卵巢上皮性癌中RBM3及CD146的表達(dá)與臨床意義

曾丹 華金仁 安云婷

【摘要】 目的：分析總結(jié)卵巢上皮性癌中CD146、RNA結(jié)合基序蛋白3（RBM3）的表達(dá)與臨床意義。方法：選取2018年1-12月50例卵巢上皮性癌組織標(biāo)本、25例卵巢上皮良性腫瘤組織標(biāo)本、同期因其他手術(shù)治療切除25例正常卵巢組織標(biāo)本，經(jīng)免疫組織化學(xué)法對(duì)所有標(biāo)本的RBM3及CD146表達(dá)水平進(jìn)行分析。結(jié)果：卵巢上皮性癌組織中CD146與RBM3陽(yáng)性表達(dá)率均高于卵巢上皮良性腫瘤與正常卵巢組織（P<0.05）;卵巢上皮性癌FIGO Ⅲ、Ⅳ期RBM3與CD146表達(dá)陽(yáng)性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，中低分化卵巢上皮性癌RBM3與CD146表達(dá)陽(yáng)性率均高于高分化，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：RBM3及CD146參與卵巢上皮性癌的形成，臨床診斷工作中應(yīng)引起足夠的重視。

【關(guān)鍵詞】 卵巢上皮性癌 RBM3 CD146 卵巢上皮良性腫瘤

[Abstract] Objective： To analyze the expression and clinical significance of CD146 and RNA-binding motif protein 3 （RBM3） in epithelial ovarian cancer. Method： From January to December 2018， 50 cases of ovarian epithelial carcinoma tissues， 25 cases of ovarian epithelial benign tumor tissues， and 25 cases of normal ovarian tissues removed due to other surgical treatments during the same period were selected. The expression levels of RBM3 and CD146 in all samples were analyzed by immunohistochemistry. Result： The positive expression rates of CD146 and RBM3 in ovarian epithelial carcinoma tissues were higher than those in ovarian epithelial benign tumors and normal ovarian tissues （P<0.05）. The positive expression rates of CD146 and RBM3 in ovarian epithelial carcinoma tissues FIGO Ⅲ， Ⅳ stage were higher than those in Ⅰ， Ⅱ stage， and the positive expression rates of RBM3 and CD146 in middle and low differentiated ovarian epithelial carcinoma were higher than those in high differentiated， but the differences were not statistically significant （P>0.05）. Conclusion： RBM3 and CD146 are involved in the formation of epithelial ovarian cancer， and should be paid enough attention in clinical diagnosis.

[Key words] Epithelial ovarian cancer RBM3 CD146 Ovarian epithelial benign tumor

First-authors address： Jiangxi Maternal and Child Health Hospital， Nanchang 330006， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.30.037

卵巢癌為一種常見(jiàn)危及女性生命健康的惡性腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)，其發(fā)生率逐年升高，其中卵巢上皮性癌最為常見(jiàn)。因卵巢所處位置隱匿，早期確診難度大，多數(shù)患者病情確診已處于晚期，導(dǎo)致患者5年存活率僅為30%～40%，威脅著女性生命健康[1]。關(guān)于該疾病的診斷方法多樣，但儀器檢測(cè)均為侵入性操作，會(huì)給患者造成不可避免的應(yīng)激損傷，而隨著臨床診斷技術(shù)發(fā)展，臨床提出可采用分子診斷[2]。近些年研究提出，CD146分子、RNA結(jié)合基序蛋白3（RBM3）的特異表達(dá)與惡性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌等在內(nèi)的癌癥疾病發(fā)生密切相關(guān)，但關(guān)于CD146、RBM3表達(dá)在卵巢上皮性癌的研究較少[3]。本次研究中，積極分析CD146、RBM3在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)，用于指導(dǎo)臨床診治?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1-12月本院住院患者50例卵巢上皮性癌組織標(biāo)本、25例卵巢上皮良性腫瘤組織標(biāo)本、同期因子宮脫垂手術(shù)切除的25例正常卵巢組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有標(biāo)本經(jīng)HE染色后，需由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)生共同閱片檢查，符合卵巢上皮良性腫瘤或卵巢上皮性癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝腎功能異常、心肺功能異常等嚴(yán)重內(nèi)外科疾病者;嚴(yán)重精神疾病、不能配合治療者;術(shù)前未接受內(nèi)分泌、化療、放療治療者。該研究對(duì)象知情同意，且經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2 方法 對(duì)各組織上的RBM3與CD146表達(dá)，經(jīng)免疫組化技術(shù)定位、定性檢測(cè)，主要免疫組化技術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟：（1）篩選蠟塊。登記每個(gè)病例的玻片號(hào)，在玻片庫(kù)中，找到具體病例玻片，于顯微鏡下篩選最佳適合實(shí)施免疫組化玻片，并將所選擇的玻片登記具體的信息。根據(jù)登記玻片信息，從蠟塊庫(kù)中挑選對(duì)應(yīng)蠟塊，制作組織切片。（2）高壓抗炎修復(fù)操作：常規(guī)組織切片經(jīng)二甲苯進(jìn)行脫蠟處理以及梯度酒精水化處理后，浸泡在蒸餾水中，留作待用。取pH值6.0檸檬酸鹽緩沖液（800～1 500 mL）放入壓力鍋中，大火加熱處理，直至沸騰，脫蠟水化后，組織切片放入耐高溫或不銹鋼切片架上，加入已經(jīng)沸騰緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱直至噴氣。自開(kāi)始噴氣計(jì)時(shí)，1～2 min后，拿開(kāi)壓力鍋，冷卻到室溫下，將玻片取出，經(jīng)蒸餾水沖洗2次，用PBS沖洗2次，沖洗時(shí)間3 min/次。（3）免疫組化染色步驟：切片脫蠟處理后進(jìn)行沖洗，安裝固定好塑料欄，并用蒸餾水沖洗。將檸檬酸液加入塑料欄中，之后放入微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。之后取出冷卻15 min，倒掉檸檬酸液，再次經(jīng)蒸餾水沖洗，玻片放入到試劑盒畫(huà)圈，畫(huà)圈后經(jīng)PBS沖洗。沖洗后，加入過(guò)氧化氫，于室溫下進(jìn)行孵育，孵育時(shí)間10 min。PBS至少?zèng)_洗3遍后，去掉PBS，將一抗分別加入到增強(qiáng)劑中，于室溫下孵育至少20 min。PBS沖洗3遍后，加入二抗，于室溫下孵育30 min。PBS沖洗3遍后，甩去PBS液，將新調(diào)配好的DAB液體加入到每張切片上，PBS沖洗3次，沖洗時(shí)間3 min/次。采用自來(lái)水或蒸餾水沖洗，利用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，采用0.1%鹽酸分化，并用自來(lái)水沖洗，PBS沖洗變藍(lán)。自來(lái)水沖洗，切片經(jīng)梯度酒精進(jìn)行脫水干燥處理后，采用中性樹(shù)膠進(jìn)行封片操作。

1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn) （1）比較不同卵巢組織中CD146、RBM3的表達(dá)。（2）比較卵巢上皮性癌不同F(xiàn)IGO分期中CD146、RBM3的表達(dá)。（3）比較卵巢上皮性癌不同病理分級(jí)CD146、RBM3的表達(dá)。由資深病理醫(yī)生采用雙盲法記錄試驗(yàn)結(jié)果，CD146的陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜顯示為棕黃色顆粒，RBM3染色顯示細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒而判定為陽(yáng)性細(xì)胞。分別對(duì)腫瘤細(xì)胞染色強(qiáng)度、陽(yáng)性范圍評(píng)分進(jìn)行評(píng)價(jià)。染色強(qiáng)度評(píng)分：0分無(wú)色，1分淺黃色，2分黃色，3分棕褐色[4-5]。陽(yáng)性細(xì)胞染色范圍：于高倍鏡下顯示每張切片隨機(jī)選5個(gè)視野，染色范圍<25%則0分（-），染色范圍25%～50%則為1分（+），染色強(qiáng)且染色范圍超過(guò)75%為3分（+++），（+）～（+++）為2分。染色強(qiáng)度與染色范圍兩種評(píng)分相乘之積≥1則為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 50例卵巢上皮性癌標(biāo)本，黏液性囊腺癌20例、漿液性囊腺癌30例;年齡36～79歲，平均（57.0±6.2）歲;病理分級(jí)：高分化15例，中低分化35例;根據(jù)國(guó)際婦科聯(lián)盟（FIGO）標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ、Ⅱ期38例，Ⅲ、Ⅳ期12例。25例卵巢上皮良性腫瘤組織標(biāo)本黏液性囊腺瘤12例、漿液性囊腺瘤13例，年齡27～62歲，平均（56.8±6.0）歲。25例正常卵巢組織標(biāo)本，年齡35～77歲，平均（56.5±5.7）歲。

2.2 不同卵巢組織中CD146、RBM3的表達(dá) 卵巢上皮性癌CD146、RBM3陽(yáng)性表達(dá)率均高于卵巢上皮良性腫瘤與正常卵巢組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.3 卵巢上皮性癌不同F(xiàn)IGO分期中CD146、RBM3的表達(dá) Ⅲ、Ⅳ期的RBM3、CD146表達(dá)陽(yáng)性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

2.4 卵巢上皮性癌不同病理分級(jí)CD146、RBM3的表達(dá) 卵巢上皮性癌中低分化RBM3、CD1467陽(yáng)性表達(dá)率均高于高分化，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

卵巢癌為女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)多發(fā)的惡性腫瘤，根據(jù)其組織來(lái)源不同，可分為轉(zhuǎn)移性腫瘤、生殖細(xì)胞腫瘤、性索間質(zhì)腫瘤、卵巢上皮性腫瘤，其發(fā)生率在婦科惡性腫瘤中高居首位，備受臨床重視[6-7]。但因卵巢位置處于盆腔中，再加上其發(fā)病過(guò)程中相對(duì)隱匿，患者病情早期無(wú)明顯癥狀，增加早期診斷難度，再加上當(dāng)前臨床并無(wú)特異性強(qiáng)、敏感性高的篩查方法，診斷難度大，多數(shù)卵巢癌患者病情確診已經(jīng)為FIGO Ⅲ、Ⅳ期，而且卵巢癌具有病情早期轉(zhuǎn)移、化療耐藥以及復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，臨床診治難度大[8-9]。因當(dāng)前臨床對(duì)卵巢上皮性癌的發(fā)生機(jī)制、轉(zhuǎn)移機(jī)制尚未明確，臨床并無(wú)確切有效的疾病篩查方法，為提高疾病的診斷率，臨床需要高特異性、敏感性的生物標(biāo)記物指導(dǎo)臨床診斷、治療以及預(yù)后[10-11]。

CD146是16個(gè)外顯子共同組成單拷貝基因，編碼為單鏈跨膜性糖基化蛋白。CD146可通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間相互作用，促細(xì)胞局部聚集、骨架重構(gòu)，維持細(xì)胞形態(tài)、侵襲轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)細(xì)胞游走等發(fā)揮顯著作用[12-14]。而且其還可參與多種病理生理過(guò)程，增強(qiáng)細(xì)胞間聯(lián)系、維持組織形態(tài)、細(xì)胞間通訊等作用。臨床研究發(fā)現(xiàn)，在黑色素瘤、子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、子宮內(nèi)膜癌、尿路上皮癌等多種惡性組織中，CD146均表現(xiàn)為高表達(dá)，且與臨床分期高低、病理分級(jí)、組織學(xué)分化程度等病理特征密切相關(guān)，這表明CD146水平與腫瘤發(fā)生發(fā)展、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以及轉(zhuǎn)歸等密切相關(guān)[15-17]。這些均表明CD146可以作為卵巢上皮性癌的診斷、靶向治療以及預(yù)后的重要評(píng)估分子。

RBM3可通過(guò)改變細(xì)胞中微小RNA水平，而控制蛋白質(zhì)表達(dá)，影響腫瘤病情的發(fā)展。而且臨床認(rèn)為RBM3為潛在原癌基因，分析原因：RBM3表達(dá)水平與腫瘤分期相關(guān)，這表明RBM3水平影響著腫瘤發(fā)生;RBM3沉默會(huì)增加G2/M期細(xì)胞數(shù)量，導(dǎo)致細(xì)胞最終凋亡;RBM3可提高血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA、IL-8、環(huán)氧化酶的穩(wěn)定、翻譯[18-20]。其中mRNA翻譯水平變化在腫瘤發(fā)生、細(xì)胞轉(zhuǎn)化中發(fā)揮著重要作用，RBM3可與mRNA直接結(jié)合，而改變mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，影響核糖體亞基與起始因子的訪問(wèn)，并調(diào)節(jié)激酶潛在活性。

本次研究中，針對(duì)卵巢上皮性癌檢測(cè)CD146、RBM3這兩項(xiàng)分子指標(biāo)，結(jié)果表明，CD146、RBM3指標(biāo)在卵巢上皮癌組織中陽(yáng)性表達(dá)均明顯高于卵巢上皮良性腫瘤、正常卵巢組織（P<0.05），而且FIGO Ⅲ、Ⅳ期的RBM3、CD146表達(dá)陽(yáng)性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，中低分化RBM3、CD146表達(dá)陽(yáng)性率均高于高分化，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。可能與本研究樣本量較少有關(guān)，但這表明RBM3、CD146分子參與卵巢癌發(fā)生發(fā)展，與上述理論研究?jī)?nèi)容基本相符，臨床可根據(jù)這兩項(xiàng)分子指標(biāo)對(duì)卵巢上皮性癌進(jìn)行診治，臨床在今后的診治工作中，應(yīng)對(duì)這兩項(xiàng)指標(biāo)引起足夠的重視。

綜上所述，CD146、RBM3的高表達(dá)與卵巢上皮性癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可用于指導(dǎo)臨床診治的重要參考指標(biāo)，應(yīng)用價(jià)值顯著。

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（收稿日期：2019-07-01） （本文編輯：田婧）