可溶性髓樣細(xì)胞受體-1診斷小兒化膿性關(guān)節(jié)炎的價(jià)值

曾曉輝 萬(wàn)玲玲 黃 芳

化膿性關(guān)節(jié)炎是臨床常見(jiàn)關(guān)節(jié)內(nèi)化膿性感染，多源于化膿性細(xì)菌直接感染導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞及功能喪失的關(guān)節(jié)炎，臨床又稱(chēng)之為“敗血癥性關(guān)節(jié)炎”[1]。臨床常采用關(guān)節(jié)穿刺液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)或革蘭染色涂片作為診斷關(guān)節(jié)內(nèi)化膿性感染診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是該法具有“操作困難、耗時(shí)長(zhǎng)、陽(yáng)性率低”等不足，且臨床難以實(shí)現(xiàn)疾病早期診斷，因而會(huì)影響整體治療效果[2]。sTREM-1是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型炎癥激發(fā)受體，有研究認(rèn)為，其可作為化膿性關(guān)節(jié)炎早期診斷的重要參考依據(jù)，且在疾病嚴(yán)重程度分級(jí)、預(yù)后評(píng)估方面優(yōu)勢(shì)明顯，但是現(xiàn)階段學(xué)界仍存在明顯爭(zhēng)議[3-4]。本研究以41例化膿性關(guān)節(jié)炎患兒為例，主要探討sTREM-1的診斷價(jià)值，并與健康體驗(yàn)者、SIRS者進(jìn)行對(duì)照研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后，選取2015年6月—2016年8月我院收治的41例化膿性關(guān)節(jié)炎患兒作為C組，同時(shí)選取同期于我院接受治療的全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)患者40例、進(jìn)行體檢的健康者40例分別作為B組、A組。A組男女比例為3 ∶2，年齡2～7歲，平均(4.51±0.82)歲。B組男女比例為23 ∶17，年齡2～8歲，平均(4.82±1.03)歲。C組男女比例為23 ∶18，年齡2～9歲，平均(5.01±0.98)歲。3組患者基線資料對(duì)比均保持同質(zhì)性(P>0.05)，可進(jìn)行后續(xù)研究。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)臨床癥狀、體征觀察及CT檢查、關(guān)節(jié)穿刺液和血培養(yǎng)結(jié)果確診符合關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②對(duì)本研究知情，且簽署知情同意書(shū)；③臨床資料完整，方便追蹤隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近期采用藥物治療或者手術(shù)干預(yù)者；②合并其他感染者；③認(rèn)知功能障礙、伴有神經(jīng)系統(tǒng)疾病、配合度差者。

1.3 方法

3組研究對(duì)象均于就診后24 h內(nèi)采集外周血各3份，1份送至醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)CRP(C-反應(yīng)蛋白)，另外2份在采血后30 min內(nèi)作離心處理，參數(shù)：2 000 r/min，15 min，之后留血清-80 °C保存，進(jìn)行PCT(降鈣素原)、血清sTREM-1檢測(cè)，均由檢驗(yàn)科專(zhuān)業(yè)人員操作。sTREM-1檢測(cè)方法：采用ELISA法(酶聯(lián)免疫測(cè)定法)，將特異性抗體與固相載體連接形成固相抗體-加受檢標(biāo)本-加酶標(biāo)抗體-加底物。CRP檢測(cè)方法：采用QiukRead分析儀，在比濁管中加入1 mL緩沖液，再加20 μL全血輕輕混勻，把比濁管插入檢測(cè)孔測(cè)定空白，40 s后在比濁管中加入反應(yīng)試劑，混勻6 s后插入檢測(cè)孔測(cè)定，2 min內(nèi)在屏幕上會(huì)顯示出CRP濃度。PCT檢測(cè)方法：采用典型分立式自動(dòng)生化分析儀，按照試劑說(shuō)明書(shū)采用免疫發(fā)光測(cè)定法檢測(cè)。將血清和丫啶酯偶聯(lián)的單抗放在含有抗Catacalcin單抗的測(cè)試管中，孵育后反復(fù)洗滌，洗去過(guò)剩的示蹤液。注入H2O2和NaOH后，形成一個(gè)光的信號(hào)，按照相對(duì)光單位以標(biāo)準(zhǔn)曲線為基準(zhǔn)測(cè)定，并將其轉(zhuǎn)換為PCT濃度。

1.4 觀察指標(biāo)

①檢測(cè)對(duì)比3組患者sTREM-1、CRP、PCT水平。②計(jì)算C組內(nèi)TREM-1、CRP、PCT診斷敏感性、特異度。敏感性=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%；特異性=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%。③以特異性、敏感性分別為為橫坐標(biāo)、縱坐標(biāo)，作受試者工作特征(ROC)曲線，并用曲線下面積反應(yīng)實(shí)驗(yàn)診斷價(jià)值的大小，曲線下面積越大，診斷價(jià)值越高。而ROC曲線越靠近左上角，則是錯(cuò)誤最少的最佳閾值，表明其診斷價(jià)值越大。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組患者sTREM-1、CRP、PCT水平比較

C、B組患者sTREM-1、CRP、PCT表達(dá)水平明顯高于A組，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。與B組相比，C組sTREM-1、CRP、PCT表達(dá)水平明顯更高，組間數(shù)據(jù)對(duì)比差異顯著(P<0.05)。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

組別nsTREM-1(ng·mL-1)PCT(ng·mL-1)CRP(mmol·L-1)A組4042.31±10.570.41±0.733.52±1.17B組4095.47±18.571.85±0.835.84±2.14C組41187.42±42.7135.17±5.2713.05±3.52F值-284.27785.647162.720P值-0.0000.0000.000

2.2 C組sTREM-1、CRP、PCT診斷敏感性、特異度比較

C組確診患者41例，sTREM-1檢測(cè)敏感度、特異度分別為86.84%、100.0%；CRP檢測(cè)敏感度、特異度分別為83.78%、75.00%；PCT檢測(cè)敏感度、特異度分別為86.49%、75.00%。三種檢測(cè)指標(biāo)診斷敏感性對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.537，P>0.05)；sTREM-1診斷特異度明顯高于CRP、PCT診斷，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=10.247，P<0.05)。如表2所示。

表2 C組sTREM-1、CRP、PCT診斷敏感性、特異度比較 [n=41,(n，%)]

2.3 ROC曲線分析

sTREM-1曲線下面積為0.912，明顯大于PCT(0.884)、CRP(0.854)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 C組三種指標(biāo)檢測(cè)的 ROC曲線分析

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎是一種以“繼發(fā)性骨質(zhì)增生、關(guān)節(jié)軟骨退行性病變”為主要癥狀的慢性關(guān)節(jié)疾病，隨著病情惡化會(huì)進(jìn)一步累及關(guān)節(jié)軟骨或整個(gè)關(guān)節(jié)，臨床多表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛及壓痛、晨僵、關(guān)節(jié)腫大等癥狀，嚴(yán)重影響患者的正常生活及工作[5-6]。其中化膿性關(guān)節(jié)炎較為常見(jiàn)，多見(jiàn)于嬰幼兒及學(xué)齡期兒童，由于小兒自身免疫功能低下，因而早期癥狀并不典型，極易與SIRS混淆，出現(xiàn)誤診及漏診的現(xiàn)象[7]。若未及時(shí)予以科學(xué)有效的治療措施，極易造成患者關(guān)節(jié)破壞及功能喪失，嚴(yán)重者甚至危及生命，因而對(duì)于化膿性關(guān)節(jié)炎而言，早期診斷是治療成功的關(guān)鍵[8]。

以往臨床常采用白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞技術(shù)、體溫等指標(biāo)進(jìn)行化膿性關(guān)節(jié)炎診斷，但是有研究顯示，傳統(tǒng)炎癥指標(biāo)在生存組、死亡組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，提示傳統(tǒng)指標(biāo)并不能有效反映疾病的嚴(yán)重程度[9]。TREM-1最初是由瑞士Basel免疫研究所科學(xué)家Bouchon A等[10]鑒別發(fā)現(xiàn)，其在不同類(lèi)型感染中均會(huì)呈現(xiàn)顯著升高，且與病情嚴(yán)重程度存在明顯相關(guān)性。sTREM-1是TREM-1的可溶形式，是TREM-1在基質(zhì)金屬蛋白酶作用下而產(chǎn)生的裂解產(chǎn)物，與TREM-1表達(dá)水平呈現(xiàn)明顯正相關(guān)，能夠反映感染的嚴(yán)重程度，且發(fā)現(xiàn)時(shí)間越早，在與感染程度同步狀態(tài)下對(duì)機(jī)體情況的反映結(jié)果更加真實(shí)、可靠[11-12]。本研究中將其用于化膿性關(guān)節(jié)炎的臨床診斷，結(jié)果顯示：C、B組sTREM-1表達(dá)水平分別為(187.42±42.71)ng/mL、(95.47±18.57)ng/mL，明顯高于A組(P<0.05)，說(shuō)明化膿性關(guān)節(jié)炎與SIRS患者sTREM-1表達(dá)水平明顯高于正常健康人群；另外C組、B組數(shù)據(jù)對(duì)比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示sTREM-1能夠?qū)崿F(xiàn)化膿性關(guān)節(jié)炎與SIRS的有效鑒別。另外sTREM-1屬于免疫球蛋白超家族成員之一，當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染時(shí)，能夠選擇性在中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等髓樣細(xì)胞表面表達(dá)，通過(guò)特定細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑能夠促進(jìn)炎性介質(zhì)產(chǎn)生及激活產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)。高曉嵐等[13]研究提示，sTREM一1在細(xì)菌感染后3 h開(kāi)始升高，從而在感染早期參與啟動(dòng)炎癥反應(yīng)并持續(xù)發(fā)揮相應(yīng)功能。 冬蘭[14]分析發(fā)現(xiàn)，sTREM-1 診斷細(xì)菌感染的敏感度、特異度分別為 82%、86%，是預(yù)測(cè)感染的一個(gè)精確指標(biāo)。陳宜陽(yáng)等[15]采用ELISA 和Western blot 方法檢測(cè)了132 例關(guān)節(jié)積液，結(jié)果也發(fā)現(xiàn)化膿性關(guān)節(jié)積液sTREM-1明顯高于痛風(fēng)、非化膿性或非類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)積液、非炎癥性關(guān)節(jié)積液。由此可見(jiàn)，sTREM-1在各種病原菌感染時(shí)，其血清濃度會(huì)出現(xiàn)明顯增高，因而臨床可作為一種新型指標(biāo)用于感染性疾病檢測(cè)。

為了進(jìn)一步明確sTREM-1用于化膿性關(guān)節(jié)炎的診斷價(jià)值，本研究特將其與CRP、PCT進(jìn)行對(duì)照分析。表1顯示C、B組CRP、PCT表達(dá)水平明顯高于A組，且B、C組數(shù)據(jù)對(duì)比差異顯著(P<0.05)，提示CRP、PCT檢測(cè)用于化膿性關(guān)節(jié)炎也具有重要的鑒別價(jià)值，但并未實(shí)現(xiàn)三種指標(biāo)診斷價(jià)值的深入?yún)^(qū)別。據(jù)此，筆者對(duì)C組患者均進(jìn)行sTREM-1、CRP、PCT檢測(cè)，并進(jìn)行診斷敏感性及特異度計(jì)算，結(jié)果顯示：三種檢測(cè)指標(biāo)診斷敏感性對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；sTREM-1診斷特異度明顯高于CRP、PCT診斷(P<0.05)，說(shuō)明sTREM-1是一種能夠有效診斷化膿性關(guān)節(jié)炎的指標(biāo)，與徐志康等[16]研究成果相一致。究其原因，認(rèn)為主要與以下幾個(gè)因素相關(guān)：CRP是一種急性期反應(yīng)蛋白，在創(chuàng)傷、強(qiáng)烈應(yīng)激、感染等病癥中均可能升高，因而無(wú)法鑒別細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲(chóng)等引發(fā)的感染類(lèi)疾病，故相比sTREM-1檢測(cè)，診斷缺乏特異性；PCT是一種全身性感染的特異性指標(biāo)，也可早期預(yù)測(cè)感染嚴(yán)重程度，但是無(wú)法動(dòng)態(tài)反映疾病發(fā)展過(guò)程，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定性、可靠性欠佳，而sTREM-1檢測(cè)與疾病嚴(yán)重程度明顯相關(guān)，在與感染程度同步狀態(tài)下對(duì)機(jī)體情況的反映結(jié)果更加真實(shí)。另外sTREM-1曲線下面積為0.912，明顯大于PCT(0.884)、CRP(0.854)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，說(shuō)明sTREM-1檢測(cè)診斷價(jià)值最高?；艚ǖ萚17]研究中，ROC曲線顯示sTREM-1最靠近左上角，則是錯(cuò)誤最少的最佳閾值，與CRP、PCT相比診斷優(yōu)勢(shì)更為明顯。

綜上所述，sTREM-1作為臨床新發(fā)現(xiàn)的用于炎性疾病診斷的標(biāo)志物，能夠通過(guò)ELISA 檢測(cè)方法在血清及各種體液中被檢測(cè)出，方法簡(jiǎn)便可靠，可為臨床上小兒化膿性關(guān)節(jié)炎的早期診斷、及時(shí)治療爭(zhēng)取時(shí)間。但由于目前國(guó)內(nèi)外缺乏大樣本研究，該指標(biāo)廣泛應(yīng)用于臨床尚有爭(zhēng)議，期待更多的臨床研究進(jìn)一步證實(shí)，以早日用于臨床診斷。