P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織的表達及意義

祝志川，張喜平

（內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 普通外科，內蒙 呼和浩特 010050）

乳腺浸潤性導管癌是乳腺癌中最常見的病理類型，特別是在具有乳腺BRCA遺傳易感基因攜帶的患者中，乳腺浸潤性導管癌的發(fā)生率可進一步的增加[1]。臨床上乳腺惡性腫瘤的發(fā)生，能夠增加患者的致殘率，導致無瘤生存時間的顯著下降[2]。在探討乳腺浸潤性導管癌的發(fā)病機制的過程中發(fā)現(xiàn)，P53蛋白能夠通過影響到癌細胞的周期調控，導致上皮細胞的持續(xù)性增殖，提高了癌細胞對于導管基底部的浸潤作用[3]；表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）家族成員c-erbB-2的表達，能夠通過提高癌細胞DNA的擴增速度，并促進局部病灶組織的新生血管的形成，從而為惡性腫瘤的早期發(fā)生及中晚期轉移提供前提和基礎[4]； B淋巴細胞瘤2基因（B-cell lymphoma-2，bcl-2）是重要的凋亡因子，其表達濃度的維持能夠促進癌細胞的凋亡，抑制癌細胞的過度增殖[5]。為了揭示P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白在乳腺浸潤性導管癌患者組織內表達水平變化意義，筆者收集相關乳腺浸潤性導管癌患者臨床資料，分析探討P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白的異常表達情況及其與乳腺癌患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年12月—2017年10月在我院接受治療的乳腺浸潤性導管癌患者為研究對象。納入標準：(1)年齡≥18周歲；(2)經(jīng)術中病理檢查確診為乳腺浸潤性導管癌患者；(3)無其他部位原發(fā)腫瘤者。排除標準：(1)不愿參與本項研究者；(2)合并其他系統(tǒng)嚴重疾病者。根據(jù)納入排除標準共納入研究對象150例，年齡32～62歲，平均（48.92±10.05）歲；高分化者85例，中低分化者65例；絕經(jīng)者105例，淋巴結轉移者60例；浸潤深度T1＋T2者88例，T3+T4者62例；TNM分期I+I I期者110例，I I I+I V期40例。對照組150例為乳腺良性腫瘤患者，年齡30～64歲，平均（49.04±9.85）歲。兩組患者的年齡等一般資料方面無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審通過，且所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

所有組織標本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法（strep avidin—biotin complex，SABC法）染色，二氨基聯(lián)苯胺（diamionben zidene，DAB）顯色。P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 評價指標

觀察兩組P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的差異，分析P53、bcl-2及c-erbB-2的關系，比較不同臨床病理特征的乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2表達陽性率的差異。陽性評價標準：在高倍鏡下隨機觀察5個視野，以整張切片陽性細胞≥25%為陽性，＜25%為陰性。P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達結果見圖1。

圖1 P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達結果

1.4 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)經(jīng)雙人錄入后，采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料采用例或百分率表示，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示。兩組和不同臨床病理特征患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的比較采用χ2檢驗進行處理，采用回歸分析法分析影響乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2表達的因素。P＜0.05記為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的比較

乳腺癌組患者P53、c-erbB-2陽性表達率高于對照組，bcl-2陽性表達率低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的比較[n=150，n（%）]

2.2 不同臨床特征的乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的比較

分化程度低、有淋巴結轉移、浸潤深度T3+T4、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的乳腺癌患者P53、c-e r bB-2陽性表達率較高，b c l-2陽性表達率較低。P53、c-erbB-2及bcl-2的表達與分化程度、有無淋巴結轉移、浸潤深度、TNM分期有關（P＜0.05）；與患者年齡無關（P＞0.05）（表2）。

表2 不同臨床病理特征的乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的比較[n（%）]

2.3 影響乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的因素

將單因素分析有意義的因素作為自變量，將乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達情況作為因變量進行回歸分析，結果顯示分化程度和TNM分期是影響P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達的因素（表3）。

表3 影響乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達率的因素

3 討 論

乳腺浸潤性導管癌的發(fā)生主要考慮與性激素水平的紊亂及基因調控異常有關，不同的生物學因素的改變，能夠通過影響到腫瘤相關信號通路的激活，導致早期細胞異常病變的發(fā)生[6]?，F(xiàn)階段臨床上乳腺浸潤性導管癌患者的早期診斷的水平仍然較為局限，影像學篩查雖然能夠提高乳腺浸潤性導管癌的篩查水平，但漏診率或者誤診率水平仍然較高[7]；臨床上通過手術及綜合性的放療方式輔助治療乳腺浸潤性導管癌，但其治療后的乳腺浸潤性導管癌患者的生存時間的改善并不理想，治療后的3年生存率并無明顯的提高[8]。本次研究對于乳腺浸潤性導管癌患者病灶組織中的免疫組化相關蛋白水平的相關研究，具有下列兩個方面的價值：(1)能夠為臨床上乳腺浸潤性導管癌患者的早期篩查提供理論基礎；(2)能夠為免疫靶向治療提供作用靶點，從而提高乳腺浸潤性導管癌患者的生存預后水平。

P53的表達能夠影響到導管上皮細胞的增殖活性，提高上皮細胞核DNA的異常增殖的風險，P53的表達陽性率的提升還能夠誘導癌細胞的早期分化調控障礙，促進癌細胞的低分化及中低分化的發(fā)生風險[9]；c-erbB-2作用PI3K/AKT信號通路的下游因子，其表達濃度的上調能夠提高乳腺導管細胞的核轉錄水平，抑制柱狀上皮細胞的凋亡。基礎領域的研究[4]還認為，c-erbB-2的表達能夠提高乳腺浸潤性導管癌細胞的侵襲能力，提高癌細胞對于臨近正常乳腺組織的浸潤風險；bcl-2是重要的凋亡相關因子，其能夠影響到導管上皮細胞的凋亡過程，促進乳腺癌細胞的程序性凋亡過程[10-11]。

本次研究通過免疫組化的相關分析研究發(fā)現(xiàn)，在浸潤性導管癌患者病灶組織中，P53、c-erbB-2的表達陽性率顯著的上升，高于正常對照乳腺組織，差異較為明顯，提示了P53、c-erbB-2均可能影響到了乳腺癌發(fā)生，通過薈萃相關研究[12-13]，筆者認為P53、c-erbB-2對于乳腺浸潤性導管癌的病情影響可能與下列幾個方面的因素有關：(1)P53的上升能夠提高導管上皮細胞內的MAPK信號通路的激活，促進了癌細胞轉錄活性的增強；(2)c-erbB-2不僅能夠促進乳腺上皮細胞的異常增殖過程，同時還能夠促進新生微血管的形成，提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平。賴靜等[14]也認為，在乳腺癌患者病灶組織中，P53的表達陽性率可平均上升30%以上，同時在臨床分期較晚或者遠期病死率較高的導管癌患者中，P53的表達陽性率可進一步的上升。bcl-2在乳腺癌病灶組織中的表達陽性率顯著的下降，提示了bcl-2在乳腺癌的發(fā)生過程中可能具有一定的保護性作用，這主要由于bcl-2的表達能夠維持乳腺上皮細胞的增殖，抑制癌細胞的過度增殖和浸潤過程，并促進癌細胞的凋亡過程。在分化程度低、有淋巴結轉移、浸潤深度較深或者臨床分期較晚的乳腺癌患者中，P53、c-erbB-2的表達濃度可進一步的上升，同時bcl-2的表達濃度可進一步的下降，提示不同的指標與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要由于P53、c-erbB-2的表達能夠改變癌細胞的生物學活性，影響到癌細胞對于淋巴結的黏附過程[15]。而bcl-2的表達濃度的下降失去了其對于癌細胞的細胞周期的穩(wěn)定作用。但部分研究者認為bcl-2等指標的改變與淋巴結的轉移并無關系，存在不同的結論可能與免疫組化相關指標的檢測靈敏度的差異等有關。回歸分析也可見，分化程度和TNM分期是影響P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達的因素，進一步提示了P53、c-erbB-2等與乳腺癌的病情關系。

綜上所述，乳腺浸潤性導管癌患者組織內P53、c-erbB-2蛋白陽性表達率較高，bcl-2陽性表達率較低，分化程度和TNM分期是其表達的影響因素。