玄參化學(xué)成分的研究

劉年珍， 趙碧清，2， 錢群剛， 陳乃宏， 周小江，

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410208；2.湖南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)化及功能工程技術(shù)研究中心，湖南長沙410208）

玄參為玄參科植物玄參Scropularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結(jié)的功效，用于熱入營血、溫毒發(fā)斑、熱病傷陰、舌絳煩渴、津傷便秘、骨蒸勞嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬、癰腫瘡毒［1］。玄參作為常用大宗藥材，對(duì)其研究較多，主要含有環(huán)烯醚萜類、苯丙素類等成分，具有保肝、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血壓等作用［2-6］。

關(guān)于玄參的化學(xué)成分研究主要集中在環(huán)烯醚萜類成分，而對(duì)其他類成分報(bào)道較少，為了更全面地控制其質(zhì)量，提升質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，課題組特對(duì)玄參其他類化學(xué)成分進(jìn)行研究，從其醇提物中分離鑒定了13個(gè)化合物，其中化合物2、4、7～8、11～12為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker DRX-600 MHz核磁共振波譜儀 （TMS為內(nèi)標(biāo)，德國Bruker公司）；高效液相色譜儀 （日本島津公司）；Büchi型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （瑞士 Büchi公司）；Sephadex LH-20（法瑪西亞Amersham Biosciences公司）。 Rp-18反相硅膠 （40～63 μm， 日本Daiso公司）；柱色譜硅膠 （200～300目）、硅膠H和薄層色譜硅膠 GF254（青島海洋化工廠）。所用試劑均為分析純。

實(shí)驗(yàn)用玄參采集于湖南省新紹縣玄參種植基地，并由湖南中醫(yī)藥大學(xué)周小江教授鑒定為玄參科植物玄參Scropularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，藥材標(biāo)本保存于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)樓C棟426。

2 提取與分離

玄參16 kg，切片后加6倍量80%甲醇浸泡1 h后，回流提取2次，每次2 h，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至無甲醇味，得粗提物。粗提物加水混懸，加乙酸乙酯提取4次，每次4 L，減壓回收乙酸乙酯得浸膏178 g，浸膏拌樣，加于正相硅膠柱色譜柱上，石油醚-乙酸乙酯-甲醇 （70∶30∶0） ～（70∶30∶35）梯度洗脫，收集洗脫液，檢識(shí)，合并成6段 （XS-1～XS-6）。XS-2經(jīng)正相硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯 （100∶1） ～ （0∶1） 梯度洗脫，檢識(shí)，合并成5段 （XS-21～XS-25）。

XS-21先經(jīng)凝膠柱，甲醇洗脫，再經(jīng)HPLC純化 ［甲醇-0.5‰三氟乙酸水 （40∶60）為流動(dòng)相］，得化合物6（257.4 mg）。

XS-22經(jīng)凝膠柱，甲醇洗脫，檢識(shí)，合并成6個(gè)部分 （XS-221～XS-226），其中XS-226經(jīng)反相硅膠柱，甲醇-水梯度洗脫 （10%～100%），檢識(shí)，合并成 4個(gè)部分 （XS-2261～XS-2264）。XS-2261經(jīng)HPLC純化 ［甲醇-水 （38∶62） ］，得化合物1（3.2 mg）、 2 （4.2 mg）。 XS-225先經(jīng)反相硅膠柱，甲醇-水 （10%～100%）梯度洗脫，再經(jīng) HPLC［甲醇-水 （20∶80）］純化，得化合物 3（4.3 mg）、 4 （1.1 mg）、 5 （1.5 mg）。

XS-24先經(jīng)凝膠柱，甲醇洗脫，再過反相硅膠柱，甲醇-水 （10%～100%）梯度洗脫，最后經(jīng)HPLC純化 ［甲醇-0.5‰三氟乙酸水 （45∶55）］，得化合物 7（18.1 mg）、 8 （68.7 mg）、 9（80.3 mg）、 10 （31.4 mg）。

XS-25先經(jīng)凝膠柱，甲醇洗脫，再過反相硅膠柱，甲醇-水 （10%～100%）梯度洗脫，再用薄層色譜 ［石油醚-乙酸乙酯 （5∶3）為展開劑］制備，最后經(jīng)HPLC純化 ［甲醇-水 （10∶90）］，得化合物11 （4.3 mg）、 12 （5.9 mg）、 13 （4.7 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色羽狀晶體，易溶于甲醇。1HNMR （600 MHz，CD3OD） δ：7.61（1H，d，J＝15.9 Hz， H-7）， 7.45 （2H， dd， J＝ 6.8， 1.9 Hz， H-2，6）， 6.79 （2H， dd， J＝ 6.7， 1.9 Hz， H-3， 5），6.32 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-8），3.76 （3H，s，10-OCH3）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 170.0（C-9）， 162.0 （C-4）， 146.8 （C-7）， 131.3 （C-2，6）， 127.0 （C-1）， 117.1 （C-3， 5）， 114.8 （C-8），52.1（10-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［7］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基肉桂酸甲酯。

化合物2：黃色油狀物，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 7.61 （1H， d， J＝15.9 Hz，H-7）， 7.15 （1H， d， J＝1.6 Hz， H-2）， 7.04 （1H，dd， J＝8.2， 1.7 Hz， H-6）， 6.76 （1H， d， J＝8.2 Hz， H-5）， 6.32 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-8）， 3.87（3H， s， 4-OCH3）， 3.76 （3H， s， 3-OCH3）；13CNMR （150 MHz， CD3OD） δ： 170.1 （C-9）， 153.2（C-4）， 150.2 （C-3）， 147.4 （C-7）， 126.5 （C-1），124.7 （C-6）， 117.1 （C-8）， 114.2 （C-5）， 111.5（C-2）， 56.3 （3-OCH3）， 52.0 （4-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［8］基本一致，故鑒定為3，4-二甲氧基肉桂酸。

化合物3：白色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.75 （1H， s， H-7）， 7.76（2H， m， J＝ 8.7， 2.1 Hz， H-2， 6）， 6.91 （2H，dd， J＝8.7， 2.1 Hz， H-3， 5）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 192.9 （7-CHO）， 165.5 （C-4）， 133.6（C-2， 6），130.3 （C-1），117.1 （C-3， 5）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［9］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯甲醛。

化合物4：白色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.64 （1H， s， H-7）， 7.39（2H， dd， J＝7.6， 1.9 Hz， H-2， 6）， 6.84 （1H， d，J＝8.0 Hz， H-5）， 3.89 （3H， s， 4-OCH3）；13C-NMR（150 MHz， CD3OD） δ： 192.5 （7-CHO）， 158.7（C-4）， 150.7 （C-3）， 129.1 （C-1）， 128.7 （C-2），117.0 （C-6），110.7 （C-5），56.2 （4-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［10］基本一致，故鑒定為3-羥基對(duì)甲氧基苯甲醛。

化合物5：白色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ：7.86 （2H， dd，J＝8.8，2.0 Hz， H-2， 6）， 6.78 （2H， dd， J＝8.8， 2.0 Hz， H-3， 5）， 2.51 （3H， s， H-8）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 199.5 （C-7）， 166.2 （C-4）， 132.3 （C-2， 6）， 129.1 （C-1）， 116.9 （C-3， 5）， 26.2 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［11］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯乙酮。

化合物6：白色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 7.68 （1H， d， J＝16.0 Hz，H-7），7.58（2H， m，H-2， 6），7.40 （3H， m， H-3， 4， 5）， 6.48 （1H， d， J＝ 16.0 Hz， H-8）；13CNMR （150 MHz， CD3OD） δ： 170.4 （C-9）， 146.5（C-7）， 135.9 （C-1）， 131.5 （C-4）， 130.1 （C-3，5），129.3 （C-2， 6），119.4 （C-8）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］基本一致，故鑒定為肉桂酸。

化合物7：紫紅色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.68 （1H， s， H-10）， 7.30（2H， t， J＝9.0， 1.8 Hz， H-4， 6）， 6.91 （1H， d，J＝7.8 Hz， H-7）， 6.85 （1H， s， H-2′）， 6.74 （2H，t， J ＝ 9.2， 1.8 Hz， H-5′， 6′）， 5.21 （1H， s， H-2）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 193.2 （10-CHO）， 153.9 （C-9）， 147.3 （C-8）， 146.8 （C-1′），146.2 （C-3′）， 131.2 （C-4′）， 130.9 （C-5）， 126.6（C-6）， 119.5 （C-6′）， 116.4 （C-7）， 115.9 （C-5′）， 115.4 （C-2′）， 114.9 （C-4）， 104.9 （C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［13］基本一致，故鑒定為2-（3′， 4′-二羥基苯基） -1， 3-苯并二茂惡-5-甲醛。

化合物8：銀白色晶體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ：7.57 （2H， dd，J＝8.4，1.9 Hz， H-2， 6）， 6.85 （1H， d， J＝ 8.6 Hz， H-5），3.89 （3H， s， 4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 170.2 （C-7）， 152.8 （C-4）， 148.7 （C-3）， 125.3 （C-6）， 123.1 （C-1）， 115.8 （C-2），113.7（C-5）， 56.4 （4-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為 3-羥基對(duì)甲氧基苯甲酸。

化合物9：鐵銹色粉末，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 7.61 （1H， d， J＝15.9 Hz，H-7）， 7.45 （2H， d， J＝ 8.6 Hz， H-2， 6）， 6.82（2H， d， J＝ 8.6 Hz， H-3， 5）， 6.29 （1H， s， H-8）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 171.2 （C-9），161.2 （C-4）， 146.8 （C-7）， 131.1 （C-2， 6），127.3 （C-1），116.9 C-3， 5）， 115.6 （C-8）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［15］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基肉桂酸。

化合物 10：淺棕色固體，易溶于甲醇。1HNMR （600 MHz， CD3OD） δ： 7.60 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-7）， 7.16 （1H， d， J＝1.9 Hz， H-2），7.06 （1H， dd， J＝8.2， 1.9 Hz， H-6）， 6.82 （1H，d， J＝8.2 Hz， H-5），6.32 （1H， d， J＝15.9 Hz， H-8）， 3.89 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 171.2 （C-9）， 150.5 （C-3）， 149.4 （C-7）， 147.1 （C-4）， 127.9 （C-1）， 124.1 （C-6），116.6 （C-2）， 115.9 （C-5）， 111.7 （C-8）， 56.4（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［16］基本一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物11：黃色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.55 （1H， d， J＝ 7.9 Hz，H-9），7.58（1H，d，J＝15.7 Hz，H-7），7.23（1H，d， J＝1.9 Hz， H-2）， 7.16 （1H， dd， J＝8.1， 1.9 Hz， H-6）， 6.81 （1H， d， J＝ 8.1 Hz， H-5）， 6.63（1H， dd， J＝15.6，7.9 Hz， H-8），3.89 （3H， s，3-OCH3）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 196.2 （9-CHO）， 156.7 （C-7）， 153.0 （C-4）， 150.3 （C-3），126.8 （C-1）， 125.7 （C-6）， 117.8 （C-8）， 111.9（C-5）， 111.5 （C-2）， 56.4 （3-OCH3）。 在 HMBC譜中，H-9與C-6，C-9相關(guān)，H-8與C-1相關(guān)，H-7與C-2， C-5， C-6， C-9相關(guān)， H-6與 C-2， C-4，C-7相關(guān)，H-5與C-1，C-3，C-8相關(guān)，H-2與C-3，C-4，C-6，C-7相關(guān)。與以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［17］基本一致，故鑒定為3-甲氧基對(duì)羥基肉桂醛。

化合物12：白色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ：7.02 （2H， dd，J＝8.5，2.0 Hz， H-2， 6）， 6.69 （2H， dd， J＝8.5， 2.0 Hz， H-3， 5）， 3.67 （2H， t， J＝7.2 Hz， H-8）， 2.71 （2H，t， J＝7.2 Hz， H-7）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［18］ 基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯乙醇。

化合物13：白色固體，易溶于甲醇。1H-NMR（600 MHz， CD3OD） δ： 9.53 （1H， s， H-1）， 7.38（1H，d，J＝3.6 Hz， H-3）， 6.58 （1H， d， J＝3.6 Hz， H-4）， 4.61 （2H， s， J＝ 7.2 Hz， H-6）；13CNMR （150 MHz， CD3OD） δ： 179.6 （1-CHO），163.4 （C-5）， 154.1 （C-2）， 125.1 （C-4）， 111.0（C-3），57.8 （C-6）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［19］ 基本一致，故鑒定為5-羥甲基糠醛。

4 討論

在2015年版 《中國藥典》 （一部）收載的玄參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，測(cè)定的是環(huán)烯醚萜類成分哈巴苷和哈巴俄苷的含有量。本研究分離鑒定的13個(gè)化合物均不是環(huán)烯醚萜類成分，其中肉桂酸、對(duì)羥基肉桂酸和3-羥基對(duì)甲氧基苯甲酸的含有量較高，初步測(cè)定三者含有量之和在0.3%左右，而哈巴苷和哈巴俄苷含有量總量也只有0.5%。其中肉桂酸具有抗腫瘤、抗菌等活性［20-21］。因此，增加這些成分的含有量測(cè)定，將全面提升玄參的質(zhì)量控制水平。