白族藥梁王茶化學(xué)成分研究

羅曉磊1,2 王 敏1,2 肖朝江1,2 寧 曉1,2 董 相1,2 姜 北1

1.大理大學(xué)藥物研究所，云南 大理 671000；2.大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南 大理 671000

梁王茶為五加科(Araliaceae)梁王茶屬(NothopanaxMiq.)植物掌葉梁王茶Nothopanaxdelavayi的樹(shù)皮或葉。灌木，葉為掌狀復(fù)葉，稀單葉；花期9～10月；生于森林或灌木叢中，海拔1600～2500 m；分布于貴州、云南、四川等地；全株無(wú)毒，可入藥，有清熱解毒、消炎止痛、理氣舒筋、生津止瀉等療效[1]。該植物在大理全州均有分布，是傳統(tǒng)的白族藥用植物，白族民間主要用于口腔潰瘍、咽喉腫痛、咳嗽、月經(jīng)不調(diào)、跌打損傷、解煙毒，以及急性結(jié)膜炎、消化不良、蛔蟲(chóng)、腸炎等病癥的治療與處理；其根具有祛風(fēng)除濕、止痛等功效，可用于風(fēng)濕骨痛[2]。

目前，關(guān)于梁王茶屬植物化學(xué)成分有少量研究報(bào)道，分離得到的化合物主要包括三萜皂苷類(lèi)，咖啡酸類(lèi)，黃酮苷類(lèi)，多糖和精油類(lèi)等成分[3-11]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)梁王茶具有一定的抗瘧活性[12]，另有文獻(xiàn)報(bào)道梁王茶屬植物還具有鎮(zhèn)痛[13]、抗腫瘤、抗病毒、抑菌、調(diào)節(jié)免疫、防治心腦血管疾病[14-15]、抑制前列腺增生[10]以及解酒保肝[11]等作用。其中抗腫瘤、抗病毒、抑菌以及防治心腦血管疾病等作用的相關(guān)活性成分尚未見(jiàn)報(bào)道。為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)掌葉梁王茶的化學(xué)成分，明確相關(guān)活性與藥用物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)采自云南大理的掌葉梁王茶莖葉進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離得到9個(gè)化合物，分別鑒定為路路通內(nèi)酯(1)，三對(duì)節(jié)酸(2)，丁香脂素(3)，3-oxo-6β-hydroxylean-12-en-28-oic acid(4)，3β,29-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester(5)，5-O-Caffeoylquinic acid methyl ester(6)，β-谷甾醇(7)，胡蘿卜苷(8)，雙酚 A(9)。其中，化合物1、3-6為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器 BrukerAvanceIII-400核磁共振儀(德國(guó)布魯克公司，TMS 為內(nèi)標(biāo))；DionexUltiMate 3000超高效液相色譜儀及BrukerDaltonics MS質(zhì)譜系統(tǒng)；RE-52AA 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；AL204 型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；柱層析硅膠和薄層層析硅膠板GF254(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20(瑞典Amersham Biosciences 公司)；MCI CHP-20(75～150 μm)(日本三菱公司)；石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有機(jī)試劑均為工業(yè)級(jí)溶劑，重蒸后使用；正丁醇、異丙醇為分析純(上海化工有限公司)；10%硫酸烘烤顯色或碘蒸氣熏蒸顯色。

1.2 材料 實(shí)驗(yàn)用掌葉梁王茶于2014年1月采自云南大理，由大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院張德全博士鑒定為梁王茶屬植物掌葉梁王茶Nothopanaxdelavayi(Franch.)Harmsex Diels，植物標(biāo)本(編號(hào)：20140108-3)保存于大理大學(xué)藥物研究所姜北教授研究組。

2 提取和分離

梁王茶干燥莖葉2.4 kg，粉碎后用15 L 80%乙醇冷浸提取3次，每次24 h。過(guò)濾，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓條件下回收乙醇后得總浸膏195 g。將總浸膏分散于400 mL水中，依次用乙酸乙酯(600 mL×6)，正丁醇(600 mL×4)萃取，減壓條件下回收溶劑后得乙酸乙酯部位55 g，正丁醇部位64 g。取乙酸乙酯部位樣品以適量粗硅膠(80～100目)拌樣，經(jīng)300～400目硅膠柱，氯仿-丙酮混合溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(1∶0～0∶1)，TLC檢測(cè)，合并得7個(gè)組分(A-G)。

A組分經(jīng)MCI柱色譜(50%～100%甲醇/水)，硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯10∶1～0∶1)和重結(jié)晶等方法得化合物1(28 mg)和7(78 mg)；B組分經(jīng)MCI柱色譜(50%～100%甲醇/水)，硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯5∶1～0∶1、氯仿-丙酮25∶1～0∶1)，Sephadex LH-20 凝膠柱色譜(氯仿-甲醇1∶1)得化合物2(21 mg)、3(12 mg)、4(10 mg)和9(5 mg)；E組分經(jīng)MCI柱色譜(50%～100%甲醇/水)，反復(fù)硅膠柱色譜(氯仿-甲醇25∶1～0∶1、20∶1～0∶1)得化合物5(51 mg)、6(1 g)和化合物8(148 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:分子式：C30H44O4，白色無(wú)定型粉末H-NMR (400MHz, CDCl3)δ: 3.06 (2H, brs, H-11, 12), 2.66 (1H, ddd,J= 16.0, 11.9, 6.9 Hz, H-21a), 2.44 (ddd,J= 16.0, 6.9, 3.4 Hz, H-21b)2.33 (1H, dd,J=13.8, 3.1 Hz, H-18), 1.18, 1.11, 1.11, 1.10, 1.06, 1.00 and 0.93(each 3H, s, Me-25, 26, 27, 24, 23, 29 and 30);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.8(t, C-1), 34.4 (t, C-2), 216.4 (s, -C=O), 47.7 (s, C-4), 54.9 (d, C-5), 18.9 (t, C-6), 30.6 (t, C-7), 40.8 (s, C-8), 50.3 (d, C-9), 36.4 (s, C-10), 52.6 (d, C-11), 57.2 (d, C-12), 87.5 (s, C-13), 41.4 (s, C-14), 27.1 (t, C-15), 21.4 (t, C-16), 44.0 (s, C-17), 49.8 (d, C-18), 37.9 (t, C-19), 31.6 (s, C-20), 33.9 (t, C-21), 27.1 (t, C-22), 21.3 (q, C-23), 26.1 (q, C-24), 16.6 (q, C-25), 18.8 (q, C-26), 19.9 (q, C-27), 179.4 (s, -C=O), 33.3 (q, C-29), 23.7 (q, C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為路路通內(nèi)酯。

化合物2:分子式：C30H46O5，白色針晶(吡啶)。1H-NMR (400MHz, C5D5N)δ: 5.58 (1H, t,J= 3.4 Hz, H-12), 3.46 (2H, overlap, H-3, 18), 2.62 (1H, t,J= 13.9 Hz, H-19a), 1.98 (1H, overlap, H-19b), 1.60, 1.30, 1.24, 1.05, 1.04 and 0.91 (each 3H, s, Me-30, 27, 23, 26, 24 and 25);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 39.4 (t, C-1), 28.6 (t, C-2), 78.6 (d, C-3), 39.9 (s, C-4), 56.3 (d, C-5), 19.3 (t, C-6), 33.8 (t, C-7), 40.3 (s, C-8), 48.6 (d, C-9), 37.9 (s, C-10), 24.4 (t, C-11), 123.7 (d, C-12), 144.8 (s, C-13), 43.1 (s, C-14), 28.8 (t, C-15), 24.4 (t, C-16), 47.2 (s, C-17), 41.6 (d, C-18), 41.6 (t, C-19), 42.7 (s, C-20), 29.8 (t, C-21), 32.9 (t, C-22), 29.3 (q, C-23), 17.1(q, C-24), 16.1 (q, C-25), 17.9 (q, C-26), 26.6 (q, C-27), 180.5 (s,-C-28), 181.5 (s, C-29), 20.5 (q, C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為三對(duì)節(jié)酸。

化合物3:分子式：C22H26O8，白色無(wú)定型粉末。HR-ESI-MSm/z: 417.1541[M-H]- (calcd for C22H25O8, 417.1555)。1H-NMR (400MHz, CD3OD)δ: 6.65 (4H, s, H-2′, 6′, 2″ and 6″), 4.72 (2H, d,J= 3.7 Hz, H-2, 6), 4.26 (2H, td,J= 6.9, 1.7 Hz, H-4a, 8a), 3.88 (2H, overlap, H-4b, 8b), 3.84 (12H, s, 4×-OCH3), 3.14 (2H, brs, H-1, 5);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 55.5 (d, C-1, 5), 87.6 (d, C-2, 6), 72.8 (t, C-4, 8), 133.1 (s, C-1′, 1″), 104.5 (d, C-2′, 6′, 2″, 6″), 149.3 (s, C-3′, 5′, 3″, 5″), 136.2 (s, C-4′, 4″), 56.8 (q, 4×-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為丁香脂素。

化合物4:分子式：C30H46O4，白色簇晶(氯仿)。1H-NMR (400MHz, C5D5N)δ: 5.60 (1H, t,J= 3.4 Hz, H-12), 4.69 (1H, s, H-6), 3.37 (1H, overlap, H-18), 2.89 (1H, td,J= 14.5, 6.2 Hz, H-21), 1.69, 1.69, 1.63, 1.38, 1.29, 1.04 and 0.98 (each 3H, s, Me-24, 25, 26, 23, 27, 30 and 29);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 41.4 (t, C-1), 33.6 (t, C-2), 216.0 (s, C-3), 47.1 (s, C-4), 57.3 (d, C-5), 68.5 (d, C-6),42.2 (t, C-7), 39.6 (s, C-8), 48.3 (d, C-9), 37.3 (s, C-10), 24.1 (t, C-11), 123.0 (d, C-12), 144.7 (s, C-13), 43.2 (s, C-14), 28.6 (t, C-15), 24.3 (t, C-16), 49.6 (s, C-17), 42.5 (d, C-18), 46.8 (t, C-19), 31.4 (s, C-20), 35.1 (t, C-21), 34.6 (t, C-22), 26.2 (q, C-23), 24.5 (q, C-24), 16.7 (q, C-25), 19.1 (q, C-26), 26.6(q, C-27),180.5 (s, C-28), 33.7 (q, C-29), 24.1 (q, C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19-20]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為3-oxo-6β-hydroxylean-12-en-28-oic acid。

化合物5:分子式：C32H50O6。白色簇晶(甲醇)。1H-NMR (400MHz, CD3OD)δ: 5.34 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-1′), 5.26 (1H, t,J= 3.2 Hz, H-12), 3.77 (1H, d,J= 11.3 Hz, H-6′a), 3.63 (1H, dd,J= 11.3, 3.5 Hz, H-6′b), 3.35-3.26 (6H, overlap, H-3, 29, 2′, 3′ and 4′), 3.10 (1H, dd,J= 11.2, 4.8 Hz, H-5′), 2.84 (1H, dd,J= 13.9, 4.0 Hz, H-18), 1.19, 1.12, 0.92, 0.90, 0.76 and 0.73 (each 3H, s, Me-30, 27, 23, 25, 26 and 24).13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 39.9 (t, C-1), 28.8 (t, C-2), 78.2 (d, C-3), 39.8 (s, C-4), 56.7 (d, C-5), 19.5 (t, C-6), 33.9 (t, C-7), 39.8 (s, C-8), 49.1 (d, C-9), 38.1 (s, C-10), 24.1 (t, C-11), 124.5 (d, C-12), 144.1 (s, C-13), 43.0 (s, C-14), 27.8 (t, C-15), 24.6 (t, C-16), 47.8 (s, C-17), 41.5 (d, C-18), 41.2 (t, C-19), 42.9 (s, C-20), 29.5 (t, C-21), 32.0 (t, C-22), 28.7 (q, C-23), 16.3 (q, C-24), 16.0 (q, C-25), 17.7 (q, C-26), 26.3 (q, C-27), 177.5 (s, C-28), 73.9 (t, C-29), 19.8 (q, C-30), 95.7 (d, C-1′), 73.9 (d, C-2′), 78.7 (d, C-3′), 71.0 (d, C-4′), 79.7 (d, C-5′), 62.3 (d, C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為3β,29-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester。

化合物6:分子式：C17H20O9，黃色固體(丙酮)。HR-ESI-MSm/z: 367.1021[M-H]- (calcd for C17H19O9, 367.1034)。1H-NMR (400MHz, CD3OCD3)δ:7.51 (1H, d,J= 15.9 Hz,H-7′), 7.13 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2′), 6.97 (1H, dd,J= 8.3, 1.8 Hz, H-6′), 6.83 (1H, d,J= 8.3Hz, H-5′), 6.23 (1H, d,J= 15.9Hz, H-8′),5.34 (1H, m, H-5), 4.20 (1H, m, H-3), 3.78 (1H, dd,J= 8.5, 3.1 Hz, H-4), 3.64 (3H, s, -OCH3), 2.26-2.04 (4H, m, H-2, 6);13C-NMR (100 MHz, CD3OCD3)δ: 75.7 (s, C-1), 36.6 (t, C-2), 70.6 (d, C-3), 72.8 (d, C-4), 71.2 (d, C-5), 38.3 (t, C-6), 174.4 (s, C-7), 127.2 (s, C-1′), 114.9 (d, C-2′), 146.0 (s, C-3′), 148.6 (s, C-4′), 116.2 (d, C-5′), 122.5 (d, C-6′), 146.0 (d, C-7′), 115.2 (d, C-8′), 167.1 (s, C-9′), 52.7 (q, -OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為5-O-caffeoylquinic acid methyl ester。

化合物7:白色針狀結(jié)晶(氯仿)。通過(guò)在TLC上用三種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)對(duì)比，與β-谷甾醇的對(duì)照品斑點(diǎn)顏色及Rf值均一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物8:白色粉末(氯仿-甲醇)。通過(guò)在TLC上用3種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)對(duì)比，與胡蘿卜苷的對(duì)照品斑點(diǎn)顏色及Rf值均一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

化合物9:白色粉末，分子式C15H16O2，白色針晶(丙酮)。1H-NMR (400MHz, CD3COCD3)δ: 6.95 (4H, d,J=8.7 Hz, H-3, 5, 3′, 5′), 6.62 (4H, d,J=8.7 Hz, H-2, 6, 2′, 6′), 1.48 (6H, s, 2×-CH3);13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3)δ:, 156.0 (s, C-1), 115.4 (d, C-2, 6), 128.4 (d, C-3, 5), 142.8 (s, C-4), 42.0 (s, C-7), 31.5 (q, C-8, 8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為雙酚A。

4 討論

本研究從掌葉梁王茶莖中分離鑒定了9個(gè)化合物，包括4個(gè)三萜類(lèi)化合物，2個(gè)甾體類(lèi)化合物，1個(gè)木脂素類(lèi)化合物，2個(gè)酚類(lèi)化合物，其中5個(gè)化合物(1、3-6)為首次從該屬植物中分離得到。

白俊鵬等[24]的研究表明化合物6具有較好的神經(jīng)保護(hù)活性，在15 μmol·L-1給藥濃度下神經(jīng)保護(hù)率為21.33%?；衔?還具有一定的抗氧化活性，其IC50值為7.5～8.8 μg·mL-1[22,25]。另有文獻(xiàn)報(bào)道化合物3對(duì)人體宮頸癌細(xì)胞系(HeLa)、肺癌細(xì)胞系(A-549)、乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7)具有一定的抑制活性，IC50值均≤47.12 μg·mL-1[26-27]，對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系(HT-29)有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，其IC50值為0.227 μg·mL-1[27]。除此之外化合物3還具有一定的抑制乙酰膽堿酶活性，IC50值為200 μg·mL-1[28]，在0.6 mg·mL-1濃度下對(duì)油菜菌核病菌抑制率達(dá)到36.72%[29]。根據(jù)本研究分離得到的成分及相關(guān)活性報(bào)道，初步證實(shí)了掌葉梁王茶的白族民間藥用具有活性物質(zhì)基礎(chǔ)，該植物的抗腫瘤、抗病毒、抑菌以及防治心腦血管疾病等作用也具有一定的合理性，為掌葉梁王茶的開(kāi)發(fā)藥用提供了理論依據(jù)，更多的化學(xué)成分與深入的藥理作用機(jī)制仍有待一步研究。