白芨種苗離體繁育的液體培養(yǎng)基應(yīng)用

盧軍鋒 陳志琴 李 霞 余 樂 陳 嬌 欒 玲

（江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300）

1 白芨培育簡介

白芨是多年生草本植物，是蘭科白芨屬的一種。白芨生長高度為20～50cm，葉數(shù)為4～5 枚，白芨的基部互相套疊成莖狀，然后從中央抽出花葶。白芨花顏色是紫色或淡紅，花直徑約為5cm，總狀花序具數(shù)朵花，由3 枚萼片、2 枚花瓣和1 枚特化的唇瓣組成；唇瓣3 裂，上面有縱褶片；雄蕊與花柱合生而成合蕊柱，頂端有1 個花藥，前上方有1 個柱頭凹穴。白芨地下有粗厚的根狀莖，它的形狀像一個雞頭狀，具有很強的粘性，含有豐富的白芨膠質(zhì)。白芨可以當(dāng)藥用，有止血補肺、生肌止痛之效。白芨藥用功效十分優(yōu)良，市場上對白芨的需求和售價越來越高，導(dǎo)致野生白芨資源被過度采摘，已經(jīng)被國家列為重點保護野生植物。

白芨喜歡溫暖陰濕的環(huán)境，有一定的耐寒作用，耐陰性比較好，強光直射不利于白芨生長發(fā)育，在自然狀態(tài)下，成熟的白芨種子呈非常細(xì)小的粉末狀，白芨開花授粉15 周后種子有胚率較低，而且很少發(fā)育成苗。人工繁育白芨多采用分株方式，將白芨的塊莖切分成小塊進行種植，但這種方式繁殖系數(shù)比較低，對白芨的消耗量又比較大，難以滿足大面積種植白芨的需要。隨著生產(chǎn)技術(shù)的不斷進步，運用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可以在較短時間內(nèi)生產(chǎn)出大量的白芨幼苗，有效提高白芨的繁殖速度。目前主要將白芨種子放入添加有營養(yǎng)液的培養(yǎng)基里，添加的營養(yǎng)液正是白芨生長所需的養(yǎng)分，白芨種子可以迅速發(fā)育成苗。

2.未成熟白芨種子離體培養(yǎng)

2.1 對白芨種子做表面滅菌處理——萌發(fā)階段

選取開花授粉15 周后沒有開裂的白芨蒴果或種子，在超凈工作臺上用75%的乙醇在其表面進行30s 消毒處理，然后去離子水沖洗1～2 次，用刀片和鑷子剝開果實，將白芨種子放入無菌的培養(yǎng)皿中，再加入適宜的5%次氯酸鈉溶液進行消毒，消毒時間20min，接著用去離子水進行4～6 次連續(xù)沖洗，沖去種子表面殘存的消毒液，然后放入到MS＋1.0 mg/L、TDZ＋30 g/L 蔗糖、pH 數(shù)值為5.8 的營養(yǎng)液中，并將裝有種子的營養(yǎng)液放入25℃、100 r/min 黑暗環(huán)境中進行培養(yǎng)，一般在5d 種子就會萌發(fā)。在將容器放到光照環(huán)境下進行大概8～16h 培養(yǎng)，一般15d 后種子就能長出葉片。

2.2 種子生長成芽階段

將生長15d 已經(jīng)處于萌芽狀態(tài)的種子用50 目細(xì)胞篩進行過濾，然后將種子原球莖接種到培養(yǎng)基上，要盡量分散開幼苗，每個培養(yǎng)皿大概分100 粒，然后置于25℃、16h/8h 的光周期下進行培養(yǎng)。在經(jīng)過大約30d 后，當(dāng)白芨種子的幼苗長成高約2cm，根長約0.6cm 的幼苗時，即可進行生根培養(yǎng)操作。

2.3 生根培養(yǎng)和移栽階段

將平皿中的白芨幼苗接種到1/2 MS＋0.1mg/L、NAA ＋30 g/L蔗糖、以及＋2 g/L活性炭＋6 g/L 瓊脂、pH 值為5.8 的固體生根培養(yǎng)基上，每個瓶子大約種25～30 棵幼苗，放在適宜的溫度下生長。等到幼苗根長到約3～6cm 時可以進行移栽操作。在移栽開始前要先打開瓶蓋3～5d 進行煉苗處理工作，打開培養(yǎng)基的瓶蓋讓幼苗逐漸適應(yīng)外部環(huán)境，從而可以在移栽后更好地生長。另外，要注意移栽過程中保護原球莖，可以提高幼苗的成活率。

2.4 結(jié)果與分析

接種到培養(yǎng)基上的種子經(jīng)過20d 就開始萌動，顏色由原來的黃褐色逐漸變成綠色，然后會長出帶淺綠色芽點的小球狀體，也就是原球莖。40d 就能看到培養(yǎng)基上會出現(xiàn)翠綠色的白芨幼芽。另外，在白芨的液體培養(yǎng)基中要注意營養(yǎng)液的合理配比，不同的營養(yǎng)液會對植物的生長產(chǎn)生影響。比如研究表明，在培養(yǎng)基中加入15mg/L 抗壞血酸能夠有效遏制褐化現(xiàn)象，而且可以促愈傷組織的增殖，從而有利于分化生芽，促進幼苗生長。另外，光照和溫度也是影響植物生長的因素，所以，在白芨培育過程中，要為幼苗的生長制造合適的生長環(huán)境，才能培養(yǎng)出更多的健壯幼苗。

3 近成熟白芨種子離體培養(yǎng)

3.1 種子表面滅菌及萌發(fā)

將開花后20 周接近成熟的白芨果實用紗布包好，先用水對其進行沖洗，接著在超凈工作臺上用乙醇對其表面做消毒處理，用無菌水沖洗約1～2 次，用刀片小心剝開果實，然后放入調(diào)制好的培養(yǎng)液中，置于黑暗適宜的溫度下培養(yǎng)15d。然后用細(xì)胞篩濾去液體，將白芨種子原球莖做接種工作，分散到培養(yǎng)皿中，放置在25 ℃、16 h/8 h 光周期環(huán)境里培養(yǎng)30d等其長成幼苗。

3.2 生根培養(yǎng)和種苗移栽階段

將生成的幼苗接種到調(diào)配好的培養(yǎng)基里，每個瓶子裝約30 棵，然后進行培養(yǎng)。等到白芨幼苗根長到約3～5cm 時可以進行煉苗。在移栽工作開始前，同樣要揭開瓶蓋讓幼苗先適應(yīng)外界環(huán)境，移栽時可以用自來水洗凈白芨幼苗根部粘附的瓊脂，注意不要損傷幼苗的原球莖。然后將生長比較健壯的白芨幼苗移栽到育苗穴盤中，還要澆水幼苗，保持幼苗生長需要的濕度，在煉苗棚中進行培養(yǎng)。并在移栽后第1 周盡量加蓋遮陽網(wǎng)以避免陽光直射，并覆蓋保濕膜進行保濕。移栽后約15d 白芨苗就可以正常生長。移栽30d 后可以進行定植作業(yè)，然后進行常規(guī)管理即可。

4 結(jié)果分析

白芨種苗離體繁育的液體培養(yǎng)基應(yīng)用，能夠有效提高種子的發(fā)芽率，而且可以提高原球莖的生長速度。一般采用營養(yǎng)基培育種子幼苗出芽率能夠達(dá)到99%，而且幼苗生長整齊一致，還能夠降低污染率，是一種切實可行的育苗技術(shù)。選用液體培養(yǎng)基進行培育白芨幼苗，能夠有效降低培育成本，提高出苗率，大大縮短白芨培育時間，而且培育工作做得比較好，在75～90d 得到大量長勢良好的無菌幼苗可以用于移栽，讓白芨培育更加高效迅速，有利于實現(xiàn)規(guī)?；纳a(chǎn)。

5 結(jié)語

基于液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的白芨種苗離體繁育技術(shù)，通過配置適合幼苗生長的營養(yǎng)液，滿足幼苗生長所需的營養(yǎng)，能夠有效節(jié)省培育成本，在短時間內(nèi)培育出大量的無菌生長良好的幼苗，從而能夠有效提高白芨的種植面積，提高白芨產(chǎn)量，更好地服務(wù)于人類生產(chǎn)生活。