HBV感染者病毒載量對(duì)細(xì)胞因子、外周血T淋巴細(xì)胞及肝功能的影響*

黃春燕 江海強(qiáng) 張秀英 嚴(yán)志涵

1.江蘇省江陰市中醫(yī)院檢驗(yàn)科 (江蘇 江陰， 214400) 2.常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 3.無錫市第五人民醫(yī)院

乙型肝炎病毒簡稱HBV，是一種DNA病毒[1，2]。HBV感染者隨病程發(fā)展，會(huì)逐漸發(fā)展為慢性乙型肝炎、肝硬化甚至肝癌，對(duì)人們生命健康帶來嚴(yán)重威脅[3]。據(jù)資料顯示[4，5]，HBV本身對(duì)肝細(xì)胞無直接傷害，但在感染過程中,患者機(jī)體免疫系統(tǒng)將對(duì)HBV形成一系列免疫應(yīng)答反應(yīng)，從而對(duì)肝細(xì)胞造成損害，其中以T淋巴細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫為主要作用。為探討HBV感染患者病毒載量對(duì)細(xì)胞因子、外周血T淋巴細(xì)胞及肝功能的影響效果，本文選取120例HBV感染患者，比較其細(xì)胞因子、外周血T淋巴細(xì)胞以及肝功能情況，進(jìn)一步揭示HBV感染者的臨床發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2017年3月我院收治的HBV感染患者120例，其中男69例、女51例；年齡17～70歲，平均年齡(51.31±11.63)歲；病程6～18月，平均病程(12.74±4.60)月。依據(jù)血清HBV DNA的拷貝數(shù)分為陰性組(0～103copies/ml)、低拷貝組(103～105copies/ml)、中拷貝組(105～107copies/ml)、高拷貝組(≥107copies/ml)。4組患者性別、年齡、病程比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 4組患者一般資料比較

1.2 研究方法 采取實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測儀(型號(hào)7500)檢測患者HBV DNA。使用全自動(dòng)生化分析儀(貝克曼庫爾特AU2700全自動(dòng)生化分析系統(tǒng))采取酶偶聯(lián)法檢測患者肝功能，包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶(GGT)以及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。使用流式細(xì)胞術(shù)(BD FACSCanto 流式細(xì)胞儀)檢測患者T淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物CD4、CD8。使用酶聯(lián)免疫吸附方法(美國RD公司試劑盒實(shí)施)檢測患者白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。以上所有檢測操作，嚴(yán)格遵循相關(guān)說明書操作方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 4組患者細(xì)胞因子情況 見表2。

表2 4組患者細(xì)胞因子情況比較

與陰性組、低拷貝組、中拷貝組比較，*P<0.05

2.2 4組患者外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)情況 4組患者CD4+、CD8+T細(xì)胞水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。見表3。

表3 4組患者外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)比較

2.3 4組患者肝功能情況 見表4。

表4 4組患者肝功能指標(biāo)對(duì)比

與陰性組、低拷貝組、中拷貝組比較，*P<0.05

2.4 肝功能與細(xì)胞因子相關(guān)性 依據(jù)Pearson檢驗(yàn)，HBV感染患者ALT、GGT、AST水平與IL-2、IL-6、TNF-α水平呈顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表5。

表5 肝功能與細(xì)胞因子指標(biāo)相關(guān)性分析

3 討論

全世界約有4億人感染HBV，且感染人數(shù)在逐年上升[6，7]。在我國，90%以上的慢性肝衰竭發(fā)生原因與感染HBV有關(guān)，是致使CHB高死亡率的主要原因[8]。無論HBV感染患者病毒拷貝數(shù)高低與否，使用核苷類藥物均可有效控制病毒復(fù)制，降低病死率，改善預(yù)后[9，10]。

當(dāng)患者肝細(xì)胞出現(xiàn)損害時(shí)，會(huì)使細(xì)胞內(nèi)的酶釋放至血液中，引起血清酶含量上升，通過測定血清酶含量可在一定程度上說明肝功能損壞情況[11，12]。HBV感染患者檢測HBV DNA指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)約45.3%的患者血清為陽性，HBV DNA陽性組與陰性組相比，其ALT、AST水平均明顯上升，且指標(biāo)水平隨病毒復(fù)制數(shù)量上升而上升[13]。在本研究中，四組患者ALT、AST和GGT水平相比，差異顯著(P<0.05)，其中以陰性組3個(gè)指標(biāo)水平最低，以高拷貝組3個(gè)指標(biāo)水平最高，并隨著HBV DNA拷貝數(shù)不斷增加，患者血清中AST、ALT、GGT水平也會(huì)隨之上升，說明隨病毒載量提高，肝功能水平將隨之上升。

據(jù)資料顯示[14，15]，患者感染HBV后，病情發(fā)展、轉(zhuǎn)歸不僅局限于HBV的拷貝數(shù)量，同時(shí)也受到機(jī)體免疫功能影響，其中主要以T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞免疫為主。CD4+T淋巴細(xì)胞是一種輔助性T細(xì)胞，其主要作用為激活并殺傷細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞是一種具有抑制性和殺傷性的T細(xì)胞，主要作用在細(xì)胞清理方面。在正常情況下，機(jī)體CD4+與CD8+T細(xì)胞水平保持一定比例，共同維持機(jī)體免疫能力穩(wěn)態(tài)。當(dāng)感染HBV后，毒性T細(xì)胞會(huì)迅速增殖分化[16]。在本研究中，四組患者CD4+、CD8+T細(xì)胞水平相比，差異不明顯(P>0.05)。據(jù)魯曉娟等人[17]研究表明，HBV DNA陽性和陰性患者CD4+T細(xì)胞細(xì)胞比例會(huì)降低，而CD8+T細(xì)胞比例會(huì)上升，最終CD4+/CD8+T細(xì)胞比值會(huì)降低，免疫功能下降。而HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者相比，CD4+與CD8+T細(xì)胞比例相比差異較小，說明HBV復(fù)制對(duì)T淋巴細(xì)胞水平改變影響小，與本研究結(jié)果一致。

隨著對(duì)細(xì)胞因子研究的不斷深入，其在免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)中的作用受到越來越多的人關(guān)注。IL-2是一種活化T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，具有多向性作用，刺激T細(xì)胞增殖、生長和分化，起誘導(dǎo)細(xì)胞毒作用。IL-6是前炎癥細(xì)胞因子，由淋巴細(xì)胞、纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞等合成，感染發(fā)生后，可促進(jìn)產(chǎn)生抗體，合成急性期反應(yīng)蛋白。同時(shí)，IL-6可促進(jìn)T細(xì)胞表面IL-2受體表達(dá)，增強(qiáng)IL-2作用。TNF-α是由一種由單核-巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞因子，與機(jī)體炎癥反應(yīng)相關(guān)，具有多種生物活性，促進(jìn)膠原合成，刺激肝星狀細(xì)胞開始增殖，從而促進(jìn)釋放大量細(xì)胞因子[18]。TNF-α刺激IL-6分泌，刺激中性粒細(xì)胞聚集與分化，引發(fā)凝血功能障礙、血小板活化、腎小管壞死、肝纖維化，因此細(xì)胞因子水平可反應(yīng)機(jī)體肝組織損傷情況。在本研究中，四組患者IL-2、IL-6和TNF-α水平相比，差異顯著(P<0.05)，且高拷貝組水平最高，陰性組水平最低，說明隨病毒載量提高，細(xì)胞因子水平將隨之上升。

綜上所述，HBV感染會(huì)引起患者肝功能損害，隨病毒載量提高，細(xì)胞因子與肝功能指標(biāo)均明顯上升，但對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞分布影響較小。