• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    迷迭香酸的添加對明膠凝膠體系的影響

    2019-01-14 10:37:32張曉潔馬良馬明思鄭紅孫藝張宇昊
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年12期
    關(guān)鍵詞:明膠提取物凝膠

    張曉潔,馬良,馬明思,鄭紅,孫藝,張宇昊

    (西南大學 食品科學學院,重慶,400715)

    明膠是由動物皮膚、骨、肌膜、肌腱等結(jié)締組織中的膠原部分降解而成的天然生物高分子材料之一,因其具有良好的膠凝性、溶脹性和成膜性等,被廣泛應用于食品、材料、醫(yī)藥和攝影行業(yè)[1]。明膠屬于熱可逆型凝膠,環(huán)境溫度的升高會降低明膠的凝膠特性,進而影響產(chǎn)品品質(zhì),這大大限制了明膠在食品工業(yè)的應用范圍。因此如何改善明膠的凝膠特性成為該領域研究的熱點。

    目前,明膠凝膠特性的改善有化學和物理方法,物理方法主要包括紫外照射、γ輻照和超高壓[2],KULISIEWICZ等[3]研究發(fā)現(xiàn)將明膠于200MPa下作用30min后,與對照相比,明膠的儲能模量提高到四倍,凝膠特性也得到改善。物理方法雖不會引入外源性物質(zhì),但存在明膠復性和均一性較差等問題?;瘜W方法主要是將戊二醛、碳化二亞胺、谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶和京尼平等化學交聯(lián)劑加入到明膠中,通過與明膠鏈之間的交聯(lián)作用來改善凝膠網(wǎng)絡結(jié)構(gòu),使得明膠性能得以提高[4-5],MOHTAR等[6]將戊二醛加入魚皮明膠中,發(fā)現(xiàn)明膠的凝膠強度和儲能模量都有所提高,但是有些交聯(lián)劑具有毒性,它們在食品和醫(yī)藥上的應用是不可接受的。近年來,將天然酚類提取物加入到明膠中,通過明膠與酚類物質(zhì)之間的共價或非共價相互作用來提高明膠的機械和流變性能已得到廣泛應用[7]。YASIN等[8]將檸檬草提取物加入雞腳明膠中,發(fā)現(xiàn)明膠的凝膠強度、熱穩(wěn)定性和彈性模量都有所提高;TEMDEE等[9]將富含丹寧酸的腰果樹皮提取物加入到烏賊皮明膠中,明膠的凝膠強度有顯著性提高。

    GMEZESTACA等[10]將迷迭香提取物加入到金槍魚皮中,發(fā)現(xiàn)明膠凝膠強度和損耗模量都有提高,但由于迷迭香提取物為混合物,無法明確其改善明膠凝膠特性的成分及改善機制。迷迭香酸(RosA)是迷迭香提取中主要成分之一,屬于天然多酚化合物[11],具有良好的抗氧化性、抗菌、抗炎和抗病毒活性[12]。本研究以RosA和兔皮明膠為原料,將不同質(zhì)量濃度的RosA加入明膠中,通過熒光光譜、凝膠強度、流變學性能和圓二色譜等方法研究明膠與RosA之間的相互作用,分析該相互作用對明膠的影響,為提高明膠的理化性質(zhì)和后期明膠-RosA可食性膜的制備提供一定的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    兔皮,購于重慶阿興記食品有限公司,原料獲取后洗凈凍藏于-20 ℃冰箱中備用。Ca(OH)2、HCl、Na2S、Nacl、(NH4)2S2O8、二甲基硅油和十二烷基硫酸鈉,成都市科龍化工試劑廠;迷迭香酸(純度97%),上海阿拉丁生化科技股份有限公司;β-巰基乙醇(2-ME)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、考馬斯亮藍R-250和四甲基乙二胺(TEMED),加拿大BIO BASIC公司;質(zhì)量分數(shù)30%丙烯酰胺,北京索萊寶科技有限公司;標準蛋白為(分子質(zhì)量 10~200 kDa),加拿大Fermentas公司。其中Tris、考馬斯亮藍R-250、30%丙烯酰胺為優(yōu)級純,其他試劑均為分析純。

    1.2 主要儀器設備

    JA3003B型電子天平,上海精天電子儀器有限公司;PE20型實驗室pH計,上海梅特勒-托利多儀器有限公司;HX-1005恒溫循環(huán)器,鄭州長城科工貿(mào)有限公司;MOS-500圓二色譜儀,法國Bio-Logic公司;F-4500 熒光分光光度計,日本日立公司;Power PacTM基礎電泳儀,美國Bio-Rad公司;G: BOX EF型凝膠成像系統(tǒng),英國Syn-gene公司;DHR-1流變儀,美國TA公司;TA.XT2i物性測定儀,英國Stable Micro System公司。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 兔皮明膠的制備

    兔皮明膠的提取方法主要參照楊暉等[13]報道的基礎上,具體工藝如下:

    新鮮兔皮→去除皮下脂肪→脫毛→清洗、剪切→除雜蛋白→清洗→稀酸處理(質(zhì)量分數(shù)為1%的鹽酸)→提膠→過濾(用1.6 μm孔徑的濾膜真空過濾)→熱風干燥→成品明膠。

    所得明膠的提取率為(80.25±1.71)%,純度為(93.55±1.42)%。

    1.3.2 樣品的制備

    稱取2 g明膠于燒杯中,加入20 mL蒸餾水于60 ℃下溶解,分別配制質(zhì)量濃度為0、2.4、4.5、9.0和15 g/L的RosA溶液加入明膠溶液中,制成RosA的最終濃度為0、0.8、1.5、3.0和5.0 g/L的明膠溶液,明膠的最終濃度為66.7 g/L。以上溶液充分攪拌混勻后,于60 ℃下保溫30 min得到明膠-RosA共混溶液,之后在室溫下冷卻成膠。

    1.3.3 熒光光譜分析

    按照1.3.2方法配制一系列所需濃度的RosA-明膠共混溶液。用蒸餾水將共混液稀釋成明膠濃度為1 mg/mL,相應的RosA溶液濃度為0~0.07 mg/mL,分別于298、308和318 K下測定熒光光譜。熒光光譜條件為:激發(fā)波長λex=278 nm,發(fā)射波長λem=305 nm,波長范圍280~400 nm,入射和發(fā)射狹縫寬均為5 nm。同時,為了明確RosA對明膠的熒光淬滅方式,采用Stern-Vomler方程計算[14]。

    (1)

    式中:F0和F分別為未加和加入RosA時明膠的熒光強度;[Q]為RosA的濃度,Ksv為Stern-Vomler猝滅常數(shù),Kq為雙分子作用的動態(tài)猝滅速率常數(shù),τ0為熒光分子的平均壽命,一般為10-8s[15]。

    1.3.4 凝膠強度的測定

    參照GB 6783—2013[16]中凝膠強度的測定方法,將1.3.2配制的樣品在(10±0.1)℃恒溫循環(huán)器中凝凍16~18 h,采用TA.XT2i物性測定儀測定凝膠強度。用SMSP/0.5圓柱型探頭以1 mm/s的下壓速度壓入凝膠4 mm,得出凝膠強度數(shù)值。以上試驗重復3次。

    1.3.5 流變性能的測定

    采用DHR-1流變儀測定1.3.2配制的樣品的黏彈性。流變儀的參數(shù)設置主要參照陳麗清等[17],測試夾具40 mm Al平板,板間距為0.10 mm,樣品于流變儀上由40 ℃冷卻到5 ℃,在5 ℃下保持2 min,然后由5 ℃加熱到40 ℃,測定儲能模量G′和損耗模量G″隨溫度掃描的變化并計算相角δ,在動態(tài)黏彈性分析中,通常以tanδ= 1作為明膠膠凝和熔化溫度的轉(zhuǎn)折點,分別對應于膠凝溫度和熔化溫度。

    1.3.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)

    將1.3.2配制的樣品用蒸餾水稀釋成明膠濃度為2 mg/mL,按體積比 4∶1添加樣品緩沖液充分混勻,沸水浴5 min,冷卻后上樣[9]。上樣量為10 μL,其中分離膠和濃縮膠的濃度分別為10%和5%,電流初始設置為 15 mA,待溴酚藍跑到分離膠中后,電流調(diào)至 25 mA,電泳時間約1 h。電泳結(jié)束后用考馬斯亮藍R-250進行染色,2 h后用脫色液于30 ℃下振蕩脫色,直至背景藍色被脫凈,然后用凝膠成像系統(tǒng)拍攝電泳圖譜并用Gene Tools數(shù)據(jù)處理軟件進行分析。

    1.3.7 圓二色譜分析(circular dichroism, CD)

    將1.3.2配制的樣品用蒸餾水稀釋成明膠濃度為1 mg/mL,并進行圓二色譜分析,每個實驗重復3次。測定波長范圍為190~240 nm,反應條件為25 ℃,比色皿光程為1 mm,掃描速度為50 nm/min,記錄橢圓率并用圓二色軟件CDPro計算蛋白二級結(jié)構(gòu)組成。

    1.3.8 數(shù)據(jù)分析

    數(shù)據(jù)分析采用Origin 8.6和SPSS 17.0軟件分析,每次試驗設置3個平行實驗,數(shù)據(jù)以平均值±標準偏差表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 熒光光譜分析

    在構(gòu)成明膠分子的18種氨基酸中,只有酪氨酸有熒光產(chǎn)生,其中酪氨酸的發(fā)射波長在304 nm左右。如圖1所示,RosA的加入造成熒光淬滅,使得熒光強度降低,說明兩者可能存在相互作用。通常來講,熒光淬滅可以分為動態(tài)淬滅和靜態(tài)淬滅,動態(tài)猝滅依賴于擴散,即溫度的上升能夠增加分子的有效碰撞,因此Ksv也會隨著溫度的升高而增大,說明熒光淬滅主要是由分子碰撞造成,未產(chǎn)生分子間相互作用;而靜態(tài)猝滅是由于猝滅分子和熒光發(fā)色團結(jié)合而生成了一種基態(tài)復合物,隨著溫度的升高基態(tài)復合物的穩(wěn)定性將會降低,因此Ksv將會隨著溫度的升高而減小[18],說明分子間產(chǎn)生相互作用。

    圖1 RosA對明膠熒光光譜的影響Fig.1 Effects of RosA on the fluorescence spectra of gelatin 注:λex=278 nm,明膠濃度為1 mg/mL,a-g代表加入的RosA濃度 為0、0.004、0.007、0.01、0.02、0.04、0.07 mg/mL。

    由圖2和表1可知,隨著溫度的升高,Ksv在逐漸減少,說明明膠與RosA之間發(fā)生了相互作用,形成復合物,此外,Kq值(表1)的數(shù)量級遠大于動態(tài)猝滅的最大猝滅速率常數(shù)2.0×1010L/(mol·s),同樣說明兩者之間為靜態(tài)猝滅方式,產(chǎn)生了分子間的相互作用。

    圖2 不同溫度下RosA對明膠熒光光譜的影響Fig.2 Effects of RosA on the fluorescence spectra of gelatin at different temperatures

    表1 三種溫度下RosA與明膠相互作用的猝滅常數(shù) (Ksv)和速率常數(shù)(Kq)Table 1 The stern-volmer quenching constants and rate constants of gelatin quenched by RosA at different temperatures

    溫度/K猝滅常數(shù)Ksv×10-5/(L·moL-1)速率常數(shù)Kq×10-12/[L·(mol·s)-1]R22980.5775.770.997 93080.5335.330.991 03180.4954.950.993 1

    2.2 凝膠強度

    如圖3所示,當RosA質(zhì)量濃度為0.8 g/L時,凝膠強度無顯著性變化(p>0.05),隨著RosA質(zhì)量濃度繼續(xù)增大,明膠凝膠強度顯著增加(p<0.05),當濃度為5 g/L時,凝膠強度由459.547 g增至548.01 g,與GMEZESTACA等[10]研究結(jié)果一致。GMEZESTACA等[10]將迷迭香提取物加入到魚皮和牛皮明膠,凝膠強度都有顯著提高,這歸因于明膠與酚類物質(zhì)之間的非共價相互作用。RosA的添加可以增強明膠凝膠強度,可能是因為一分子RosA中含有的4個酚羥基和1個羧基,可能分別與明膠分子中N-H基團結(jié)合形成氫鍵,從而起到了明膠分子間“橋梁”的作用,增加了凝膠體系的緊密度,使得凝膠強度增加[19]。也就是說明膠與酚類之間的非共價作用在其中起到主導。KAEWDANG等[20]研究發(fā)現(xiàn),添加一定濃度的椰子殼提取物可以顯著提高金槍魚鰾明膠的凝膠強度,這是由于椰子殼中主要物質(zhì)是丹寧酸,丹寧酸與明膠之間主要通過氫鍵或疏水作用產(chǎn)生相互作用,有助于形成更強的凝膠網(wǎng)絡,使得凝膠強度增加,該結(jié)論與本研究分析一致。

    圖3 含有不同濃度RosA的明膠的凝膠強度Fig.3 Gel strength of gelatin incorporated with RosA at different concentrations

    2.3 流變性能

    如圖4所示,在凝膠體系下(低溫),RosA的添加可以增加明膠的G′和G″,但G′和G″隨RosA的添加量的增加變化趨勢不同,隨著RosA質(zhì)量濃度的增加,明膠樣品的G′呈先增加后下降的趨勢,G″呈現(xiàn)單純上升趨勢。MOHTAR等[6]研究表明將咖啡酸加入到魚皮明膠中,明膠樣品的G′隨著咖啡酸濃度的增加先升高后降低;GMEZESTACA等[10]研究表明將高濃度的迷迭香提取物加入到金槍魚皮明膠中,明膠樣品的G″有明顯提高,這是由于明膠部分肽鏈在形成凝膠過程中并沒有直接參與到蛋白凝膠基質(zhì)中,而是與酚類物質(zhì)之間發(fā)生了相互作用。這些均與本研究結(jié)果一致。

    這可能是因為當RosA添加量達到5 g/L時,由于大量的酚羥基和羧基造成了明膠鏈的凝聚,形成了明膠-RosA的絡合物,此時明膠凝膠的透明度降低可以說明這一推測的合理性。絡合物的形成可能影響了明膠分子形成類三螺旋結(jié)構(gòu)的形成,從而降低了凝膠體系的彈性,造成G′的降低。但是由于RosA為連接的蛋白聚集體的大量存在,賦予了凝膠更好的黏性,使得G″進一步升高。

    圖4 含有不同濃度RosA明膠在升溫和降溫過程中的儲能模量和損耗模量的變化Fig.4 Evolution of G′ and G″ during heating and cooling processes of gelatin incorporated with RosA at different concentrations

    由圖5可知,RosA的加入并沒有顯著性地改變明膠樣品的的膠凝和熔化溫度,這說明明膠在形成凝膠和溶膠過程中,RosA并未參與類三螺旋結(jié)構(gòu)的形成,GMEZESTACA等[10]將迷迭香提取物分別加入到魚皮和牛皮明膠中,發(fā)現(xiàn)明膠樣品的膠凝和熔化溫度并未發(fā)生顯著性變化,說明添加迷迭香提取物對明膠類三螺旋結(jié)構(gòu)的形成只有微小干擾;GMEZGUILLéN等[21]將默塔葉提取物加入到魚皮明膠中也得到相似的結(jié)果,含有默塔葉提取物的明膠與單純明膠都具有相同的熔化溫度。此結(jié)果與本研究結(jié)果一致。

    圖5 含有不同濃度RosA明膠的膠凝和熔化溫度Fig.5 Gelation and melting temperature of gelatin incorpo- rated with RosA at different concentrations

    2.4 凝膠電泳分析

    如圖6所示,不同的明膠樣品均含有明顯的β、α1和α2鏈,與對照相比,含有RosA的明膠樣品并無明顯區(qū)別,這是因為RosA與明膠之間主要是形成氫鍵等非共價作用,在電泳條件下,全部被SDS破壞。KAEWDANG等[21]將一定濃度的椰子殼提取物(主要物質(zhì)是丹寧酸)加入到金槍魚鰾明膠中,同樣發(fā)現(xiàn)電泳圖譜并無明顯區(qū)別,這是因為椰子殼提取物與魚鰾明膠之間主要發(fā)生氫鍵或疏水相互作用,SDS溶液能夠破壞這些弱鍵,使得圖譜沒有明顯差異。

    圖6 含有不同濃度RosA明膠的SDS電泳圖譜Fig.6 SDS-PAGE pattern of gelatin incorporated with RosA at different concentrations 注:M代表Maker,1,2,3,4,5分別代表迷迭香酸質(zhì)量濃度為 0、0.8、1.5、3、5 g/L。

    2.5 圓二色譜分析

    圓二色譜法可以有效測定蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)而廣泛應用于研究蛋白質(zhì)與小分子物質(zhì)之間的相互作用。研究表明[22],明膠通常在198 nm處有一負峰,在220 nm處有一正峰,不同的出峰位置可能與明膠的種類和提取方法有關(guān)。此外,在208 nm和222 nm處負特征峰與α螺旋結(jié)構(gòu)的存在有關(guān),在195 nm處正峰和216 nm處負峰與β折疊有關(guān)[23]。

    由圖7和表2可知,所有的明膠樣品均在210 nm和222 nm處有明顯的負峰和正峰,RosA的加入并沒有使明膠樣品的正負吸收峰位置發(fā)生偏移,但隨著RosA濃度的增加,吸收峰的強度在逐漸減少。

    圖7 含有不同濃度RosA明膠的圓二色譜圖Fig.7 CD spectra of gelatin incorporated with RosA at different concentrations 注:a-e分別代表RosA質(zhì)量濃度為0、0.8、1.5、3、5 g/L。

    RosA的加入使得α螺旋結(jié)構(gòu)部分解旋,α螺旋含量降低,β折疊含量升高,這可能是因為RosA的加入使得明膠肽鏈結(jié)構(gòu)部分展開。α螺旋主要靠分子內(nèi)的羰基氧和氨基氫之間形成的氫鍵維持穩(wěn)定[24], RosA含有的酚羥基和羧基與明膠的氨基之間形成新的氫鍵,進而破壞明膠原有的氫鍵平衡,從而導致α螺旋的解旋,同時伴隨著β折疊的形成。

    表2 含有不同濃度RosA明膠的二級結(jié)構(gòu)分析Table 2 Secondary structural analysis of gelatin incorpo- rated with RosA at different concentrations

    3 結(jié)論

    本研究分析了兔皮明膠與RosA之間的相互作用。研究發(fā)現(xiàn)RosA能對明膠產(chǎn)生很強的猝滅效果,且猝滅機制為生成復合物的靜態(tài)猝滅。RosA可以提高明膠的凝膠強度,使明膠的黏性和彈性都有所增加,但對膠凝和熔化溫度沒有明顯影響,這可能是由于RosA與明膠之間通過氫鍵發(fā)生作用,并在明膠分子間起到“橋梁作用”,但對于明膠類三螺旋結(jié)構(gòu)的形成沒有明顯影響。SDS-PAGE結(jié)果也證實了經(jīng)過前處理后,RosA與明膠的相互作用全被破壞,使得電泳圖譜沒有明顯區(qū)別,說明它們之間相互作用為非共價作用。圓二色譜分析表明,隨著RosA的添加量增加,明膠結(jié)構(gòu)展開,α螺旋含量減少,β折疊含量增加。

    猜你喜歡
    明膠提取物凝膠
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:44
    中藥提取物或可用于治療肥胖
    中老年保健(2021年5期)2021-12-02 15:48:21
    纖維素氣凝膠的制備與應用研究進展
    陶瓷學報(2021年1期)2021-04-13 01:33:02
    超輕航天材料——氣凝膠
    軍事文摘(2020年20期)2020-11-16 00:31:56
    保暖神器——氣凝膠外套
    “凍結(jié)的煙”——氣凝膠
    神奇的落葉松提取物
    紫地榆提取物的止血作用
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:27
    超高壓明膠理化性質(zhì)分析
    復凝法制備明膠微球
    河南科技(2014年22期)2014-02-27 14:18:07
    97精品久久久久久久久久精品| a级毛色黄片| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久久久久午夜电影| 久久热精品热| 国产精品国产av在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国内精品宾馆在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久久久国产网址| 午夜视频国产福利| 久久久久性生活片| av播播在线观看一区| 国产综合懂色| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久久久久久久大av| 久热久热在线精品观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 如何舔出高潮| www.色视频.com| 少妇的逼水好多| 欧美日韩亚洲高清精品| 一本一本综合久久| 亚洲精品国产成人久久av| 99视频精品全部免费 在线| videos熟女内射| 久热久热在线精品观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 色哟哟·www| 免费观看在线日韩| 日本免费在线观看一区| 国产极品天堂在线| 婷婷色综合大香蕉| 久久久精品94久久精品| 大片免费播放器 马上看| 在线免费十八禁| 免费看av在线观看网站| 日韩电影二区| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 69av精品久久久久久| 丝袜脚勾引网站| 国产视频内射| 亚洲精品第二区| 亚洲伊人久久精品综合| 国产真实伦视频高清在线观看| 色综合色国产| 久久女婷五月综合色啪小说 | 精品人妻熟女av久视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 激情 狠狠 欧美| 国产黄a三级三级三级人| 五月玫瑰六月丁香| 精品午夜福利在线看| 国产乱人视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 超碰97精品在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产高清不卡午夜福利| 久久久精品免费免费高清| 老司机影院成人| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久精品国产自在天天线| 亚洲av欧美aⅴ国产| 人体艺术视频欧美日本| 一个人看的www免费观看视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日本黄大片高清| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲av成人精品一二三区| 国产亚洲91精品色在线| 六月丁香七月| 亚洲美女搞黄在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 18禁动态无遮挡网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲最大成人中文| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品一区在线观看国产| 成年人午夜在线观看视频| 高清毛片免费看| 国产午夜精品一二区理论片| av.在线天堂| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 搡老乐熟女国产| 最近手机中文字幕大全| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲经典国产精华液单| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 观看美女的网站| 亚洲国产色片| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美+日韩+精品| 久久久久久九九精品二区国产| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 卡戴珊不雅视频在线播放| 在线免费观看不下载黄p国产| 男女那种视频在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产真实伦视频高清在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产爽快片一区二区三区| 人人妻人人看人人澡| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日本免费在线观看一区| 七月丁香在线播放| 欧美成人一区二区免费高清观看| 中文字幕制服av| 亚洲精品456在线播放app| 青春草视频在线免费观看| 看十八女毛片水多多多| 国产 一区精品| 亚洲精品国产成人久久av| 男人和女人高潮做爰伦理| 内地一区二区视频在线| 国产成人freesex在线| 国产永久视频网站| 国产成年人精品一区二区| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久久久国产精品人妻一区二区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 色网站视频免费| 亚洲天堂av无毛| 97在线视频观看| 国内精品宾馆在线| 亚洲三级黄色毛片| 天堂网av新在线| 在线观看免费高清a一片| 永久免费av网站大全| 插逼视频在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 18+在线观看网站| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲精品国产av蜜桃| 免费在线观看成人毛片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产亚洲一区二区精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| tube8黄色片| 18+在线观看网站| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲久久久久久中文字幕| a级毛色黄片| 麻豆乱淫一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 91精品伊人久久大香线蕉| 国模一区二区三区四区视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久6这里有精品| 在线观看免费高清a一片| 亚洲欧美清纯卡通| 日韩亚洲欧美综合| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产色婷婷99| 国产精品人妻久久久久久| 岛国毛片在线播放| 草草在线视频免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲真实伦在线观看| 人人妻人人看人人澡| 国产v大片淫在线免费观看| 一级av片app| 久热久热在线精品观看| 内地一区二区视频在线| 国产精品一二三区在线看| a级毛色黄片| 午夜激情福利司机影院| 99热全是精品| 热re99久久精品国产66热6| 国产亚洲精品久久久com| 毛片一级片免费看久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 好男人在线观看高清免费视频| 午夜激情福利司机影院| 国产精品伦人一区二区| 久久精品国产a三级三级三级| 老女人水多毛片| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩欧美一区视频在线观看 | videossex国产| 国产精品一区www在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| 中文字幕av成人在线电影| 久久99热这里只有精品18| 午夜激情久久久久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费观看a级毛片全部| 一区二区三区精品91| eeuss影院久久| 在线观看一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久久午夜欧美精品| 日韩人妻高清精品专区| 免费av不卡在线播放| 色播亚洲综合网| 18禁动态无遮挡网站| 99热这里只有是精品在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 久久精品国产亚洲网站| 三级国产精品片| 亚洲va在线va天堂va国产| 在现免费观看毛片| 久久久久国产精品人妻一区二区| 特大巨黑吊av在线直播| 高清在线视频一区二区三区| 超碰97精品在线观看| 一级av片app| 国产免费又黄又爽又色| 久久这里有精品视频免费| 少妇高潮的动态图| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品酒店卫生间| 欧美bdsm另类| 国产av国产精品国产| 久久99热6这里只有精品| 国产精品国产av在线观看| 午夜日本视频在线| 欧美另类一区| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 中文欧美无线码| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 日韩欧美精品免费久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲av免费在线观看| 高清欧美精品videossex| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美日韩综合久久久久久| 最新中文字幕久久久久| 亚洲精品国产av成人精品| 99久久人妻综合| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 国产 精品1| 波多野结衣巨乳人妻| 一区二区三区精品91| 亚洲av一区综合| 色视频www国产| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产黄片美女视频| 亚洲欧洲国产日韩| 午夜福利视频1000在线观看| 国产成人精品一,二区| 永久网站在线| 亚洲欧洲日产国产| 青春草国产在线视频| 99re6热这里在线精品视频| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲综合精品二区| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲av成人精品一二三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲不卡免费看| 午夜福利在线在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲欧美日韩东京热| 一级毛片电影观看| 亚洲国产成人一精品久久久| h日本视频在线播放| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 日本欧美国产在线视频| 男人添女人高潮全过程视频| 国产黄频视频在线观看| 亚洲综合精品二区| 午夜免费观看性视频| 日韩大片免费观看网站| 在线免费观看不下载黄p国产| 日韩国内少妇激情av| 少妇被粗大猛烈的视频| 成年人午夜在线观看视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品国产乱码久久久久久小说| av国产久精品久网站免费入址| 日韩一区二区视频免费看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品国产av在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 99久国产av精品国产电影| 久热这里只有精品99| 亚洲av.av天堂| 国产美女午夜福利| 五月开心婷婷网| 99久久中文字幕三级久久日本| 五月天丁香电影| 夜夜爽夜夜爽视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日日摸夜夜添夜夜爱| 在线观看一区二区三区激情| 日本与韩国留学比较| 国产成人免费无遮挡视频| 国产免费又黄又爽又色| 免费看a级黄色片| 国产成人aa在线观看| 搞女人的毛片| 各种免费的搞黄视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美国产精品一级二级三级 | 五月开心婷婷网| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产成人精品一,二区| 欧美高清成人免费视频www| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 成人黄色视频免费在线看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美97在线视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费观看性生交大片5| 欧美高清性xxxxhd video| 国产欧美亚洲国产| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品蜜桃在线观看| 永久免费av网站大全| 最近中文字幕高清免费大全6| 成年免费大片在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 国产成人福利小说| 日韩 亚洲 欧美在线| 少妇的逼水好多| 深夜a级毛片| 97热精品久久久久久| 欧美97在线视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲,欧美,日韩| av免费在线看不卡| 免费在线观看成人毛片| 国产有黄有色有爽视频| 观看美女的网站| 在线观看一区二区三区激情| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产精品嫩草影院av在线观看| 看黄色毛片网站| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩欧美精品免费久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 伦精品一区二区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 伊人久久国产一区二区| 亚洲精品,欧美精品| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲最大成人中文| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲人成网站在线播| 国内精品美女久久久久久| 观看美女的网站| 日本一本二区三区精品| av播播在线观看一区| videossex国产| 国产精品人妻久久久久久| 99久久精品热视频| 国产精品一二三区在线看| 99视频精品全部免费 在线| 97在线视频观看| 高清毛片免费看| 91久久精品电影网| 在线观看免费高清a一片| av专区在线播放| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久精品夜色国产| 国产精品人妻久久久久久| 久久精品国产自在天天线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美日韩综合久久久久久| 舔av片在线| 熟女av电影| 黑人高潮一二区| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 丝袜脚勾引网站| 成人免费观看视频高清| 麻豆国产97在线/欧美| 特大巨黑吊av在线直播| 国产乱人视频| 久久午夜福利片| 内射极品少妇av片p| 欧美精品国产亚洲| 亚洲国产成人一精品久久久| 22中文网久久字幕| 六月丁香七月| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费av毛片视频| 成年免费大片在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 黄色怎么调成土黄色| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成人黄色视频免费在线看| 热99国产精品久久久久久7| 看十八女毛片水多多多| 久久久久久久精品精品| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精品视频女| 大香蕉97超碰在线| 久久鲁丝午夜福利片| 国产男女内射视频| 中文在线观看免费www的网站| 日韩欧美精品v在线| 国产精品熟女久久久久浪| 免费大片黄手机在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| videos熟女内射| 免费电影在线观看免费观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 最近手机中文字幕大全| 黄色日韩在线| 69av精品久久久久久| 亚洲性久久影院| 久久久久久国产a免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩欧美 国产精品| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲三级黄色毛片| 美女国产视频在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美日韩综合久久久久久| 青青草视频在线视频观看| 青春草视频在线免费观看| 精品久久久久久电影网| 特大巨黑吊av在线直播| 中文欧美无线码| 少妇 在线观看| 免费观看在线日韩| 性色avwww在线观看| 欧美+日韩+精品| 日韩av免费高清视频| 欧美高清性xxxxhd video| 日韩av在线免费看完整版不卡| 欧美性感艳星| 日韩视频在线欧美| 欧美另类一区| 联通29元200g的流量卡| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产伦精品一区二区三区视频9| 99久久人妻综合| 777米奇影视久久| kizo精华| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久久久久久人人人人人人| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产一级毛片在线| www.色视频.com| 亚洲美女视频黄频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 男的添女的下面高潮视频| 一本久久精品| 欧美最新免费一区二区三区| 91久久精品国产一区二区成人| 国产毛片在线视频| av在线天堂中文字幕| 午夜免费观看性视频| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精品第二区| 少妇的逼水好多| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲三级黄色毛片| av又黄又爽大尺度在线免费看| 伊人久久国产一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品蜜桃在线观看| 日本午夜av视频| 青春草国产在线视频| av网站免费在线观看视频| 午夜福利视频1000在线观看| 内射极品少妇av片p| 精品久久国产蜜桃| 日韩视频在线欧美| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲不卡免费看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 精品人妻视频免费看| 啦啦啦啦在线视频资源| 一区二区三区精品91| 人妻系列 视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 婷婷色综合www| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚州av有码| 国产成人精品一,二区| 一级毛片 在线播放| av线在线观看网站| 亚洲天堂av无毛| 91精品国产九色| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲人与动物交配视频| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲四区av| 久久久精品免费免费高清| 亚洲av.av天堂| 中文在线观看免费www的网站| 久久久久久伊人网av| 亚洲图色成人| 国产伦精品一区二区三区视频9| 特大巨黑吊av在线直播| 免费观看a级毛片全部| 亚洲av成人精品一区久久| 国产成人91sexporn| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产探花在线观看一区二区| 麻豆国产97在线/欧美| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品女同一区二区软件| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品国产av在线观看| 精品一区在线观看国产| 中国美白少妇内射xxxbb| 七月丁香在线播放| 91狼人影院| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产伦理片在线播放av一区| 国产黄片视频在线免费观看| 一个人看视频在线观看www免费| 偷拍熟女少妇极品色| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久6这里有精品| 少妇的逼水好多| 国产精品久久久久久av不卡| h日本视频在线播放| 色播亚洲综合网| 在线观看av片永久免费下载| 99热全是精品| 久久99精品国语久久久| 丝袜喷水一区| 国产一区亚洲一区在线观看| 一级爰片在线观看| av国产精品久久久久影院| 白带黄色成豆腐渣| 丰满少妇做爰视频| 熟女电影av网| 性色av一级| 日本wwww免费看| 伊人久久国产一区二区| 18禁在线播放成人免费| 久久久久国产网址| 免费观看性生交大片5| 伦理电影大哥的女人| 男男h啪啪无遮挡| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久久a久久爽久久v久久| 日本av手机在线免费观看| 身体一侧抽搐| 最近2019中文字幕mv第一页| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99热这里只有精品一区| av免费在线看不卡| av在线老鸭窝| 亚洲,一卡二卡三卡| 精品酒店卫生间| 毛片一级片免费看久久久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 韩国高清视频一区二区三区| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 蜜臀久久99精品久久宅男| 在线观看一区二区三区激情| 夫妻午夜视频| 熟女电影av网| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲真实伦在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成年人精品一区二区| 亚洲国产日韩一区二区| 久久午夜福利片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久久久国产电影| 激情 狠狠 欧美| 免费大片黄手机在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 街头女战士在线观看网站| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲国产色片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 韩国高清视频一区二区三区| 少妇的逼好多水| 亚洲国产精品999| 热99国产精品久久久久久7| 午夜日本视频在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产视频首页在线观看| 特级一级黄色大片|