中草藥對嗜水氣單胞菌的抑制作用研究進(jìn)展

陳融，金清，程磊，許巧情，郭利偉

（長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

嗜水氣細(xì)胞單菌引起的細(xì)菌性敗血癥，在我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中發(fā)病率高，流行時間長，造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大。使用抗菌藥物治療嗜水氣細(xì)胞單菌相關(guān)疾病，其效果顯著，但其危害性也十分突出，如抗生素在魚體的殘留，細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)并廣泛傳播等。中草藥具有副作用小、效果持續(xù)時間長、用藥殘留小等特點(diǎn)，是抗生素良好的代替品，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中有很大應(yīng)用前景。因此，筆者對歷年來關(guān)于中草藥對嗜水氣單胞菌的抑制效果進(jìn)行綜述，旨在為魚類細(xì)菌病的防治提供科學(xué)的基礎(chǔ)用藥依據(jù)。

1 嗜水氣單胞菌引起的水產(chǎn)動物疾病概況

嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophlia）是一種常見人-畜-魚共患病病原菌，廣泛分布于池水、淤泥等自然環(huán)境中，在繁殖過程中能產(chǎn)生腸毒素等多種致病因子，造成水產(chǎn)動物尤其是魚類患上細(xì)菌性敗血病、細(xì)菌性腸炎等疾病，從而導(dǎo)致魚類大量死亡，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成極大損失[1-3]。同時，它也是人類致病菌，感染者發(fā)生腹瀉、中毒，甚至?xí)饠⊙Y、膽囊炎、腦膜炎、肺炎、腹膜炎等。嗜水氣單胞菌致病問題已躍然成為當(dāng)代公共衛(wèi)生矚目的對象[4-9]。

有研究者對嗜水氣單胞菌進(jìn)行流行病檢查，發(fā)現(xiàn)豫北和遼寧等地區(qū)引起魚類細(xì)菌性敗血病主要為致病性嗜水氣單胞菌[10-11]。由嗜水氣單胞菌引起的細(xì)菌性疾病在江蘇省各市均有發(fā)生，在重點(diǎn)養(yǎng)殖區(qū)尤為嚴(yán)重。該疾病在25℃以上的發(fā)病率達(dá)到73%，且多地區(qū)分離出的嗜水氣單胞菌均有多重耐藥性，且有逐年遞增趨勢，這極可能與養(yǎng)殖過程中抗生素濫用有關(guān)[12-14]。現(xiàn)在主要控制抗生素的用藥間隔來減緩其耐藥性增長，但有研究發(fā)現(xiàn)嗜水氣單胞菌對氟苯尼考產(chǎn)生耐藥性在后代中保持穩(wěn)定，消失率為0，原因考慮是不同動物源病菌所產(chǎn)生的差異，其耐藥性的傳播和穩(wěn)定化值得重視[15-17]。這些不僅證明嗜水氣單胞菌對魚類的危害性，也表明尋找新型治療藥物，減少抗生素甚至替代其使用，以降低該菌耐藥性的迫切需求，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)具有重要現(xiàn)實意義。

目前，抗生素和合成抗菌藥是治療細(xì)菌性疾病的最常用藥物，但是其具有耐藥性、藥物殘留等缺點(diǎn)。大量研究表明，中藥在抗病毒、抗菌和抗細(xì)菌耐藥性方面均有顯著成效，還可以提高機(jī)體免疫力[18-23]。近年來，關(guān)于中藥對嗜水氣單胞菌的試驗研究十分豐富，其效果也十分明顯，已經(jīng)越來越引起人們的關(guān)注。

2 中藥在防治嗜水氣單胞菌相關(guān)疾病上的應(yīng)用研究

2.1 單味中藥及提取物在防治嗜水氣單胞菌相關(guān)疾病上的應(yīng)用

單味中藥及提取物具有抑殺細(xì)菌能力，可以增強(qiáng)免疫力，增加機(jī)體抗病性，并促進(jìn)動物生長。吳亮[24]對從病鰻中分離的七株血清型不同的嗜水氣單胞菌株做體外抑菌試驗，發(fā)現(xiàn)黃苓對七株菌株皆有抑菌效果，黃連和大黃對六株有抑菌效果。牛國一等[25]通過紙片打孔法試驗發(fā)現(xiàn)厚樸酚和黃藤素這2種植物活性成分對嗜水氣單胞菌有顯著抑制，且隨黃藤素質(zhì)量濃度降低，抑菌圈直徑減少。Sheikhlar[26]在體外藥物篩選得到飛揚(yáng)草甲醇提取物對嗜水氣單胞菌抑制好，抑菌圈為（22.41±3.30）mm。

有研究者發(fā)現(xiàn)將刺蕁麻加入維多利亞野鯪的成魚與幼魚的飲食中，可以刺激魚的免疫力，同時使維多利亞桿菌更具抗嗜水氣單胞菌性[27]。Bilen等[28]用蒔蘿與水芹分別作為飼料添加劑喂食幼鯉45 d，用嗜水氣單胞菌攻擊鯉魚發(fā)現(xiàn)，水芹可增加鯉魚免疫力，與對照組比顯著提高其存活率，同時增加生長速度。使用穿心蓮提取物溶液浸泡亞洲鯰魚腹，14 d后腹膜內(nèi)給藥感染，與對照組比，預(yù)處理魚的潰瘍性皮炎在9 d內(nèi)恢復(fù)至正常水平[29]。在鳙魚的飼料中添加了不同濃度的五倍子并飼喂45 d后進(jìn)行攻毒實驗，發(fā)現(xiàn)在嗜水氣單胞菌感染的初期和后期，對各項免疫指標(biāo)的檢測中，實驗組均高于對照組，得出五倍子分別為醇提1%和水提2%時效果最佳[30]。在羅非魚注射嗜水氣單胞菌6 d后，使用3種不同中藥醇提取物治療（凹唇姜，紅球姜，毛茄）后，觀察其異常游泳行為，解剖病理，魚血總菌數(shù)和白細(xì)胞和吞噬細(xì)胞指數(shù)，該中藥均表現(xiàn)較好的抑菌效果，可以提高吞噬指數(shù)和恢復(fù)能力[31]。黃芪、忍冬提取物和添加硼在魚飼料中可作為免疫刺激劑，可增強(qiáng)養(yǎng)殖魚的免疫應(yīng)答和抗病性[32]。

宋春雨等[33-34]提取的苦地膽內(nèi)酯在體外抑菌試驗中具有顯著抑菌效果，當(dāng)按一定劑量加入飼料飼喂斑馬魚時，發(fā)現(xiàn)比例為0.8%、1.6%的劑量組，增強(qiáng)其抗嗜水氣單胞菌致病性胞外產(chǎn)物，且效果與0.1%的恩諾沙星相當(dāng)。王紅連等[35]測定了杜仲葉提取物綠原酸對嗜水氣單胞菌的體內(nèi)試驗，發(fā)現(xiàn)添加1%綠原酸飼喂鯽魚56 d后抗菌效果最佳，通過藥敏試驗發(fā)現(xiàn)其抑菌效果可與氟哌酸、土霉素比擬。陳霞等[36-37]以3種植物多糖對鯽魚做預(yù)防性試驗，發(fā)現(xiàn)3者均可降低接種魚病死率，提高白細(xì)胞殺菌指數(shù)，增強(qiáng)鯽魚免疫應(yīng)答和抗病性，效果以無花果多糖最強(qiáng)，板藍(lán)根多糖，五味子多糖次之。周群蘭等[38]在做大黃提取物時得到最低抑菌濃度為250 μL/I，預(yù)防性試驗中添加1%大黃提取物飼喂鯉魚56 d，攻毒7 d后，抗菌效果最佳，藥敏試驗中抑菌效果與氟哌酸，氯霉素相當(dāng)。將忍冬藤醇提取液作為飼料添加劑飼喂中華絨螯蟹30 d后，進(jìn)行細(xì)菌感染試驗，檢測發(fā)現(xiàn)溶菌酶及過氧化物酶活性等改變，試驗組存活率升高，推測忍冬藤醇提取物可通過調(diào)節(jié)非特異性免疫功能達(dá)到抑菌效果[39]。周亮等[40]發(fā)現(xiàn)大黃醇提物通過破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，影響特定蛋白表達(dá)從而達(dá)到很好的抑菌效果。謝麗玲等[41]采用大黃、甘草、金銀花的醇提取液，結(jié)合相關(guān)技術(shù)得到這3種醇提取液通過影響菌體內(nèi)4種蛋白質(zhì)的mRNA從而影響蛋白表達(dá)，達(dá)到抑菌效果。薛東芳[42]研究表明黃連生物堿和小蘗堿衍生物的抑菌機(jī)制是通過抑制細(xì)菌細(xì)胞生長和降低菌體毒性實現(xiàn)。

2.2 中藥復(fù)方在防治嗜水氣單胞菌相關(guān)疾病上的應(yīng)用

曹良等[43]從18種中藥中篩選9種對病原菌較為敏感的中藥組成4個復(fù)方，進(jìn)行體外抑菌試驗，得出由五倍子、金銀花、黃苓等組成的復(fù)方效果最佳。陳曉利等[44]從出血病黃鱔中分離嗜水氣單胞菌，并按中獸醫(yī)方劑配伍特點(diǎn)，將五倍子、連翹、黃苓、楊樹花、穿心蓮這5種抑菌效果較好的中藥組成4個復(fù)方，得出五倍子、穿心蓮、楊樹花組成的復(fù)方效果最佳。楊仕群等[45]發(fā)現(xiàn)以五倍子、黃連、黃苓為主藥的3組復(fù)方具有較好的抑菌效果。蘇振霞等[46]也在中藥復(fù)方篩選中得出以五倍子為主藥，分別與訶子、大黃按一定比例組成的復(fù)方效果均強(qiáng)于單味中藥的抑菌效果，以五倍子+訶子效果最佳。張文青等[47]使用正交試驗法研究中藥配伍，結(jié)果表明兒茶：五倍子：五味子：烏梅的配伍比例為4：2：4：1 和 1：2：2：4 時對嗜水氣單胞菌抑制和殺滅效果最好。通過藥物篩選和配伍，盧春霞[48]得到中藥復(fù)方比例為茶多酚：五倍子提取物：大黃提取物的配伍比例為5：2：1，且在添加2%時對異育銀鯽有較好的非特異性免疫，抗氧化提高作用以及保護(hù)能力。

彭金菊等[49-50]發(fā)現(xiàn)五倍子、訶子等與清熱涼血、解毒、燥濕藥聯(lián)用，抑菌效果普遍提高；當(dāng)以羅非魚為試驗材料時，花椒/五倍子的治療效果最佳，而黃苓/五倍子、訶子/五倍子的預(yù)防效果最佳。馬艷麗等[51]向Nisin為主的添加劑中加入中藥復(fù)合液，輔以檸檬酸為酸化劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該中藥復(fù)合液與Nisin在單獨(dú)作用時對嗜水氣單胞菌抑制效果不明顯，而在聯(lián)合使用時有效果，再加入檸檬酸效果最佳，且抑菌圈與Nisin濃度成正比。而在飼喂試驗中，該組合無毒性作用，且對鯽魚和蝦具備明顯促增質(zhì)量作用，同時提高蝦的免疫力和耐氧力，具有可觀經(jīng)濟(jì)價值。有研究者使用黃芪、當(dāng)歸、山楂、甘草和金銀花組成的中草藥混合物對尼羅羅非魚做飼喂試驗發(fā)現(xiàn)該混合物可提高魚類免疫力及抗嗜水氣單胞菌性[52]。

2.3 其他

盧靜等[53]發(fā)現(xiàn)沒食子酸和槲皮素對嗜水氣單胞菌有抑制效果，沒食子酸和槲皮素分別與氟苯尼考、沒食子酸與恩諾沙星均表現(xiàn)相加作用。這說明中西藥結(jié)合可以有效增強(qiáng)各單藥的抑菌作用效果，也可減小抗生素的使用，在臨床中不失為一種治療選擇[54-55]。用枯草芽孢桿菌發(fā)酵中藥制劑對鯉魚進(jìn)行預(yù)防試驗，結(jié)果表明發(fā)酵中藥制劑的最佳添加劑量為2%，并顯著提高鯉魚生長性能及抗嗜水氣單胞菌感染率[56]。多菌種混合復(fù)方中藥發(fā)酵制劑對鯽魚出血病也有較好的治療與預(yù)防效果[57]。有研究者使用3種中草藥與益生菌搭配飲食對金魚、鯽魚、鯉魚做治療試驗，發(fā)現(xiàn)中草藥搭配益生菌可以加速鯉魚、鯽魚潰瘍性皮炎的恢復(fù)[58]。

3 中藥防治嗜水氣單胞菌相關(guān)疾病面臨的問題

3.1 藥物方面

中藥的組成成分十分復(fù)雜，由提取處理所產(chǎn)生的差異會對結(jié)果產(chǎn)生較大影響。王紅連等[35]的研究結(jié)果證明杜仲葉提取物綠原酸具有顯著抑菌效果，但盧靜等人[53]試驗中綠原酸未觀察到抑菌作用，分析其原因，可能因為盧靜試驗中將中藥pH值調(diào)至中性的緣故。這也很好的證明了酸堿度對中藥藥效的影響。各試驗中相同中藥所產(chǎn)生的抑菌圈直徑相差較大，最小抑菌濃度也是如此，推測可能是中藥的處理不同所致。多數(shù)研究證明，不同生長時間的中藥藥效差異具統(tǒng)計學(xué)意義，所含的有效成分含量與其分布位置也不同[59-60]。依據(jù)“君臣佐使”的原則對不同中藥進(jìn)行配伍，各味中藥成分相互作用，配伍或提取方法不當(dāng)可能產(chǎn)生毒性。因此無論是單味藥還是聯(lián)合用藥，其抑菌的具體成分、作用方式、機(jī)理如何，仍需要今后做進(jìn)一步研究。中藥的使用劑量不會無限提高藥效，其具備雙向調(diào)節(jié)能力[61]，當(dāng)藥物應(yīng)用于動物體時，會受到外界復(fù)雜的環(huán)境影響，藥物有效成分被吸收利用的程度以及作用的最適濃度都需要通過大量試驗驗證。

3.2 水產(chǎn)養(yǎng)殖實踐方面

盡管體外試驗十分豐富，但與體內(nèi)環(huán)境相差大，分離得到的亞型不同會產(chǎn)生不同效果，所以最終仍要求回歸實際應(yīng)用。而將中草藥投入水產(chǎn)養(yǎng)殖后會出現(xiàn)一些問題，比如使用方法與最適劑量。臨床常見的藥物使用方法有浸泡法、潑灑法及作為飼料添加劑的口服法，前兩者中草藥的添加量難以精確控制，而其具體使用還需根據(jù)水產(chǎn)動物自身特點(diǎn)加以調(diào)整，保證產(chǎn)品藥效不變。后者對病情嚴(yán)重的魚類無法使用[62]。另外，中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中難以進(jìn)行藥效的評估，監(jiān)管機(jī)制也缺少有效的技術(shù)控制手段[63]。

為了能將中草藥商品化，盡早投入市場規(guī)?；褂?，今后不僅要加強(qiáng)對中草藥的機(jī)理研究，還應(yīng)當(dāng)重視其應(yīng)用中的使用與評估標(biāo)準(zhǔn)制定。

4 結(jié)語

嗜水氣單胞菌是一種條件致病菌，其危害性也隨環(huán)境惡化而日趨嚴(yán)重。中草藥對嗜水氣單胞菌的抑制研究眾多，結(jié)果也十分豐富，其主要抑制方式表現(xiàn)為直接抑殺，非特異性免疫的調(diào)節(jié)等。且多數(shù)研究結(jié)果均表明中藥復(fù)方效果要明顯好于單味中藥的效果，它們之間具備協(xié)同相加的效果，對嗜水氣單胞菌有著積極的預(yù)防和抑制效果，同時中藥與西藥聯(lián)合使用也有較好的療效，說明中藥完全可以減少甚至替代抗生素的使用。其中有些已投入魚塘使用，并取得較好效果。因此，中草藥在抑制嗜水氣單胞菌方面的前景可觀，廣泛且深入地開展中草藥抗水產(chǎn)細(xì)菌性疾病研究具有重要應(yīng)用價值。