苦參堿對(duì)阿爾茨海默病小鼠筑巢行為的效果探析

李娟 陳菲 姜成帥

【摘 要】目的：探究苦參堿對(duì)阿爾茨海默病小鼠筑巢行為的影響。方法：將ICR小鼠隨機(jī)分為6組，正常組，模型組，苦參堿高、中、低劑量組和陽(yáng)性藥物組。除正常組小鼠外其余各組小鼠用5?g/?l的LPS溶液進(jìn)行側(cè)腦室注射，正常組小鼠注射等體積的生理鹽水，造模24h后灌胃給藥，苦參堿給藥組高中低劑量分別為40，20，10mg/kg，陽(yáng)性藥物多奈哌齊組給藥劑量為5mg/kg，LPS注射后第25天進(jìn)行筑巢實(shí)驗(yàn)。利用筑巢材料在小鼠飼養(yǎng)籠中進(jìn)行個(gè)體筑巢實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：與正常組比較，模型組小鼠的筑巢能力明顯降低，巢穴松散，面積大，不牢固;與模型組比較，苦參堿高、中、低劑量組均可使小鼠的筑巢能力提高，隨著劑量的增加筑巢的面積越來(lái)越小，巢穴緊湊且牢固。結(jié)論：小鼠側(cè)腦室注射LPS成功地復(fù)制了AD小鼠模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明苦參堿能夠明顯提高AD小鼠的筑巢能力，可初步確定苦參堿對(duì)AD小鼠有一定的治療作用。

【關(guān)鍵詞】苦參堿;阿爾茨海默病;筑巢實(shí)驗(yàn);效果影響

阿爾茨海默?。ˋlzheimers disease， AD）是常見(jiàn)的一種與年齡高度相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病，嚴(yán)重威脅老年人群的健康水平與生活質(zhì)量。隨著人口老齡化的加重，阿爾茨海默病的發(fā)生呈現(xiàn)上升發(fā)展趨勢(shì)，因此受到了人們的重點(diǎn)關(guān)注。人們對(duì)治療阿爾茨海默病的藥物需求迫切，在科學(xué)研究中，如何方便直觀的判斷藥物對(duì)治療阿爾茨海默病是否有效尤為重要。筑巢行為實(shí)驗(yàn)研究方法簡(jiǎn)便易行，且過(guò)程幾乎無(wú)創(chuàng)，可反映小鼠的社會(huì)行為和日?；顒?dòng)能力，為研究AD的動(dòng)物行為學(xué)研究提供了一種較好的手段[1]。

苦參堿在抗炎、保肝、抗菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等方面都具有良好的藥理活性[2-3]，基于腦內(nèi)神經(jīng)炎癥在AD發(fā)病過(guò)程中扮演的重要作用以及苦參堿良好的抗炎活性，本研究通過(guò)小鼠筑巢實(shí)驗(yàn)探討苦參堿對(duì)AD小鼠筑巢行為的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性ICR小鼠72只，體重18-22g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（寧）2015-0001。小鼠飼養(yǎng)在ICV籠具中，自由攝食和飲水。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理審查委員會(huì)審查批準(zhǔn)，編號(hào)為寧醫(yī)大倫理第2014-124號(hào)。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥

對(duì)ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)10天后，進(jìn)行隨機(jī)分組，每組12只，隨機(jī)分為6組：正常組，模型組，苦參堿高中低劑量組（即苦參堿40、20、10mg/kg）和陽(yáng)性藥鹽酸多奈哌齊5mg/kg（Donepezil-5 mg/kg）組。用25?L無(wú)菌平頭微量注射器對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行側(cè)腦室注射，模型組、苦參堿高、中、低劑量組和陽(yáng)性藥物組注射LPS溶液（5?g/?l，3?l/只），正常組小鼠注射等體積的生理鹽水，造模完成。造模24h后按照小鼠體重（0.2ml/10g）開(kāi)始灌胃給藥，陽(yáng)性藥物組的小鼠每天灌胃鹽酸多奈哌齊溶液，苦參堿高中低劑量組灌胃給予相應(yīng)劑量的苦參堿溶液，正常組和模型組小鼠每天灌胃給予等體積的生理鹽水。LPS注射后第25天進(jìn)行筑巢實(shí)驗(yàn)。

1.3 筑巢實(shí)驗(yàn)方法及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)前將單只小鼠分籠飼養(yǎng)，使其適應(yīng)環(huán)境至少24h。在小鼠新的飼養(yǎng)籠（25×15×14cm3）中放入約2cm厚的新墊料，將6塊正方形軟紙片（4cm×4cm）均勻平鋪于墊料上，作為小鼠筑巢材料。將小鼠放入籠內(nèi)，飲食照常供應(yīng)。筑巢實(shí)驗(yàn)時(shí)間為當(dāng)天19：00至次日7：00。

2 結(jié)果

如圖1所示，與正常組相比，模型組小鼠巢穴松散，面積大，不牢固，無(wú)淺坑形成，小鼠的筑巢能力明顯降低;與模型組相比，苦參堿和多奈哌齊組巢穴緊湊面積小，并且牢固，其中給藥組隨著苦參堿劑量的增加筑巢的面積越來(lái)越小，巢穴緊湊且牢固，有可見(jiàn)的碎或整的紙片圍以墊料的淺坑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明側(cè)腦室注射LPS能夠損傷AD小鼠的筑巢能力，不同劑量的苦參堿對(duì)AD小鼠模型均有一定的治療作用，能使AD小鼠的筑巢能力提高。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用側(cè)腦室注射LPS建立AD小鼠模型，造成小鼠筑巢能力下降，給予苦參堿治療能夠提高AD小鼠模型的筑巢能力。

隨著炎性反應(yīng)在AD的發(fā)病機(jī)制中的重要作用被人們?nèi)找嬷匾暎芯抠Y料表明，AD患者腦內(nèi)持續(xù)存在著慢性炎癥反應(yīng)，可能是其他病理特征形成和發(fā)展的誘發(fā)因素[4-5]，隨著新藥的進(jìn)一步研究，中藥通過(guò)多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)對(duì)疾病起著綜合施治、整體調(diào)整的作用，具有使用歷史悠久、療效確切、毒副作用相對(duì)較小的優(yōu)點(diǎn)，中藥提取物不但可以為臨床用藥提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，而且對(duì)于篩選和研制安全有效的抗AD新藥具有十分重要的意義。本次研究顯示苦參堿對(duì)AD小鼠的筑巢能力有一定提高，可初步確定苦參堿對(duì)AD小鼠模型有一定的治療作用[6-7]。

此外小鼠筑巢行為的生物學(xué)基礎(chǔ)復(fù)雜，可能受到許多腦區(qū)和神經(jīng)遞質(zhì)活動(dòng)的控制[5]，目前文獻(xiàn)涉及AD小鼠模型筑巢行為的研究較少，其具體的作用機(jī)制還有待后續(xù)進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1]閔喆，王淑楠，吳軍，黃曉江，方瑜，邱占東，張?zhí)K明.Tg-SwDI小鼠的筑巢行為研究[J].神經(jīng)損傷與功能重建，2014，9（01）：1-5.

[2]張麗華，陳邦恩，潘明佳.苦參堿藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2009，40（6）：1000-1003.

[3]陳曉峽，向小慶，葉紅.苦參堿及氧化苦參堿抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（11）：361-364.

[4]劉健翔，蔣潔，魏崢曦.超聲波堿水法提取貫葉連翹總黃酮[J].廣東化工，2010，37（12）：15-16.

[5]Kaya I， Brinet D， Michno W， et al. Delineating Amyloid Plaque Associated Neuronal Sphingolipids in Transgenic Alzheimer's Disease Mice （tgArcSwe） Using MALDI Imaging Mass Spectrometry[J]. Acs Chemical Neuroscience， 2017，8（2）：347-355.

[6]王淑楠.阿爾茨海默病APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠的筑巢行為研究[D].華中科技大學(xué)，2013.

[7]Feng A， Liu N， Meihua P， et al. Effect of isoflurane anesthesia on hippocampus neuroapoptosis in zinc-deficient APP/PS1 transgenic mice of Alzheimer's disease models[J]. Journal of Jilin University， 2018，44（1）：24-29.