非洲豬瘟病毒的分子病原學(xué)及致病機(jī)理研究進(jìn)展

歐云文 閻傳忠 張杰 馬炳 代軍飛 張永光 賈寧

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，通常表現(xiàn)出全身出血、呼吸障礙和神經(jīng)癥狀等臨床癥狀，具有病程時(shí)間短、高病死率等特征，給受災(zāi)國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的影響。1921年，非洲的肯尼亞首次報(bào)道了ASF疫情，隨后非洲多個(gè)國(guó)家與地區(qū)先后出現(xiàn)疫情；1957年，ASF首次從非洲大陸傳出，進(jìn)入葡萄牙的里斯本地區(qū)；20世紀(jì)60至20世紀(jì)80年代，葡萄牙、西班牙、意大利、法國(guó)、比利時(shí)、荷蘭、馬耳他等歐洲國(guó)家及古巴、巴西、海地等加勒比地區(qū)也相繼暴發(fā)ASF。2007年，ASF首次進(jìn)入格魯吉亞，隨后疫情相繼蔓延至亞美尼亞、俄羅斯和阿塞拜疆等高加索地區(qū)，甚至進(jìn)入到東歐的波蘭、拉脫維亞等地區(qū)，進(jìn)而在該地區(qū)形成一個(gè)新的ASF流行區(qū)域，并出現(xiàn)向更大范圍擴(kuò)散的趨勢(shì)。野豬、家豬和鈍緣蜱是 ASFV的宿主，豬巨噬細(xì)胞是ASFV的靶細(xì)胞。目前缺乏有效的ASFV疫苗和治療方法，因此，該病是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）法定報(bào)告的動(dòng)物疫病之一，中國(guó)也將其列為一類(lèi)動(dòng)物傳染病。病原學(xué)和致病機(jī)理研究作為動(dòng)物病毒研究的重要內(nèi)容，是研究動(dòng)物疫病的理論基礎(chǔ)。作者主要對(duì)ASFV的分子病原學(xué)和致病機(jī)理研究情況進(jìn)行綜述，以期為ASF的防控提供一定的理論依據(jù)。

1 分子病原學(xué)

ASFV是一種單分子線狀雙鏈DNA病毒，屬于雙鏈DNA病毒目，非洲豬瘟病毒科，非洲豬瘟病毒屬，也是 ASFV家族中的唯一成員。病毒基因組末端以共價(jià)鍵閉合，長(zhǎng)為170～190 kb，含有151個(gè)開(kāi)放性閱讀框（ORFs），可編碼 150～200種蛋白質(zhì)?；蚪M中央是長(zhǎng)約 125 kb的保守區(qū)，左端48 kb和右端22 kb中間區(qū)域存在差異，這也是不同分離株的基因組長(zhǎng)度存在差異的主要原因。采用限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行酶切，圖譜分析表明，分離于美洲和歐洲的病毒株為同一個(gè)基因型，而分離于非洲的毒株則具有多種基因型，這進(jìn)一步表明來(lái)自不同區(qū)域的毒株之間存在較大的基因型差異，來(lái)自非洲以外地域的ASFV可能有共同的起源。ASFV基因組變異頻繁，表現(xiàn)出明顯的遺傳多樣性，根據(jù)ASFVP72蛋白C端編碼基因的序列，將ASFV分為22個(gè)基因型，即P72基因型Ⅰ～Ⅹ Ⅻ，如果根據(jù)P54和PB602L基因的中央可變區(qū)（CVR）進(jìn)行遺傳分析，可進(jìn)一步細(xì)化P72基因分型。

2008年，坦桑尼亞暴發(fā)ASF疫情，通過(guò)對(duì)來(lái)自該地區(qū)的死亡家豬組織樣品進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)流行毒株為坦桑尼亞株（2008株），屬于P72基因型ⅩⅤ，并與坦桑尼亞株（2001株）具有很高的同源性。2011年，Uttenthal等從坦桑尼亞無(wú)明顯癥狀的豬樣品中檢測(cè)到ASFV的基因組，進(jìn)行遺傳分析后發(fā)現(xiàn)其與歐洲毒株基因具有很高的相似性，屬于ASFV基因型Ⅱ（即格魯吉亞2007/1株），由此推測(cè)該病毒可能是從歐洲國(guó)家傳入坦桑尼亞，而非來(lái)自其他非洲國(guó)家。Atuhaire等同時(shí)對(duì)2010—2013年暴發(fā)于烏干達(dá)的ASFV進(jìn)行遺傳性相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)新的CVR亞型。Luka等對(duì)來(lái)自尼日利亞2007—2011年的樣本中ASFV的3個(gè)獨(dú)立的基因組區(qū)域進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在P72和P54基因區(qū)域沒(méi)有變化，P72序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明所有的尼日利亞株都屬于基因Ⅰ 型，B602L基因分析結(jié)果表明四聚體重復(fù)數(shù)存在一定差異，這將為ASFV進(jìn)化流行病學(xué)信息提供依據(jù)。Achenbach等采集埃塞俄比亞出現(xiàn)ASF疫情地區(qū)的23頭家豬組織樣品（2011—2014年），進(jìn)行ASFV基因組分析，結(jié)果顯示 ASFV的部分P72基因序列為一個(gè)新的基因型。與此同時(shí)，Gallard等發(fā)現(xiàn)在歐洲地區(qū)，尤其在高加索地區(qū)和俄羅斯發(fā)現(xiàn)的 ASFV分離株存在相同的P72、P54和CVR序列，這表明其來(lái)源于同一個(gè)ASFV毒株。Sanna等對(duì)長(zhǎng)期流行于意大利撒丁島的ASFV進(jìn)行變量序列分析，發(fā)現(xiàn)該撒丁島分離毒株的變異性較低，證實(shí)了該地區(qū)的毒株存在顯著的遺傳穩(wěn)定性。2014年，Carmina等對(duì)流行于立陶宛和波蘭的 ASFV進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)序結(jié)果顯示該毒株與白俄羅斯流行株（2013年）相似，與流行于東歐的毒株同源性為100%，但與格魯吉亞分離毒株（2007株）存在一定差異性。李洪利等根據(jù)P72基因序列，設(shè)計(jì)引物和探針，優(yōu)化反應(yīng)條件，建立了ASFV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，為 ASF的防控提供了一套有效的檢測(cè)方法。與此同時(shí)，李洪利等采用 pET-32a原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了含有主要抗原表位區(qū)域的ASFV VP73蛋白（又名P72蛋白），并制備了多克隆抗體。柏麗華等將ASFVP72基因克隆入Bac-to-Bac系統(tǒng)中進(jìn)行真核表達(dá)，并對(duì)其抗原性進(jìn)行分析。Zhou等對(duì)ASFV與軟蜱、豬之間的同義密碼子使用的相似性程度及ASFV全基因組中病毒功能基因的翻譯起始區(qū)域的同義密碼子使用偏差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)具有U/A末端的密碼子在相同氨基酸的同義密碼子家族中占主導(dǎo)地位；在密碼子使用的相似性程度上，ASFV和軟蜱之間的相似度高于病毒和豬之間的相似度，這表明在密碼子使用模式方面，軟蜱發(fā)揮了比豬更重要的作用。組織細(xì)胞適應(yīng)株（西班牙BA71V分離株）是第一個(gè)被確定基因組全序列的毒株，該毒株常作為實(shí)驗(yàn)室研究的重要對(duì)象。目前，11株ASFV全基因組序列已被測(cè)定，其中1株為無(wú)毒力的西班牙BA71V分離株，1株為有毒力的西班牙E75分離株，1株低毒力毒株分離于葡萄牙軟蜱體內(nèi)，剩余 8株分離于非洲家豬或野豬體內(nèi)。

ASFV是一種正二十面體對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)病毒，病毒直徑為200 nm，其中直徑為70～100 nm的DNA核心位于病毒中間，直徑為172～191 nm的二十面體的衣殼和含類(lèi)脂的囊膜包裹著病毒外周；衣殼呈二十面體對(duì)稱(chēng)，由1892～2172個(gè)殼粒構(gòu)成，中心有孔，呈六棱鏡狀，殼粒間的間距為7.4～8.1 nm。成熟的病毒粒子由多層結(jié)構(gòu)組成，含有50多種病毒編碼蛋白質(zhì)，其中包括結(jié)構(gòu)蛋白、基因轉(zhuǎn)錄和RNA加工所需的酶，這些蛋白是構(gòu)成病毒粒子結(jié)構(gòu)的主要成分，對(duì)病毒粒子的再次感染有重要作用；構(gòu)成病毒粒子的結(jié)構(gòu)蛋白有 P72、P49、P54、P220、P62、CD2v等，其中P72蛋白表達(dá)于ASFV感染晚期，位于病毒衣殼的表面，具有良好的反應(yīng)原性和抗原性，是病毒二十面體衣殼的重要組成成分。P54蛋白位于病毒顆粒類(lèi)脂外膜上，由病毒E183L基因編碼，P54的差異表達(dá)可能會(huì)出現(xiàn)在細(xì)胞傳代過(guò)程中；研究發(fā)現(xiàn)在該蛋白氨基末端含有跨膜區(qū)域，因此，P54蛋白在病毒感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用，尤其在病毒蛋白經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化成病毒包膜前體時(shí)發(fā)揮著非常重要的作用；P220和P62的正常加工是病毒粒子成熟的一個(gè)重要指標(biāo)。CD2v與T細(xì)胞表面黏附因子CD2具有相似性，其能使病毒顆粒吸附于紅細(xì)胞，同時(shí)該蛋白可損壞淋巴細(xì)胞的功能，研究發(fā)現(xiàn)，CD2v的表達(dá)影響ASFV在家豬間的傳播。Borca等開(kāi)發(fā)了具有HA標(biāo)記的 Ep152R蛋白的重組ASFV（ASFV-G-Ep152R-HA），表明Ep152R是早期的病毒蛋白；發(fā)現(xiàn)開(kāi)放閱讀框Ep152R表征可預(yù)測(cè)補(bǔ)體控制模塊/SCR結(jié)構(gòu)域，痘苗病毒蛋白含有該結(jié)構(gòu)域，該蛋白還參與病毒感染期間的阻斷免疫應(yīng)答；通過(guò)酵母雙雜交篩選分析了宿主與Ep152R蛋白之間的相互作用，并鑒定了一種被認(rèn)為是ASFV復(fù)制所必需的BAG6蛋白。

2 致病機(jī)理

2.1 ASFV與宿主動(dòng)物的相互作用

家豬、野豬和鈍緣蜱是 ASFV的主要宿主，其中呼吸道和消化道作為ASFV入侵的主要門(mén)戶(hù)，病毒感染機(jī)體后，首先在扁桃體中進(jìn)行增殖，伴隨著血液循環(huán)而進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，引起病毒血癥，并在血管內(nèi)皮細(xì)胞或巨噬細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，病毒對(duì)毛細(xì)血管、動(dòng)脈、靜脈和淋巴結(jié)的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行侵襲，導(dǎo)致相應(yīng)組織、器官出現(xiàn)出血、漿液性滲出、血栓和梗死等病理變化，以及出現(xiàn)淋巴細(xì)胞凋亡、免疫系統(tǒng)受損、淋巴細(xì)胞顯著減少等特征性表現(xiàn)，骨髓、肺臟、肝臟是急性感染后病毒復(fù)制的二級(jí)場(chǎng)所。

de Carvalho Ferreira等為了研究持續(xù)性感染 ASFV的宿主動(dòng)物的排毒動(dòng)態(tài)，采用 3種毒株來(lái)分析宿主動(dòng)物染毒70 d后的排毒情況，結(jié)果表明，病毒劑量、感染途徑不影響病毒的排泄，鼻、眼和陰道分泌物中的ASFV滴度最低，口咽拭子中始終存在病毒，而糞便中偶爾出現(xiàn)高效價(jià)病毒，這豐富了ASF的傳播和流行病學(xué)的相關(guān)研究。Sánchez-Cordón等采用不同劑量和免疫途徑（肌內(nèi)和鼻內(nèi)途徑）對(duì)豬免疫接種低毒性的OURT88/3毒株，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼻內(nèi)接種低劑量和中劑量（103和104TCID50）可以達(dá)到100%的保護(hù)，受保護(hù)的豬僅出現(xiàn)輕微和短暫的臨床反應(yīng)，在攻擊后的血液樣品中檢測(cè)到瞬時(shí)的病毒基因組；相比之下，用低劑量和中等劑量的肌內(nèi)免疫豬表現(xiàn)出較低的保護(hù)率（50%～66%），且在整個(gè)血液樣品中幾乎檢測(cè)不到病毒基因組。Post等通過(guò)不同年齡和不同感染劑量的ASFV（即12周齡/低病毒劑量、12周齡/高病毒劑量、18周齡/低病毒劑量、18周齡/高病毒劑量）來(lái)研究 ASFV對(duì)豬血液參數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)中等劑量感染組的存活率為 30%，存活率較高的多為年齡較老的豬；還發(fā)現(xiàn)在感染3～5 d后，許多不同類(lèi)型的細(xì)胞減少并伴有體溫升高，這表明γσT細(xì)胞和IL-10水平可能與豬感染ASFV而出現(xiàn)死亡有一定聯(lián)系，上述研究結(jié)果為ASF的防控提供了一定的理論依據(jù)。2007年格魯吉亞出現(xiàn)大范圍的ASF疫情，隨后在2007—2012年間，大量家豬和野豬感染ASFV，研究發(fā)現(xiàn)該病毒的循環(huán)模式也許是其一直保持高致病性的重要原因。2013年，de Carvalho Ferreira首次采用參數(shù)建模的方式對(duì) ASFV在空氣中的傳播情況進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在急性ASF中，帶毒豬可將病毒排泄到空氣中。為了揭示感染宿主反應(yīng)的抑制或調(diào)節(jié)相關(guān)的基因的遺傳變異性，F(xiàn)r?czyk等將時(shí)空分析與67個(gè)野外ASFV分離株的系統(tǒng)發(fā)育研究相結(jié)合，指出與宿主免疫系統(tǒng)的逃避相關(guān)的基因內(nèi)的遺傳變異性可用于追蹤 ASFV分子進(jìn)化方向。Carlson等開(kāi)發(fā)了一個(gè)動(dòng)物模型試圖關(guān)聯(lián)宿主免疫應(yīng)答，在Pret4Δ9GL感染動(dòng)物后，對(duì)不同時(shí)間的ASFV抗體水平，ASFV特異性干擾素 γ（IFN-γ）應(yīng)答和循環(huán)細(xì)胞因子的存在進(jìn)行評(píng)估。此外，病毒在感染過(guò)程中誘導(dǎo)一些細(xì)胞因子的釋放，如 ASFV激活肺泡巨噬細(xì)胞釋放IL-1、TNF-α及氧自由基等，IL-1和TNF-α作為中性粒細(xì)胞的趨化因子，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的聚集，這在急性ASF傳播方面發(fā)揮一定作用，同時(shí)導(dǎo)致微血栓形成和內(nèi)皮細(xì)胞受損，釋放的氧化自由基致使臟器出血和彌散性血管內(nèi)凝血。

ASFV與不同宿主間的相互作用決定了病毒對(duì)不同宿主的致病性存在差異。對(duì)于家豬而言，不同毒株對(duì)家豬的致病力表現(xiàn)出不同，機(jī)體感染病毒后，出現(xiàn)急性死亡到亞臨床感染等不同的臨床癥狀對(duì)于野豬而言，其與家豬表現(xiàn)出不同的特征，野豬感染ASFV后常表現(xiàn)為無(wú)明顯癥狀且僅伴有低病毒血癥，在流行地區(qū)，大多數(shù)的成年野豬血清表現(xiàn)出ASFV陽(yáng)性，并持續(xù)感染，但排毒量較低甚至不排毒對(duì)于蜱而言，其主要是通過(guò)吸食帶毒豬血液而感染ASFV，蜱的腸上皮細(xì)胞中的吞噬細(xì)胞為病毒的初始復(fù)制場(chǎng)所，隨后，病毒復(fù)制出現(xiàn)于未分化的腸細(xì)胞中，2～3周后，病毒擴(kuò)散到其他組織。研究發(fā)現(xiàn)，易感蜱在飽血4周后，其體內(nèi)就出現(xiàn)病毒復(fù)制，且保持較高的病毒滴度，通過(guò)叮咬又可將病毒從蜱體內(nèi)傳播到易感豬體內(nèi)。

2.2 ASFV與宿主細(xì)胞的相互作用

2.2.1 病毒的吸附ASFV感染的主要靶細(xì)胞是豬單核-巨噬細(xì)胞，因此，單核-巨噬細(xì)胞是最先檢測(cè)到病毒的地方，隨后在樹(shù)突狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞和肝細(xì)胞也可檢測(cè)到ASFV。研究發(fā)現(xiàn)，ASFV易感細(xì)胞表面存在很多病毒結(jié)合位點(diǎn)，病毒的入侵過(guò)程需要細(xì)胞表面受體介導(dǎo)，其中細(xì)胞脂質(zhì)膽固醇參與了ASFV的感染過(guò)程。Franzoni等發(fā)現(xiàn)在ASFV感染和未感染的細(xì)胞中，CD163的表達(dá)未出現(xiàn)明顯差異，下調(diào)CD163的表達(dá)未改變單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞亞群中的MHCⅡ的水平；與模擬感染的對(duì)照相比，BA71V感染未活化的（moMF）和活化的（moM2）單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞中MHCⅠ的表達(dá)降低，上述結(jié)果表明在抵抗激活的巨噬細(xì)胞反應(yīng)進(jìn)化機(jī)制方面，ASFV毒株之間存在差異，其中有毒的分離毒株已進(jìn)化了防御機(jī)制，從而促進(jìn)了 ASFV的生存能力。使用CD163抗體作用巨噬細(xì)胞可抑制 ASFV的感染，這表明巨噬細(xì)胞表面的CD163受體與細(xì)胞對(duì) ASFV的易感性密切相關(guān)，但CD163受體是否是介導(dǎo)ASFV感染的受體還需進(jìn)一步驗(yàn)證。Popescu等在完全敲除CD163的豬巨噬細(xì)胞上接種Georgia2007/1毒株，發(fā)現(xiàn)敲除的和野生型豬都變得易感，然而在臨床體征、死亡率、病理學(xué)或病毒血癥方面沒(méi)有出現(xiàn)明顯差異，且在巨噬細(xì)胞的體外感染方面也沒(méi)有出現(xiàn)差異，這表明對(duì)于感染Georgia2007/1毒株而言，CD163不是必需的，但不排除其他 ASFV毒株對(duì)CD163的依賴(lài)性。

此外，病毒編碼的許多蛋白也參與細(xì)胞表面受體的結(jié)合過(guò)程，如在體外試驗(yàn)中，P54和P72中和抗體可阻斷ASFV與巨噬細(xì)胞的結(jié)合，這也表明 P54和 P72蛋白在病毒的吸附過(guò)程中發(fā)揮一定作用。ASFV通過(guò)動(dòng)力素依賴(lài)性和網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞機(jī)制進(jìn)入天然宿主細(xì)胞，利用其囊膜和內(nèi)吞泡膜的融合機(jī)制將病毒釋放到細(xì)胞漿之中，研究者發(fā)現(xiàn)依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白的內(nèi)吞作用和具有活性的磷酸肌醇 3-激酶（PI3K）的參與在病毒的入侵過(guò)程中有重要作用。Bruno等和André s將流式細(xì)胞術(shù)與藥物抑制劑相結(jié)合，采用熒光和電子顯微鏡方法，解釋了 ASFV感染其天然宿主細(xì)胞—巨噬細(xì)胞的感染通路，發(fā)現(xiàn)純化的胞外 ASFV被成型的巨噬細(xì)胞所吞噬，以及被網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用所內(nèi)化的過(guò)程；一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，ASFV顆粒從早期的內(nèi)涵體移動(dòng)到晚期的大囊泡體，并完成脫殼，釋放出具有復(fù)制能力的基因組，其中內(nèi)膜蛋白pE248R對(duì)膜融合和衣殼核的遞送起著重要作用；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)病毒脫殼需要酸性環(huán)境，且該過(guò)程涉及到病毒外膜和蛋白質(zhì)衣殼的破壞。

2.2.2 病毒基因復(fù)制與表達(dá)ASFV進(jìn)入細(xì)胞后，病毒核心被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核周?chē)?，首先利用包裝在病毒粒子內(nèi)部的酶和蛋白因子進(jìn)行早期mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯，為病毒復(fù)制提供所需的DNA聚合酶等材料，在感染6 h后，ASFV開(kāi)始在細(xì)胞漿中進(jìn)行復(fù)制，其復(fù)制方式與痘病毒十分相似。在ASFV感染3～4 h后，病毒DNA復(fù)制在細(xì)胞核中啟動(dòng)，產(chǎn)生小的復(fù)制型中間體，隨后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)，形成大的中間體，并在細(xì)胞質(zhì)的“病毒工廠”中成熟?；蜣D(zhuǎn)錄與DNA復(fù)制的協(xié)調(diào)運(yùn)行對(duì)ASFV基因的表達(dá)有調(diào)控作用，細(xì)胞質(zhì)中病毒的DNA開(kāi)始復(fù)制后，病毒基因的轉(zhuǎn)錄模式就發(fā)生轉(zhuǎn)變，這種轉(zhuǎn)錄機(jī)制讓 ASFV擁有一定的獨(dú)立性，使病毒基因的表達(dá)變得準(zhǔn)確可控。在ASFV體外感染的早期階段，F(xiàn)reitas等對(duì)具有抗病毒活性的氟喹諾酮類(lèi)藥物進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑可通過(guò)ASFV拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ來(lái)干擾病毒的復(fù)制，為相關(guān)藥物潛在靶標(biāo)的篩選和ASF疫苗的開(kāi)發(fā)提供了新的思路。在ASFV感染的早期階段就可檢測(cè)到病毒蛋白的表達(dá)，其中在DNA復(fù)制起始時(shí)，病毒晚期蛋白的表達(dá)也隨之開(kāi)始，編碼蛋白在翻譯后需經(jīng)過(guò)修飾作用，進(jìn)而影響蛋白的定位、穩(wěn)定性和生物功能。

2.2.3 病毒粒子的組裝ASFV的感染過(guò)程涉及波形蛋白的重排，依賴(lài)于微管的波形蛋白在病毒裝配位點(diǎn)聚集成星狀，然后定位到微管組織中心附近，當(dāng)病毒DNA開(kāi)始復(fù)制時(shí)，星狀結(jié)構(gòu)變成籠狀結(jié)構(gòu)，可阻礙病毒成分被轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中，且可將病毒晚期結(jié)構(gòu)蛋白聚集到病毒裝配位點(diǎn)。ASFV病毒粒子的形成發(fā)生于細(xì)胞核周?chē)摹安《炯庸S”區(qū)域，其中 P54蛋白在病毒感染過(guò)程中，尤其在病毒蛋白經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜轉(zhuǎn)化成病毒包膜前體時(shí)發(fā)揮著非常重要的作用。P54蛋白含有一個(gè)LC8動(dòng)力蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域，可與8 ku的輕鏈細(xì)胞質(zhì)動(dòng)力蛋白DLC8發(fā)生交叉反應(yīng)，并在病毒內(nèi)化及將病毒運(yùn)輸?shù)綇?fù)制區(qū)的過(guò)程中起重要作用。在病毒粒子形成的最初階段，P72結(jié)構(gòu)蛋白從細(xì)胞質(zhì)中富集并與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)合，然后在膜凸起的表面上形成衣殼，在凹進(jìn)的表面上形成衣殼心。在病毒裝配階段，首先被病毒蛋白修飾后的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜作為病毒粒子內(nèi)膜，隨后P72蛋白被裝配到病毒粒子之中，同時(shí)多聚蛋白P220被?；筮B接到未成熟的病毒粒子衣殼內(nèi)膜，接著病毒晚期結(jié)構(gòu)蛋白P49得到表達(dá)，形成二十面體病毒粒子，下一步是多聚蛋白P220和P62經(jīng)S273R酶分解加工為P150、P37、P34、P14、P35和 P15蛋白，這6種結(jié)構(gòu)蛋白位于成熟的病毒粒子的核衣殼之中，形成病毒核衣殼和有感染性的病毒粒子，最后病毒粒子二十面體閉合，病毒DNA嵌入及核心蛋白濃縮，最終形成成熟的病毒粒子。研究發(fā)現(xiàn)P220和P62的正常加工是病毒粒子成熟的一個(gè)重要指標(biāo)。Hakobyan等研究了5種具有抗病毒活性的類(lèi)黃酮對(duì)ASFV在Vero細(xì)胞中的復(fù)制的影響，發(fā)現(xiàn)有效劑量的芹菜素具有抗ASFV活性，進(jìn)一步試驗(yàn)結(jié)果表明芹菜素在ASFV感染的早期階段具有高效的作用，該類(lèi)黃酮可抑制 ASFV特異性蛋白質(zhì)的合成和病毒工廠的形成。

2.2.4 病毒的釋放成熟的病毒粒子在“病毒加工廠”形成后，沿著微管排列，依靠微管蛋白系統(tǒng)中常規(guī)驅(qū)動(dòng)蛋白將病毒粒子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜，并通過(guò)出芽的方式從細(xì)胞中釋放出來(lái)。研究發(fā)現(xiàn)，P54蛋白和PE120R蛋白參與了病毒粒子從裝配位點(diǎn)到細(xì)胞膜的運(yùn)輸過(guò)程。具有感染性的成熟病毒粒子在被釋放到胞外后，在病毒粒子表面將形成一層囊膜，該囊膜與ASFV的感染性無(wú)關(guān)，可能參與病毒對(duì)宿主細(xì)胞的吸附作用。此外，病毒CD2v蛋白參與胞外病毒粒子與紅細(xì)胞的結(jié)合，且可能在病毒的出芽過(guò)程中發(fā)揮一定作用。

目前，有關(guān) ASFV與宿主相互作用的研究得到了快速發(fā)展，但關(guān)于病毒逃逸宿主免疫防御的具體機(jī)制，以及宿主的抗感染免疫機(jī)制還不是十分清晰，或許會(huì)成為ASFV研究的重點(diǎn)。

3 小結(jié)

ASF作為一種重要的動(dòng)物疫病，其病原結(jié)構(gòu)和流行病學(xué)復(fù)雜。雖然中國(guó)尚未出現(xiàn)ASF疫情，但隨著經(jīng)濟(jì)的快速增長(zhǎng)，中國(guó)與世界各國(guó)的貿(mào)易往來(lái)日益頻繁，這就增大了中國(guó)暴發(fā)ASF的風(fēng)險(xiǎn)，且ASF具有傳染性強(qiáng)、死亡率高、缺少有效的疫苗等特征，中國(guó)周邊地區(qū)已相繼出現(xiàn)該疫情，目前關(guān)于ASFV的分子病原學(xué)和致病機(jī)理的中文文獻(xiàn)資料的報(bào)道較少。因此，開(kāi)展對(duì)ASF的相關(guān)研究，尤其對(duì)該病毒的分子病原學(xué)和致病機(jī)理的深入研究尤為重要。

（摘自《中國(guó)畜牧獸醫(yī)》2017年第7期）