熱休克蛋白-90α在乳腺癌診斷和療效監(jiān)測及復發(fā)預測中的臨床價值

胡南林 李明舟 朱安婕 王佳玉 羅揚 馬飛 李青 張頻 徐兵河 袁芃

乳腺癌位居全世界女性惡性腫瘤發(fā)病率第1位，乳腺癌患者轉移后的5年生存率為27%或更低［1］。腫瘤標志物水平可在影像學改變出現(xiàn)數(shù)月前即可有變化［2-3］，具有早期診斷、監(jiān)測復發(fā)的價值，但目前對于復發(fā)診斷的臨界值，國際上尚無統(tǒng)一標準［4］。熱休克蛋白-90α（heat shock protein-90α，HSP-90α）是在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用的高度保守蛋白伴侶［5］，可在患者外周血中持續(xù)檢測到，并且其水平與腫瘤良惡性及是否有遠處轉移相關［6-8］。目前HSP-90α在乳腺癌中的診斷敏感性、特異性數(shù)據(jù)缺乏，因此評估其在乳腺癌中的診斷效能具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 選取2016年6月至2016年9月就診中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院615例女性患者的臨床病理資料，分為試驗組399例和對照組216例。試驗組399例均為乳腺癌（包括導管原位癌）患者，再分為靜態(tài)組289例及動態(tài)組110例，將有單次標本的患者歸入靜態(tài)組，根據(jù)TNM分期、組織學類型和分子分型進行分析，有連續(xù)2次或以上標本的患者歸入動態(tài)組并僅用于動態(tài)連續(xù)分析，289例靜態(tài)組中159例Ⅰ～Ⅲ期患者定義為隨診組，97例治療后局部和遠處轉移患者定義為復發(fā)組并用于預測復發(fā)分析，余33例患者分期無法獲得不納入分析；對照組216例包括健康對照人群103例，乳腺良性腫瘤患者51例及非乳腺系統(tǒng)惡性腫瘤患者62例。51例乳腺良性腫瘤患者以乳腺纖維瘤為主（35例），還包括乳腺腺病、導管內乳頭狀瘤、乳腺腺肌癥等（16例），62例非乳腺系統(tǒng)惡性腫瘤患者包括婦科腫瘤32例、呼吸系統(tǒng)9例、淋巴瘤7例、消化系統(tǒng)14例。限于試劑盒檢測特性，不納入處于妊娠、哺乳期患者。本研究采用乳腺癌AJCC指南（第七版）行TNM分期，2013年St.Gallen共識定義行分子分型。以影像學（CT或MRI）作為診斷復發(fā)的金標準。本研究獲得本院倫理委員會批準，且得到受試者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血樣采集及處理 使用EDTA-K2抗凝管采集所有患者的空腹外周靜脈血樣4 mL，混勻后置于4℃離心機，以3 000 r/min離心15 min分離血漿。手術患者至少術前24 h、術后1周采血，化療患者至少于化療前3日內、化療后7日后采血。

1.1.2 血漿HSP-90α表達水平檢測 采用酶聯(lián)免疫法對HSP-90α表達水平行定量檢測，按試劑盒說明書步驟測定，試劑盒購自煙臺普羅吉生物科技發(fā)展有限公司（批號為20151203）。繪制標準曲線，受試者工作曲線（ROC）評估腫瘤標志物診斷效能，計算約登指數(shù)，選取其最大值對應的腫瘤標志物水平為最佳診斷臨界值值。

1.3 統(tǒng)計學分析

應用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學分析，使用Graph-Pad Prism 7進行圖表繪制。兩組非配對分析使用Mann-Whitney U檢驗，兩組配對樣品分析采用Wilcoxon檢驗，3組以上比較采用Kruskal-Wallis檢驗，等級數(shù)據(jù)應用秩和檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌及其他人群血漿中的HSP-90α分布差異

乳腺癌患者血漿中的HSP-90α表達水平明顯高于對照組中的健康對照人群（123.49 ng/mLvs.40.48 ng/mL，P＜0.05）及乳腺良性腫瘤患者（56.36 ng/mL，P＜0.05），但在乳腺癌與非乳腺系統(tǒng)惡性腫瘤（115.8 ng/mL）之間表達水平無顯著性差異（P＞0.05，圖1）。浸潤性乳腺癌患者的Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型及三陰性乳腺癌各分子亞型間的HSP-90α表達水平無顯著性差異（P＞0.05）。乳腺癌TNM分期的Ⅳ期患者血漿中的HSP-90α表達水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者（P＜0.05），但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者間無顯著性差異（P＞0.05，表1）。

圖1 各人群血漿中的HSP-90α分布

表1 399例試驗組乳腺癌患者臨床病理特征及血漿中HSP-90α表達水平

表1 399例試驗組乳腺癌患者臨床病理特征及血漿中HSP-90α表達水平（續(xù)表1）

2.2 血漿中的HSP-90α表達水平在乳腺癌診斷中的價值

檢測經穿刺活檢病理確診的乳腺癌術前患者與對照組中健康對照人群血漿中的HSP-90α表達水平，繪制ROC曲線，曲線下面積（area under curve，AUC）為0.834（95%CI：0.715～0.952，P＜0.0001）。在乳腺癌診斷中，選擇血漿中的HSP-90α表達水平59.7 ng/mL作為截斷值，靈敏度和特異度分別為78.6%和90.3%，陽性和陰性預測值分別為66.67%和93.88%（圖2）。

2.3 血漿中的HSP-90α表達水平對乳腺癌復發(fā)的監(jiān)測作用

檢測隨診組和復發(fā)組乳腺癌患者血漿中的HSP-90α表達水平，繪制ROC曲線，評價血漿中的HSP-90α表達水平對乳腺癌復發(fā)的監(jiān)測價值。選取血漿中HSP-90α表達水平43.22 ng/mL為截斷值時，AUC為0.877（95%CI：0.833～0.922，P＜0.0001），其靈敏度和特異度分別為95.7%和74.5%，陽性和陰性預測值分別為71.54%和96.2%（圖3）。

圖2 血漿中的HSP-90α表達水平在乳腺癌診斷中的ROC曲線

2.4 動態(tài)監(jiān)測療效

8例乳腺癌手術患者，切除腫瘤負荷后，血漿中HSP-90α表達水平的平均值由術前的141.41 ng/mL降至術后的47.87 ng/mL，呈明顯降低趨勢（P＜0.05）。18例行新輔助化療患者，達部分緩解（partial response，PR）后行手術切除患者血漿中的HSP-90α表達水平下降87.82%（P＜0.05），平均值由165.22 ng/mL降至術后20.12 ng/mL，疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）患者血漿中的HSP-90α表達水平平均下降34.36%（P＞0.05）。

3 討論

圖3 血漿中的HSP-90α表達水平在乳腺癌復發(fā)診斷中的ROC曲線

乳腺癌為45歲以下女性最常見的癌癥死因［9］，復發(fā)轉移后中位生存期為1～2年［10-11］。尋找早期診斷及監(jiān)測復發(fā)相關的腫瘤標志物十分必要。本研究發(fā)現(xiàn)，HSP-90α對診斷乳腺癌及監(jiān)測復發(fā)具有潛在價值，乳腺癌患者血漿中的HSP-90α表達水平顯著高于健康對照人群、乳腺良性腫瘤以及乳腺原位癌（P＜0.001），但乳腺癌與非乳腺系統(tǒng)惡性腫瘤血漿中的HSP-90α表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。同時，在肺癌、肝癌、結腸癌、胃癌患者中都發(fā)現(xiàn)HSP-90α表達水平升高［7-8］，血漿中的HSP-90α表達水平可作為腫瘤標志物發(fā)揮協(xié)助診斷及預測復發(fā)的作用［12］，與本研究結果一致。

評價腫瘤標志物的診斷效能時，AUC越大對患者與健康人群的鑒別能力越強，目前臨床上使用的CEA、CA15-3、CA125的AUC為0.70～0.82［13］。本研究選取血漿中的HSP-90α表達水平為59.7 ng/mL作為診斷乳腺癌臨界值時，AUC為0.834，靈敏度和特異度分別為90.3%和78.6%，提示具有較高的診斷效能。

腫瘤標志物在隨診時，應具有良好監(jiān)測復發(fā)的能力。研究顯示，CEA、CA15-3與影像學存在一定的一致性，并可在影像學改變出現(xiàn)數(shù)月前即有變化，可作為乳腺癌術后隨訪指標之一［2-3］。目前，臨床上常用的CEA和CA15-3在乳腺癌不同的分子亞型間存在顯著性差異，在HER-2陽性型及三陰性乳腺癌患者中的表達水平較Luminal型偏低［4］，導致各分子分型間預測復發(fā)或轉移的臨界值無統(tǒng)一標準。本研究顯示，血漿中的HSP-90α表達水平不受乳腺癌分子分型的影響，當選取HSP-90α表達水平為43.22 ng/mL作為預測乳腺癌術后是否復發(fā)臨界值時，其AUC為0.877，靈敏度和特異度分別為95.7%和74.5%，提示與腫瘤復發(fā)有較好的相關性，陰性預測值為96.2%，可能一定程度上降低假陽性率。

綜上所述，本研究首次系統(tǒng)闡述了血漿中的HSP-90α作為乳腺癌腫瘤標志物，在早期輔助診斷及治療后監(jiān)測復發(fā)的臨床價值，但因標本數(shù)量和種類尚不夠充分和全面，還需進一步進行研究。