4269例羊水MLPA非整倍體檢測結果分析

宋居杰 寧思思 溫圓圓 秦雪

摘要：目的 探討多重連接探針擴增技術（MLPA）聯(lián)合羊水染色體核型分析在產(chǎn)前檢測中的應用價值。方法 同時采用MLPA及染色體核型分析技術對4269例羊水進行非整倍體檢測。結果 兩種方法共檢出102例非整倍體，包含嵌合型非整倍體19例，在MLPA的提示下染色體核型分析額外檢出1例低比例嵌合體，除9例嵌合體僅在核型分析檢出外，其余結果基本一致，故兩種方法檢測結果的符合率為99.79%。結論 MLPA非整倍體技術聯(lián)合羊水染色體核型分析應用于非整倍體的產(chǎn)前檢測，可顯著縮短非整倍體的診斷周期，提高嵌合型非整倍體的檢出率。

關鍵詞：MLPA;非整倍體;核型分析;產(chǎn)前診斷;嵌合體

【中圖分類號】R4 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）14--01

非整倍體是染色體數(shù)目異常的一種，即染色體數(shù)目的減少或者增加，主要包含單體綜合征、三體綜合征、嵌合體等[1]。臨床上的染色體非整倍體最常見于13、18、21、X和Y這5條染色體，約占產(chǎn)前診斷中有臨床意義的染色體異常的86%[2] 。染色體非整倍體異常發(fā)生于胎兒細胞可導致流產(chǎn)或出生缺陷[3]。染色體病目前并沒有很好的治療方法，對家庭和社會都帶來巨大的負擔，因而在產(chǎn)前診斷胎兒染色體非整倍體異常降低出生缺陷顯得尤為重要。MLPA技術是由 schouten 等[4]在2002年首先報道的，該技術高效、特異，在單管里可一次性完成至少40個核苷酸序列的檢測，主要針對大片段的缺失和重復突變，可用于染色體非整倍體的快速產(chǎn)前診斷。本研究主要探討MLPA 非整倍體檢測技術在常見染色體非整倍體中的應用價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年1月至2020年12月在玉林市婦幼保健院優(yōu)生遺傳科進行產(chǎn)前優(yōu)生遺傳咨詢的4269例符合產(chǎn)前診斷指征的孕婦，年齡 18-47 歲，孕周17-27w。在充分知情告知并簽署產(chǎn)前診斷知情同意書后進行羊膜腔穿刺并獲取羊水樣本20ml， 并分裝到3支15ml無菌離心管中，每支管6～8ml，其中2支用于細胞培養(yǎng)進行染色體核型分析，另1支用于MLPA檢測。

1.2 方法

1.2.1 染色體核型分析

羊水標本離心后棄上清，留約0.5 ml，加入4ml羊水培養(yǎng)基混勻后接種。選擇適宜時機行本實驗室常規(guī)細胞收集、低滲、固定、滴片、G顯帶及吉姆薩染色等處理。按人類細胞基因組學國際命名體系（ISCN）2016 版描述核型。

1.2.2 MLPA方法

按照本實驗室羊水細胞DNA提取、PCR擴增、毛細管電泳和結果分析等常規(guī)步驟進行。

2 結果

在4269例樣本中，4167例兩種方法均未檢測出染色體非整倍體異常。在檢出的102例常見染色體非整倍體異常樣本中，兩種方法共同檢出93例常見非整倍體異常，染色體核型分析比MLPA多檢出9例異嵌合型常見染色體非整倍體，總體符合率99.79%（4260/4269），102例異常結果分布情況見表1。

3 討論

產(chǎn)前診斷染色體異常的傳統(tǒng)方法是進行胎兒染色體核型分析[5]，核型分析也是診斷染色體非整倍體的金標準，但該方法檢測周期長、操作繁瑣、要求較高的操作技術，影響因素多，且最終的培養(yǎng)結果有時不一定能夠達到核型分析的要求從而能導致核型判讀失敗[6]。因此，臨床工作中迫切需要新的診斷技術來彌補染色體核型分析的缺陷[7]。MLPA是目前已報道的快速產(chǎn)前診斷技術之一，具有高通量、檢測時間短（可在收到標本 24-48h 后出結果），特異性好，靈敏度高等優(yōu)點。

本研究中，羊水細胞培養(yǎng)及染色體核型分析成功率100%，MLPA檢測成功率100%，兩種方法均能在行業(yè)標準規(guī)定期限內(nèi)得到結果。MLPA可在接收標本48h內(nèi)得到結果，核型分析則需要20d，兩者聯(lián)合檢測，可以對MLPA方法提示異常的病例優(yōu)先進行核型分析，最快能在2W左右得到核型分析的結果，大大提高了產(chǎn)前診斷的效率。

4269例樣本的檢測結果中，MLPA技術檢出常見染色體（21、18、13、X和Y染色體）非整倍體93例，結果均與核型分析一致，4167例未見異常，核型分析也未檢出常見（21、18、13、X和Y染色體）非整倍體，有9例嵌合體是核型分析發(fā)現(xiàn)，而MLPA未見異常，故兩種方法的結果符合率達到99.79%（4260/4269），與覃宋強等[8]報道的一致。其中MLPA檢出1例18號長臂的等臂異常，有了MLPA結果的驗證，染色體核型分析可以直接出具準確的結果，可見該技術對相關染色體的非平衡性結構異常也具有提示作用。

MLPA非整倍體檢測技術在染色體嵌合體中的應用。染色體嵌合體，即兩個或兩個以上不同細胞系同時存在于同一個體，在人類囊胚植入前后普遍存在，可能導致遺傳異常、流產(chǎn)、死產(chǎn)[9]。在本研究中，染色體核型分析共檢測出19例嵌合體，MLPA檢出其中的10例（52.6%）。其中7例嵌合體兩種方法的結果是一致的，3例染色體核型分析結果為性染色體嵌合體，MLPA結果提示為純合體，結果有所差異，其中1例染色體核型分析的結果為45，X[65]/46，X，+mar[35]，MLPA結果提示為45，X，可能是因為mar染色體并未攜帶基因，或者攜帶的基因不在MLPA的檢測范圍，由于45，X占大多數(shù)，遺傳咨詢可按特納綜合征進行;1例染色體核型分析的結果為45，X[48]/46，X，del（X）（p22.1）[41]，MLPA結果提示為45，X，可能是嵌合比例失真所致;1例染色體核型分析的結果為45，X[9]/47，XYY[42]，MLPA結果提示為47，XYY，嵌合比例較低，MLPA未能提示嵌合。Koope 等[10]研究認為 MLPA 能夠檢測出異常核型比例高于 20% 的嵌合體，本次研究MLPA檢出2例嵌合比例低于20%，其中1例嵌合比例只有5.7%，這個病例是在MLPA提示異常的情況下進行了加大計數(shù)分析，如果沒有MLPA結果的提示，很可能會漏診，給臨床帶來不夠準確的產(chǎn)前診斷結果。在MLPA未能準確提示的9例嵌合體中，僅有1例染色體核型分析結果嵌合比例>20%（22.2%），可能是由于羊水細胞經(jīng)過培養(yǎng)，出現(xiàn)優(yōu)勢生長，導致嵌合比例不真實。本次研究MLPA結果均在染色體核型結果之前得出，可以給核型分析工作提供更多的信息，提高嵌合體檢出率。

綜述所述，MLPA檢測方法操作簡單、周期短、結果準確，聯(lián)合染色體核型分析應用于常見染色體非整倍體的快速產(chǎn)前檢測，可大幅提高產(chǎn)前診斷效率，同時還可以提高染色體嵌合體的檢出率，為臨床遺傳咨詢提供更準確的診斷依據(jù)，對降低出生缺陷有重要意義。

參考文獻：

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