cgVEGF164基因?qū)π∈竺疑L的影響

張豪，張志鵬，郭曉東，馬敏，敖月，劉旭，馬小燕，梁浩，郭旭東

?

基因?qū)π∈竺疑L的影響

張豪1，張志鵬2，郭曉東1，馬敏1，敖月1，劉旭1，馬小燕1，梁浩1，郭旭東1

1. 內(nèi)蒙古大學(xué)，省部共建草原家畜生殖調(diào)控與繁育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特 010070 2. 集寧師范學(xué)院，烏蘭察布 012000

血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是一種二聚體糖蛋白，能夠誘導(dǎo)毛囊血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，調(diào)節(jié)毛囊周圍毛細(xì)血管生成，進(jìn)而影響毛囊的生長發(fā)育。已知是絨山羊基因的一種主要剪接變體，但基因是否具有調(diào)控毛囊生長發(fā)育的作用目前尚不清楚。為初步探究基因?qū)γ疑L的影響及其機(jī)制，本研究通過原核顯微注射制備轉(zhuǎn)基因過量表達(dá)小鼠。通過HE染色法比較轉(zhuǎn)基因小鼠和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈竺业闹睆胶兔芏?，利用Western Blot檢測小鼠背部皮膚中信號蛋白ERK1/2、AKT1、LEF1的磷酸化水平。本研究成功獲得5只陽性cg轉(zhuǎn)基因小鼠(雌雄比為4:1，陽性率8.5%)；與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笙啾?，轉(zhuǎn)基因小鼠毛囊直徑增大、密度增加；經(jīng)檢測轉(zhuǎn)基因小鼠中ERK1/2、AKT1、LEF1的磷酸化水平均上調(diào)。結(jié)果表明，基因具有促進(jìn)小鼠毛囊生長的作用，推測該功能可能與cgVEGF164影響ERK1/2、AKT1和LEF1等信號蛋白的磷酸化有關(guān)。

；轉(zhuǎn)基因小鼠；毛囊生長；磷酸化

毛囊的性狀和結(jié)構(gòu)決定動物毛發(fā)的品質(zhì)，研究毛囊生長調(diào)控機(jī)制對于提高產(chǎn)絨動物產(chǎn)絨量至關(guān)重要。毛囊生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以及調(diào)控生長所需的各類細(xì)胞因子均由其周圍血管(循環(huán)系統(tǒng))提供，因而充足的血液供應(yīng)是毛囊細(xì)胞生長分化的基礎(chǔ)。哺乳動物的毛囊通常呈現(xiàn)周期性變化，包括生長期、退行期和休止期[1,2]。研究顯示，毛囊周圍的毛細(xì)微血管會隨著毛囊周期的變化而變化，毛細(xì)微血管在毛囊生長期比較發(fā)達(dá)，進(jìn)入退行期后逐漸退化[3~5]。

血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是一種由二硫鍵連接而成的二聚體糖蛋白，能夠促進(jìn)血管再生和調(diào)節(jié)血管滲透性[6,7]。研究證實(shí)，VEGF通過與血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)相互作用，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移[8,9]。皮膚中基因的表達(dá)水平在毛囊生長期上調(diào)，進(jìn)入退行期后逐漸降低，在休止期則基本消失[4,6]。在小鼠毛囊結(jié)構(gòu)中，基因主要在外根鞘和毛乳頭中表達(dá)[10]，進(jìn)而誘導(dǎo)毛囊周圍毛細(xì)血管的形成，促進(jìn)外根鞘和毛乳頭細(xì)胞的增殖[11,12]，增大毛囊直徑和毛干長度[13]。

由于mRNA剪切方式的不同，在人中已發(fā)現(xiàn)7種mRNA剪接變體，包括、、、、、和[14~16]。已知是絨山羊基因的一種主要剪接變體，在絨山羊腦、心臟、睪丸、胰腺、脾、腎和肺中都有表達(dá)，與人源基因的同源性高達(dá)94%[17]。已有研究證實(shí)基因能夠促進(jìn)毛發(fā)生長[18~20]，而基因是否具有調(diào)控毛囊生長發(fā)育的作用目前尚不清楚。本研究旨在通過原核顯微注射法，獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，比較轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈竺业闹睆胶蛿?shù)量以及相關(guān)信號蛋白ERK1/2、AKT1、LEF1磷酸化水平的變化，探討外源基因?qū)γ疑L的影響及調(diào)節(jié)機(jī)制，為利用現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)手段提高產(chǎn)絨動物的產(chǎn)絨量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

BDF1雌鼠、CD-1雄鼠、C57小鼠均由內(nèi)蒙古大學(xué)國家清潔級實(shí)驗(yàn)動物繁育室提供。所有研究符合內(nèi)蒙古大學(xué)動物倫理委員會的規(guī)定并授權(quán)。K14-cgVEGF164載體由內(nèi)蒙古大學(xué)王志鋼教授提供[17]，其啟動子為Keratin 14 (K14)，外源基因?yàn)椤?/p>

1.2 注射用外源基因的制備

用限制性內(nèi)切酶Ⅱ?qū)14-cgVEGF164質(zhì)粒載體進(jìn)行線性化酶切，獲得線性化K14-cgVEGF164質(zhì)粒載體。用乙醇沉淀法對線性化K14-cgVEGF164質(zhì)粒載體進(jìn)行純化，最后用TE緩沖液溶解并調(diào)整濃度為1.5 ng/μL。用分光光度計(jì)測定值，值在1.7~1.9之間才可注射。

1.3 原核顯微注射

原核顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠參考文獻(xiàn)[21]中的方法。將6~7周齡性成熟的BDF1母鼠與CD1公鼠合籠，20 h后取見栓母鼠的受精卵。將1×10-6μL左右含K14-cgVEGF164質(zhì)粒載體的注射液注入胚胎雄原核，注射完畢后將胚胎移入KSOM培養(yǎng)液，放入CO2培養(yǎng)箱。30 min后選取25~30枚注射后存活胚胎移入經(jīng)麻醉處理的假孕母鼠輸卵管壺腹部。移植后將假孕母鼠放置于保溫板上待其蘇醒后放回鼠房，懷孕成功母鼠約19天后分娩產(chǎn)仔。

1.4 PCR檢測

根據(jù)K14-cgVEGF164質(zhì)粒載體的序列信息，設(shè)計(jì)一對用于檢測外源基因整合的PCR引物。引物信息：

F：5'-CAGGGTCCGATGGGAAAGTGTA-3'；

R：5'-TGCTGGCTTTGG TGAGGTTTGA-3'。

擴(kuò)增產(chǎn)物為675 bp，產(chǎn)物橫跨K14啟動子和基因。待出生幼鼠長至3周時(shí)，剪取約0.5 cm尾尖提取基因組DNA，進(jìn)行PCR鑒定，確定轉(zhuǎn)基因陽性小鼠。PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性10 min，95℃變性30 s，60℃復(fù)性42 s，72℃延伸45 s，共30個(gè)循環(huán)；最后再72℃延伸7 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.5 qRT-PCR分析

取10周齡轉(zhuǎn)基因小鼠為實(shí)驗(yàn)組，保留同窩的陰性小鼠為非轉(zhuǎn)基因?qū)φ战M。脫毛后剪取背部皮膚組織，液氮研磨后加入800 μL RNAiso Plus，按RNA抽提試劑盒說明書提取總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa，日本)合成cDNA。qRT-PCR擴(kuò)增體系為20 μL，包括：SYBR Premix ExⅡ (2×) 10 μL，上、下游引物各0.4 μL，Rox Reference Dye (50×) 0.4 μL，ddH2O 6.8 μL，cDNA 2 μL。qRT-PCR 擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性10 s，60℃延伸30 s，40個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣品進(jìn)行3次重復(fù)。根據(jù)每個(gè)樣品與內(nèi)參基因所得的值，利用2-ΔΔCt公式分析目的基因mRNA的相對表達(dá)量。目的基因cg和內(nèi)參基因的擴(kuò)增引物見表1。

1.6 Western Blot檢測

取轉(zhuǎn)基因小鼠和同窩非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笃つw組織，放于1.5 mL離心管內(nèi)剪碎，RIPA裂解液裂解細(xì)胞，收集蛋白，聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)PVDF膜。封閉后，相應(yīng)一抗(VEGF164 ab53465、α-tubulin ab15246、ERK1/2 ab17942、P-ERK1/2 ab50011、AKT1 ab32505、P-AKT1 ab66138、LEF1 ab137872、P-LEF1 ab74067均購自美國Abcam公司)4℃孵育過夜，羊抗兔二抗(ab6721購自美國Abcam公司)室溫孵育1 h。最后利用Tanon 5200全自動化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)進(jìn)行曝光處理。

1.7 HE染色與免疫熒光

選取轉(zhuǎn)基因小鼠和同窩非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈蟮谋巢拷M織進(jìn)行固定、脫水透明、浸蠟包埋、切片與貼片、脫蠟、蘇木精與伊紅染色。VEGF164一抗(1∶200)過夜孵育，羊抗兔二抗(ab6717購自美國Abcam公司) (1∶1000)孵育1 h進(jìn)行免疫熒光染色。

1.8 數(shù)據(jù)分析

mRNA和VEGF164蛋白的相對表達(dá)量，毛囊的直徑、密度，ERK1/2、AKT1、LEF1磷酸化水平等數(shù)據(jù)均以平均數(shù)和平均數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用GraphPad Prism 6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行3次以上重復(fù)實(shí)驗(yàn)。>0.05表示沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，用“N.S.”(No significance)表示；<0.05表示差異顯著，<0.01表示差異極顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 Real-time PCR擴(kuò)增引物

2 結(jié)果與分析

2.1 cgVEGF164轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定

本研究共移植原核注射胚胎296枚，獲得59只仔鼠，經(jīng)PCR法初步鑒定共獲得5只轉(zhuǎn)基因小鼠(圖1A)，其編號分別為878號、890號、1008號、1018號和1021號，陽性率為8.5%。將F0代轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型C57小鼠交配，獲得F1代小鼠。將F1代轉(zhuǎn)基因小鼠自交獲得F2代轉(zhuǎn)基因小鼠。出生仔鼠用與原代小鼠相同的鑒定方法進(jìn)行鑒定。所有F0代轉(zhuǎn)基因陽性小鼠都能夠?qū)⑼庠椿騻鬟f給子代(表2)。其中1008號小鼠共獲得6只F2代轉(zhuǎn)基因小鼠，其編號分別為1311、1313、1316、1317、1319和1322 (圖1B)。

2.2 轉(zhuǎn)基因小鼠cgVEGF164 mRNA及蛋白表達(dá)水平的檢測

利用qRT-PCR、Western Blot和免疫熒光染色檢測5只轉(zhuǎn)基因小鼠與同窩非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笃つwmRNA及蛋白的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示，890、1008、1018、1021號轉(zhuǎn)基因陽性小鼠中mRNA及VEGF164蛋白的相對表達(dá)量均高于同窩非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈?，?78號轉(zhuǎn)基因陽性小鼠中mRNA及VEGF164蛋白的相對表達(dá)量與其同窩非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈鬀]有顯著性差異(圖2，A~D)。890號轉(zhuǎn)基因陽性小鼠mRNA相對表達(dá)量最高，是同窩對照小鼠886號的6.25倍(圖2A)；1008號轉(zhuǎn)基因陽性小鼠VEGF164蛋白表達(dá)量最高，是同窩對照小鼠1013號的1.68倍(圖2，B和C)。經(jīng)免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)VEGF164蛋白主要分布于毛囊球部(圖2D)。

2.3 轉(zhuǎn)基因小鼠cgVEGF164 mRNA組織表達(dá)譜檢測及表型分析

為探究在轉(zhuǎn)基因小鼠各組織中的表達(dá)水平，本研究將1008號轉(zhuǎn)基因小鼠F2代作為實(shí)驗(yàn)組，其同窩的非轉(zhuǎn)基因小鼠作為對照組，觀察實(shí)驗(yàn)組與對照組小鼠表型的變化，并利用qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因小鼠各組織中mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明，與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笙啾龋?周齡轉(zhuǎn)基因小鼠的表型無異常變化，生長狀況良好(圖3A)。轉(zhuǎn)基因小鼠腦、脂肪、肌肉、肝臟、肺、脾臟、腎臟、心臟、胃、大腸、小腸、睪丸、卵巢等組織中mRNA的相對表達(dá)量均高于皮膚組織(圖3B)；與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笙啾龋谵D(zhuǎn)基因小鼠腦、脂肪、肌肉、肝臟、肺、脾臟、腎臟、心臟、胃、大腸、小腸、睪丸、卵巢等組織中的表達(dá)量并沒有顯著升高(圖3C)，這可能與K14啟動子是表皮特異啟動子有關(guān)，表明外源基因?qū)D(zhuǎn)基因小鼠其他組織的影響比較小。

圖1 cgVEGF164轉(zhuǎn)基因小鼠PCR鑒定結(jié)果

A：F0代轉(zhuǎn)基因小鼠PCR鑒定結(jié)果。M：200 bp DNA marker；1：質(zhì)粒陽性對照(K14-cgVEGF164 plasmids)；2：空白對照(H2O)；3, 4：非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈螅?~9：F0代轉(zhuǎn)基因小鼠(對應(yīng)編號分別為878、890、1008、1018、1021)。B：1008號小鼠F2代轉(zhuǎn)基因小鼠PCR鑒定結(jié)果。M：200 bp DNA marker；10~15：F2代轉(zhuǎn)基因小鼠(對應(yīng)編號分別為1311、1313、1316、1317、1319和1322)。

表2 cgVEGF164轉(zhuǎn)基因小鼠傳代統(tǒng)計(jì)

2.4 cgVEGF164基因?qū)π∈竺疑L的影響

本研究將1008號轉(zhuǎn)基因小鼠F2代作為實(shí)驗(yàn)組，其同窩非轉(zhuǎn)基因小鼠作為對照組，待小鼠生長到10周齡時(shí)，將兩組小鼠背部剃毛后，取背部組織制備組織切片，經(jīng)HE染色后觀察。結(jié)果顯示，與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笙啾?，轉(zhuǎn)基因小鼠的毛囊直徑明顯增大(圖4A)，毛囊密度顯著升高(圖4B)。轉(zhuǎn)基因小鼠毛囊深入真皮層，而非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈竺以谡嫫颖容^淺的位置(圖4C)。

圖2 轉(zhuǎn)基因小鼠cgVEGF164 mRNA及蛋白表達(dá)水平檢測

A：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈髆RNA表達(dá)量的對比；B：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈骔estern Blot結(jié)果；C：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈骔estern Blot結(jié)果的灰度值分析；D：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈骎EGF164蛋白免疫熒光染色。圖中綠色熒光為VEGF164染色，藍(lán)色熒光為DAPI染色。N.S.表示>0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；*表示<0.05，差異顯著；**表示<0.01，差異極顯著。

圖3 轉(zhuǎn)基因小鼠表型觀察及各組織中cgVEGF164 mRNA相對表達(dá)量

A：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因小鼠的表型觀察；B：轉(zhuǎn)基因小鼠各組織表達(dá)譜；C：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因小鼠mRNA在各組織中相對表達(dá)量。N.S表示>0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.5 VEGF下游信號通路蛋白的檢測

利用Western Blot方法檢測轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈骎EGF下游蛋白ERK1/2、P-ERK1/2、AKT1、P-AKT1、LEF1、P-LEF1的相對表達(dá)量，α-tubulin作為內(nèi)參蛋白，結(jié)果如圖5A所示。通過灰度值計(jì)算P-ERK1/2、P-AKT1、P-LEF1分別占ERK1/2、AKT1、LEF1表達(dá)量的百分比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因小鼠中P-ERK1/2/ERK1/2、P-AKT1/AKT1、P-LEF1/ LEF1分別為44%、51%、11%，均高于對照組18%、11%、8% (圖5B)。

3 討論

轉(zhuǎn)基因動物是指通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源基因整合到動物的基因組中，從而使外源基因在動物體內(nèi)表達(dá)并且可以穩(wěn)定遺傳[22]。建立轉(zhuǎn)基因動物模型，對研究外源基因在動物體內(nèi)的功能和表達(dá)調(diào)控機(jī)制具有至關(guān)重要的作用[23,24]。本研究利用原核顯微注射技術(shù)制作轉(zhuǎn)基因小鼠模型，旨在研究基因?qū)π∈竺疑L的影響。經(jīng)PCR初步鑒定，確定5只小鼠成功轉(zhuǎn)入了基因(編號分別是878、890、1008、1018、1021)，陽性率為8.5%。經(jīng)qRT-PCR和Western Blot進(jìn)一步檢測分析，獲得4只高表達(dá)的轉(zhuǎn)基因陽性小鼠(編號分別是890、1008、1018、1021)。878號小鼠雖然成功轉(zhuǎn)入了基因，但其mRNA和蛋白表達(dá)量不高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈?，推測原因可能是由于本研究中構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體屬于隨機(jī)整合載體，外源基因雖然發(fā)生了基因組整合，但其轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達(dá)效率將受到整合位點(diǎn)的影響而不可預(yù)測。由于K14啟動子是表皮特異啟動子，因而與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笙啾龋蛟谵D(zhuǎn)基因小鼠腦、脂肪、肌肉、肝臟、肺、脾臟、腎臟、心臟、胃、大腸、小腸、睪丸、卵巢等組織中的表達(dá)量并沒有顯著升高。

圖4 轉(zhuǎn)基因小鼠皮膚組織切片觀察

A：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈竺抑睆?；B：轉(zhuǎn)基因小鼠與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈竺颐芏?；C：轉(zhuǎn)基因小鼠和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笫炃衅琀E染色圖(縱切)。*表示<0.05，差異顯著；**表示<0.01，差異極顯著。

圖5 VEGF下游信號通路蛋白的檢測

A：ERK1/2、P-ERK1/2、AKT1、P-AKT1、LEF1、P-LEF1的Western Blot檢測；B：P-ERK1/2、P-AKT1、P-LEF1分別占ERK1/2、AKT1、LEF1表達(dá)量的百分比。*表示<0.05，差異顯著；**表示<0.01，差異極顯著。

基因編碼一段由190個(gè)氨基酸構(gòu)成的多肽，其N端的26個(gè)氨基酸序列與人源的N端完全相同，屬信號肽序列，推測該序列與其分泌功能有關(guān)[25,26]。VEGF是血管再生的關(guān)鍵因子，通過促進(jìn)毛囊周圍毛細(xì)血管的生長，進(jìn)而影響毛發(fā)生長和毛囊周期[27]。本研究使用HE染色法對小鼠背部組織切片進(jìn)行染色觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈笙啾绒D(zhuǎn)基因小鼠毛囊的直徑和密度均增加，毛囊深入真皮層，表明基因具有促進(jìn)毛囊生長的作用。

為進(jìn)一步探究基因參與小鼠毛發(fā)生長的調(diào)節(jié)機(jī)制，本研究通過檢測信號蛋白ERK1/2、AKT、LEF1的磷酸化水平初步確定cgVEGF164與MAPK/ERK1/2、PI-3K-AKT1/PAK和Wnt/β-catenin/ LEF1等信號通路的聯(lián)系。ERK1/2、AKT1、LEF1是與VEGF信號通路相關(guān)的下游信號蛋白，在促進(jìn)毛發(fā)生長和調(diào)節(jié)毛囊周期中扮演重要角色。ERK1/2是MAPK家族成員之一，參與VEGF調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞的增殖[1,12,28,29]。AKT也是MAPK家族成員之一，能夠與VEGFR作用促進(jìn)表皮細(xì)胞的存活和增殖[15,30]。LEF1是Wnt途徑中主要成員之一，與β-catenin蛋白結(jié)合作用于VEGF，調(diào)控毛囊周期促進(jìn)毛發(fā)再生[31~33]。研究結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠背部上皮中ERK1/2、AKT1、LEF1磷酸化水平均高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招∈?，由此我們推斷基因通過促進(jìn)RK1/2、AKT1、LEF1磷酸化調(diào)控毛囊的生長。但是，毛囊的生長是多種生物因子綜合作用的結(jié)果，基因調(diào)控毛囊生長的分子機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。

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The effect ofon the growth of murine hair follicles

Hao Zhang1, Zhipeng Zhang2, Xiaodong Guo1, Min Ma1, Yue Ao1, Xu Liu1, Xiaoyan Ma1, Hao Liang1, Xudong Guo1

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a dimeric glycoprotein that induces proliferation and migration of vascular endothelial cells as well as regulation of capillary formation around hair follicles which affects the growth and development of hair follicles.is a major splice variant of the cashmere goatgene, but its regulation on hair follicles is rarely known. In order to investigate the role ofon the growth of murine hair follicles, we produced keratin 14 promoter-driventransgenic micepronuclear microinjection. Firstly, the diameter and density of hair follicles of transgenic mice were compared with non-transgenic control mice in paraffin sections stained by hematoxylin-eosin (H&E). Then, protein expression levels and the phosphorylation of ERK1/2, AKT1 and LEF1 were examined by Western blot. There are five positive individuals among the neonatal mice (positive rate is 8.5%). Compared with non-transgenic control mice, the diameter and density of hair folliclesintransgenic mice are both obviously increased. The expression levels of P-ERK1/2/ERK1/2, P-AKT1/AKT1 and P-LEF1/LEF1 are significantly higher in transgenic mice than those in non-transgenic control mice. Based on these results, we conclude that cgVEGF164 as a growth factor can improve the growth of hair follicles which might be mediated by increasingthe levels of ERK1/2, AKT1, and LEF1 protein phosphorylation.

; transgenic mice;hair follicle growth; phosphorylation

2018-10-17;

2018-12-12

國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(編號：2013AA102506)和國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號：31160228)資助[Supported by the National High Technology Research and Development Program of China (863Program) (No.2013AA102506) and the National Natural Science Foundation of China (No.31160228)]

張豪，碩士研究生，專業(yè)方向：生殖生物學(xué)與生物技術(shù)。E-mail: 1299842592@qq.com

張志鵬，碩士研究生，專業(yè)方向：生殖生物學(xué)與生物技術(shù)。E-mail: 1910240599@qq.com

張豪和張志鵬并列第一作者。

郭旭東，副研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：生殖生物學(xué)與生物技術(shù)。E-mail: xudguo@163.com

梁浩，博士，研究方向：生殖生物學(xué)與生物技術(shù)。E-mail: liangkaihao@aliyun.com

10.16288/j.yczz.18-136

2019/1/14 13:15:20

URI: http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20190114.1315.002.html

(責(zé)任編委: 盧大儒)