪比（3～15）情況下，只有選擇相對(duì)偏差±50%的判定，假陰性率才會(huì)小于5%。

綜合分析4種常見(jiàn)藥（毒）物加標(biāo)血樣離子豐度比的偏差大小，發(fā)現(xiàn)與質(zhì)量濃度和信噪比均有關(guān)系，建議4種常見(jiàn)藥（毒）物加標(biāo)血樣離子豐度比絕對(duì)偏差的判定范圍為±10%，相對(duì)偏差的判定范圍為±25%，在低質(zhì)量濃度（質(zhì)量濃度小于2LOQ）或低信噪比（3～15）情況下，相對(duì)偏差應(yīng)擴(kuò)大為±50%。由于不同藥物、不同型號(hào)儀器以及不同基質(zhì)如尿液、毛發(fā)、肝組織等都可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅針對(duì)本實(shí)驗(yàn)所用儀器及藥物，因此，本研究存在一定的局限性，應(yīng)進(jìn)一步探討，為法醫(yī)毒物分析領(lǐng)域中物質(zhì)的定性提供更全面、可靠的依據(jù)。