IL-2治療與肝細(xì)胞癌化療敏感性的相關(guān)性

平秀琴 秦萍 王黎洲

【摘要】 目的 探究白細(xì)胞介素-2（IL-2）治療與肝細(xì)胞癌（HCC）化療敏感性的相關(guān)性。方法 選取經(jīng)IL-2治療的36例肝細(xì)胞癌化療患者為觀察組， 取 S-P 免疫組織化學(xué)方法;選擇同期非IL-2治療的36例肝細(xì)胞癌化療患者為對(duì)照組， 檢測(cè)肝細(xì)胞癌存檔石蠟包埋切片組織中多藥耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）、IL-2 受體α鏈的表達(dá)。觀察免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 比較兩組MRP1、IL-2受體α鏈表達(dá)。結(jié)果 細(xì)胞漿內(nèi)和（或）細(xì)胞膜是MRP1 在肝組織中的表達(dá)定位， 其中較顯著的是胞漿內(nèi)。其陽(yáng)性細(xì)胞呈彌散性或灶狀分布， 免疫組化染色為棕黃色細(xì)顆粒狀， 在癌旁及肝癌組織、肝硬化表達(dá)中顯著增高， 正常肝細(xì)胞中低表達(dá)， 細(xì)胞間質(zhì)中無(wú)顯著著色情況出現(xiàn)。同時(shí)以PBS代替一抗為陰性對(duì)照組， 細(xì)胞胞漿和細(xì)胞外間質(zhì)都存在， 可見(jiàn)散在棕黃色著色于兩張切片鏡下， 考慮實(shí)驗(yàn)操作污染造成， 結(jié)果均視為陰性， 且余切片沒(méi)有染色。IL-2受體α鏈其免疫組化染色呈胞膜型， 呈棕黃色。且PBS液為一抗對(duì)照組無(wú)顯著著色。觀察組MRP1、IL-2受體α鏈表達(dá)吸光度A分別為（0.33630±0.04466）、（0.30180±0.04022）高于對(duì)照組的（0.30070±0.03763）、（0.26300±0.02223）， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 針對(duì)肝細(xì)胞癌患者， 采用IL-2治療， 在增加機(jī)體抗腫瘤免疫時(shí)， 相應(yīng)的提升了患者肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性， 所以在以化療為主要手段時(shí)聯(lián)合應(yīng)用IL-2降低臨床治療效果。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌;白細(xì)胞介素-2;化療;敏感性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.35.022

在我國(guó)， 肝細(xì)胞癌為常見(jiàn)惡性腫瘤之一， 最佳的治療方式是手術(shù)切除， 但是當(dāng)前僅僅有30%的切除率[1]。針對(duì)難以手術(shù)切除及鞏固治療的患者， 主要的治療方式是化療。但是肝癌并非化療敏感的腫瘤， 因多藥耐藥蛋白降低肝癌化療的療效， 且又因臨床診斷的肝癌大多數(shù)是晚期， 對(duì)化療藥物不敏感， 大多處在G0期[2]。另外針對(duì)肝癌的綜合治療， 免疫治療的介入提供了全新思路， 臨床及實(shí)驗(yàn)證明聯(lián)合或單用， 可實(shí)現(xiàn)對(duì)消化道惡性腫瘤治療效果的顯著增加。但是當(dāng)前IL-2和化療間是否存在拮抗或協(xié)同作用， 報(bào)道依舊很少。此次研究對(duì)IL-2治療與肝細(xì)胞癌化療敏感性的相關(guān)性進(jìn)行探究， 結(jié)果如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年1～12月經(jīng)IL-2治療的36例肝細(xì)胞癌化療患者作為觀察組， 選擇同期非IL-2治療的36例肝細(xì)胞癌患者為對(duì)照組?；颊呔炗喠酥橥鈺?shū)。存檔石蠟包埋組織切片， 實(shí)施二次切除的肝細(xì)胞癌標(biāo)本。觀察組年齡18～85歲， 平均年齡（52.2±11.4）歲;男20例， 女16例;部分患者為皮下注射， 1個(gè)療程時(shí)間為7 d， 100萬(wàn) U/（次·d）， 進(jìn)行1～4次不等， 部分患者經(jīng)肝動(dòng)脈所置化療泵或門(mén)靜脈注射， 28～33 d-1， 5～10 次不等， 100萬(wàn)U/次。對(duì)照組年齡19～84歲， 平均年齡（51.8±11.3）歲;男19例， 女17例。排除化療史、手術(shù)方式或經(jīng)動(dòng)脈化療栓塞（TACE）、病程、腫瘤分期等因素對(duì)MRP1表達(dá)影響作用。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性?；颊呔炗喠酥橥鈺?shū)。

1. 2 方法 觀察組取S-P免疫組織化學(xué)方法， 對(duì)照組檢測(cè)肝細(xì)胞癌存檔石蠟包埋切片組織中MRP1、IL-2 受體α鏈的表達(dá)。存檔石蠟包埋組織切片， 實(shí)施二次切除的肝細(xì)胞癌標(biāo)本。

1. 2. 1 試劑 選擇美國(guó)Santa Cruz 生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的， 武漢苑凌生物實(shí)驗(yàn)器械公司的鼠抗人MRP1單抗（sc-18835）。同時(shí)選擇美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)、北京中山生物技術(shù)有限公司的 DAB顯色劑及S-P免疫組化試劑盒;武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)的抗IL-2受體α鏈單抗[3]。

1. 2. 2 方法

1. 2. 2. 1 圖象分析 選擇半定量方法， 把切片放大200倍取圖， 同時(shí)對(duì)各切片的染色強(qiáng)度進(jìn)行分析， 選擇高清晰度醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)HMIAS-2000。經(jīng)盲法取3個(gè)視野， 計(jì)算吸光度， 獲得的平均值是切片的吸光度值[4]。

1. 2. 2. 2 S-P免疫組織化學(xué)染色 常規(guī)化的把上述標(biāo)本石蠟切片， 微波抗原修復(fù)， 蛋白酶消化。選擇蘇木素輕度襯染細(xì)胞核。參見(jiàn)S-P試劑盒說(shuō)明書(shū)的具體步驟[5]。DAB顯色， 以IL-2受體α鏈抗體為陰性對(duì)照， 抗MRP1抗體經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS）液代替。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 比較兩組MRP1、IL-2受體α鏈表達(dá)。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果 細(xì)胞漿內(nèi)和（或）細(xì)胞膜是MRP1在肝組織中的表達(dá)定位， 其中較顯著的是胞漿內(nèi)。其陽(yáng)性細(xì)胞呈彌散性或灶狀分布， 免疫組化染色為棕黃色細(xì)顆粒狀， 在癌旁及肝癌組織、肝硬化表達(dá)中顯著增高， 正常肝細(xì)胞中低表達(dá)， 細(xì)胞間質(zhì)中無(wú)顯著著色情況出現(xiàn)。同時(shí)以PBS代替一抗為陰性對(duì)照組， 細(xì)胞胞漿和細(xì)胞外間質(zhì)都存在， 可見(jiàn)散在棕黃色著色于兩張切片鏡下， 考慮實(shí)驗(yàn)操作污染造成， 結(jié)果均視為陰性， 且余切片沒(méi)有染色。IL-2受體α鏈其免疫組化染色呈胞膜型， 呈棕黃色。且PBS液為一抗對(duì)照組無(wú)顯著著色。

2. 2 兩組MRP1 、IL-2受體α鏈表達(dá)比較 觀察組MRP1、IL-2受體α鏈表達(dá)高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

在腫瘤免疫治療中， IL-2為關(guān)鍵的細(xì)胞因子之一， 可經(jīng)提升淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）、自然殺傷（NK）細(xì)胞活性， 激活腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞， 增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷作用， 使腫瘤生長(zhǎng)停止， 誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)， 改善化療所致的免疫抑制[6]。此次研究中， 細(xì)胞漿內(nèi)和（或）細(xì)胞膜是MRP1在肝組織中的表達(dá)定位， 其中較顯著的是胞漿內(nèi)。其陽(yáng)性細(xì)胞呈彌散性或灶狀分布， 免疫組化染色為棕黃色細(xì)顆粒狀， 在癌旁及肝癌組織、肝硬化表達(dá)中顯著增高， 正常肝細(xì)胞中低表達(dá)， 細(xì)胞間質(zhì)中無(wú)顯著著色情況出現(xiàn)。同時(shí)以 PBS 代替一抗為陰性對(duì)照組， 細(xì)胞胞漿和細(xì)胞外間質(zhì)都存在， 可見(jiàn)散在棕黃色著色于 兩張切片鏡下， 考慮實(shí)驗(yàn)操作污染造成， 結(jié)果均視為陰性， 且余切片沒(méi)有染色。IL-2受體α鏈其免疫組化染色呈胞膜型， 呈棕黃色。且PBS 液為一抗對(duì)照組無(wú)顯著著色。觀察組MRP1 、IL-2受體α鏈表達(dá)高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明IL-2的治療具有顯著有效性， 患者對(duì)化療藥物的耐藥性經(jīng)IL-2 的治療顯著增加。

綜上所述， 對(duì)肝細(xì)胞癌患者采用IL-2治療， 在增加機(jī)體抗腫瘤免疫時(shí)相應(yīng)的提升了患者肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性， 所以在以化療為主要手段時(shí)聯(lián)合應(yīng)用IL-2會(huì)降低臨床治療的效果。

參考文獻(xiàn)

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[5] 肖琦. Foxp3、Il-2、Il-10和TGF-β1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及TACE對(duì)其表達(dá)的影響. 南昌大學(xué)， 2012.

[6] 邱盛續(xù)， 徐正進(jìn)， 連圣杰. 肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)聯(lián)合射頻消融術(shù)對(duì)大肝癌患者的療效及免疫功能狀態(tài)的影響. 福建醫(yī)藥雜志， 2019， 41（1）：30-33.

[收稿日期：2019-04-25]