豬藍(lán)耳病抗體試劑盒出現(xiàn)假陽性的確診思路

王孝彬，趙康寧，劉紀(jì)玉，陳煥昌，李月田，周遠(yuǎn)杰，劉媛媛，李 飛

（環(huán)山集團養(yǎng)豬事業(yè)部，山東 威海 264400）

1 概況

1.1 案例一

山東某核心豬場，存欄能力2 500頭基礎(chǔ)母豬，一點式布局。該豬場使用正壓通風(fēng)、空氣過濾系統(tǒng)。場內(nèi)豬群豬藍(lán)耳病雙陰、偽狂犬病gE抗體陰性、PED陰性。2019年12月按照月度監(jiān)測方案，對場內(nèi)豬只采樣監(jiān)測豬藍(lán)耳病抗體。本次監(jiān)測共計采樣92份，分別涉及到保育豬只、育成豬只、妊娠母豬、生產(chǎn)公豬。檢測結(jié)果顯示在育成舍檢測到2份血清豬藍(lán)耳病抗體陽性（見圖1）。

圖1 豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測結(jié)果

1.2 案例二

山東某核心豬場，場內(nèi)存欄能力1 350頭基礎(chǔ)母豬，兩點式布局，配備負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)。場內(nèi)豬群豬藍(lán)耳病雙陰、偽狂犬病gE抗體陰性、PED陰性。2020年 6月3日配懷舍母豬出現(xiàn)1頭妊娠母豬流產(chǎn)，現(xiàn)場人員采集流產(chǎn)胎及母豬血液送檢實驗室檢測豬藍(lán)耳病抗體和偽狂犬病gE抗體，檢測結(jié)果顯示豬藍(lán)耳病抗原陽性，偽狂犬病gE抗體陰性。實驗室對該樣品復(fù)檢，檢側(cè)結(jié)果仍為陽性（見表1）。

表1 流產(chǎn)母豬血樣豬藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果

1.3 案例三

山東某場外公豬站，該公豬站存欄公豬120頭，為場外租賃場。該場為傳統(tǒng)式豬場，負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)。場內(nèi)豬群豬藍(lán)耳病雙陰、偽狂犬病gE抗體陰性。原計劃于2020年2月22日轉(zhuǎn)回母豬場內(nèi)公豬站做生產(chǎn)公豬使用。采集32份血樣送體系內(nèi)實驗室檢測豬藍(lán)耳病抗體和偽狂犬病gE抗體，檢測結(jié)果顯示有1份血清為豬藍(lán)耳病抗體陽性，其余為陰性，偽狂犬病gE抗體均為陰性（見圖2）。2月26日將該公豬站的所有公豬119頭（第1頭陽性豬只已處死）全部采集血樣檢測豬藍(lán)耳病抗體，檢測結(jié)果顯示有1頭豬只豬藍(lán)耳病抗體出現(xiàn)陽性（見圖3）。

圖2 場外公豬站32份血清豬藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果

圖3 場外公豬站119份血清豬藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果

2 臨床評估

以上3個案例，除案例二是由于母豬流產(chǎn)原因采樣送檢，其他兩個案例的豬只在檢測到豬藍(lán)耳病抗體前均沒有表現(xiàn)出明顯的豬藍(lán)耳病癥狀。

3 診斷方法

3.1 復(fù)檢

在收到異常結(jié)果反饋時，第一時間重新采集異常豬只及周邊豬只樣品進行復(fù)檢。

案例一在出現(xiàn)異常結(jié)果后，將陽性豬只定位，采集其通欄內(nèi)的所有豬只樣品送檢。同時將第一次檢測到的陽性樣品送至第三方實驗室確認(rèn)。

案例二在出現(xiàn)異常結(jié)果后，重新采集異常豬只及其周邊豬只血樣送檢，同時將陽性樣品送第三方實驗室進行確認(rèn)。

案例三在收到異常結(jié)果后，將陽性樣品送至第三方實驗室進行確認(rèn)，同時陽性豬只離場處理，后續(xù)將剩余公豬全部采樣送檢。

3.2 雙血清法監(jiān)測豬只抗體水平變化

豬群感染豬藍(lán)耳病野毒，在感染后2周，體內(nèi)抗體出現(xiàn)明顯上升。針對此案例，采集樣品陽性豬只及周邊豬只血樣檢測豬藍(lán)耳病抗體，2周之后再次重復(fù)次操作。根據(jù)兩次的豬只抗體變化顯示豬只的抗體沒有出現(xiàn)明顯的變化，說明豬只沒有感染豬藍(lán)耳病野毒。

分別在3個案例中，記錄異常豬只及其周邊豬只耳號和位置，2周后再次采集血樣，對比兩次的抗體變化情況。

3.3 免疫熒光檢測

對3個案例中累計出現(xiàn)的5份陽性樣品，全部送至第三方檢測實驗室，使用免疫熒光檢測法，檢測樣品中是否存在病毒粒子。

4 結(jié)果

4.1 復(fù)檢

本次3個案例在出現(xiàn)陽性豬只后，實驗室第一時間對陽性樣品進行復(fù)檢，同時通知相關(guān)人員對結(jié)果異常豬只及其周邊豬只再次采樣送檢。

3個案例中的陽性樣品在實驗室復(fù)檢后，案例一和案例二仍然出現(xiàn)陽性結(jié)果（案例一中復(fù)檢后的S/P值分別為：0.589,0.714。案例二中復(fù)檢后的S/P值為0.814）案例三復(fù)檢后的結(jié)果為陰性。

第三方實驗室檢測結(jié)果顯示3個案例的陽性樣品均為陰性。

案例一和案例二中的異常豬只及其周邊豬只重新采樣后檢測結(jié)果均為陰性。在案例三中對生產(chǎn)公豬全群采樣檢測，檢測結(jié)果顯示有1頭公豬豬藍(lán)耳病抗體陽性。

4.2 使用雙血清法評估豬只抗體變化

使用雙血清法評估豬只抗體變化結(jié)果如圖4所示。

圖4 3個案例的抗體監(jiān)測結(jié)果

4.3 免疫熒光檢測

為確認(rèn)出現(xiàn)陽性的樣品是否為豬藍(lán)耳病野毒感染，將該3個案例的5份陽性樣品送至第三方檢測實驗室，使用免疫熒光檢測方法確認(rèn)是否感染野毒，檢測結(jié)果均為陰性（如圖5所示）。

圖5 免疫熒光檢測

5 總結(jié)

豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測是藍(lán)雙陰性豬群最常用的監(jiān)測方法。對于一個豬藍(lán)耳病雙陰性群體而言，定期監(jiān)測豬群的豬藍(lán)耳病抗體，可以有效評估豬群是存在豬藍(lán)耳病野毒感染或者曾經(jīng)感染過豬藍(lán)耳病野毒。

基于IDEXX的實驗室研究（愛德士豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒中文說明書），在95%的置信區(qū)間水平（CL）上，采用該試劑盒檢測PRRSV抗 體 具 有98.8%的 敏感性和99.9%的特異性。意味著該試劑盒的檢測結(jié)果在95%的可靠性的情況下，還會存在0.1%的假陽性結(jié)果。本次案例的假陽性比例分別為2.17%，100%和1.6%。

以上3個案例在收到陽性結(jié)果時，實驗室第一時間對陽性樣品再次進行檢測，確保結(jié)果可靠性。同時通知相關(guān)負(fù)責(zé)人對場內(nèi)豬只臨床情況進行評估。對于異常結(jié)果除實驗室進行復(fù)檢和臨床評估外，還通過抗體變化的監(jiān)測和免疫熒光的檢測來驗證檢測結(jié)果的可靠性。通過的抗體值的變化和免疫熒光的檢測結(jié)果可以得知，本次3個案例中出現(xiàn)的5份陽性樣品，均為假陽性。