雙黃連對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

王莉莉 胡凱

（1，安徽省阜陽(yáng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所236000；2，滁州華農(nóng)畜牧有限公司239000）

內(nèi)毒素主要化學(xué)成分為脂多糖，進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體內(nèi)可引起發(fā)熱[1]、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克等，導(dǎo)致心肌損害、肝衰竭等器官功能障礙，臨床常見(jiàn)的革蘭氏陰性菌所致的疾病都與內(nèi)毒素密切相關(guān)，對(duì)于嚴(yán)重感染性疾病，抗菌藥能殺滅細(xì)菌，但不能拮抗細(xì)菌溶解后產(chǎn)生的內(nèi)毒素，細(xì)菌殺滅越多產(chǎn)生的內(nèi)毒素也越多[2]，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的損傷也越大。雙黃連具有廣譜抗菌、抗病毒感染作用及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用[3]，具有重要的研究與應(yīng)用價(jià)值。

本試驗(yàn)使用內(nèi)毒素復(fù)制內(nèi)毒性小鼠損傷模型，探討雙黃連對(duì)內(nèi)毒素性小鼠肝臟器官的保護(hù)作用及其機(jī)制，旨在為臨床應(yīng)用雙黃連預(yù)防和治療內(nèi)毒素性損傷提供理論依據(jù)，以指導(dǎo)細(xì)菌性疾病的治療，為雙黃連在臨床治療上提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)試劑與器材

內(nèi)毒素制備方法如下：將大腸桿菌在恒溫箱里培養(yǎng)24h后，所得菌落用生理鹽水洗滌到錐形瓶中，反復(fù)凍融4次，浸95℃水浴鍋中1h，14000r/min離心10min，取出上清液，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

雙黃連口服液：河南福泰藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)Z41022325；實(shí)驗(yàn)鼠顆粒飼料(碭山龍泉牌，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T14924.9.2001)；光學(xué)顯微鏡（Motic-BA-210）；萊卡轉(zhuǎn)輪切片機(jī)（LEICA-RM-2128）；顯微攝影裝置（OLYMPUS-CH30）等。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

50日齡健康SD小鼠（購(gòu)于南京江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)，平均體重18～22g）50只。隨機(jī)分成3個(gè)試驗(yàn)組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、一個(gè)空白對(duì)照組及一個(gè)試驗(yàn)對(duì)照組；每天添加2次實(shí)驗(yàn)鼠顆粒飼料，更換一次飲水；2d更換一次墊料，試驗(yàn)場(chǎng)地每周消毒一次；定期稱(chēng)重，觀察采食、生長(zhǎng)發(fā)育情況。飼養(yǎng)場(chǎng)地為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)場(chǎng)地及器械均嚴(yán)格消毒。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

50只健康的SD小鼠隨機(jī)分成5個(gè)組，每組10只（雌雄比例為1∶1），空白對(duì)照組和試驗(yàn)對(duì)照組都供給清潔飲水，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在飲水中分別添加1、4、16ml/L的雙黃連口服液），試驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水，35d后實(shí)驗(yàn)組和試驗(yàn)對(duì)照組進(jìn)行腹腔注射內(nèi)毒素（0.5ml/只）；空白對(duì)照組注入等量的生理鹽水，染毒結(jié)束后禁食10h。12h后用5%氯丙嗪麻醉后進(jìn)行解剖心臟采血致死，取肝臟樣品，用10%的甲醛溶液常溫固定，乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，HE染色，制作石蠟組織切片，在顯微鏡下觀察組織的病理變化并攝影。

2 結(jié)果

空白對(duì)照組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，無(wú)細(xì)胞水腫及胞漿疏松現(xiàn)象，肝索排列整齊，肝竇正常，無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)結(jié)締組織增生。

試驗(yàn)對(duì)照組肝索排列異常，肝小葉內(nèi)血管明顯擴(kuò)張充血，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域肝細(xì)胞腫脹明顯，胞漿疏松，淡染，脂肪變性，肝細(xì)胞部分脫落，在受侵害程度更加嚴(yán)重的部位小葉內(nèi)肝竇擴(kuò)張充血。

試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組肝臟組織病變較輕微，可見(jiàn)少量的細(xì)胞變性，肝索排列較整齊，肝竇和中央靜脈未見(jiàn)明顯擴(kuò)張，在門(mén)管區(qū)仍可見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

試驗(yàn)Ⅲ組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹，體積變大，變性壞死崩解，結(jié)締組織增生，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，還伴有出血現(xiàn)象。

3 討論

正常肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。內(nèi)毒素侵入肝臟組織引起血管通透性升高，從而使肝小葉內(nèi)血管擴(kuò)張充血炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有的肝細(xì)胞可能由于內(nèi)毒素的侵害作用導(dǎo)致細(xì)胞破裂[4]，同時(shí)造成大量炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子的合成及釋放，從而導(dǎo)致并加劇內(nèi)毒素所致的肝損傷[6]，所以，試驗(yàn)對(duì)照組肝臟組織病變明顯，而試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組肝臟組織病變明顯減輕，表明雙黃連對(duì)內(nèi)毒素性肝損傷的組織結(jié)構(gòu)起到了很好的保護(hù)作用。雙黃連改善肝組織微循環(huán)和血液流變性作用，閻田玉等[5]通過(guò)試驗(yàn)證實(shí)了這點(diǎn)，而試驗(yàn)Ⅲ組肝臟組織損傷比Ⅰ、Ⅱ組嚴(yán)重，說(shuō)明長(zhǎng)期灌服高劑量的雙黃連對(duì)小鼠產(chǎn)生了毒副作用。

綜上所述，雙黃連口服液在體內(nèi)能抑制內(nèi)毒素的毒性反應(yīng)，對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠肝臟的組織結(jié)構(gòu)具有明顯的保護(hù)作用，其中4ml/L的雙黃連口服液對(duì)肝臟的結(jié)構(gòu)保護(hù)作用較好；而長(zhǎng)期服用大劑量的雙黃連口服液對(duì)機(jī)體會(huì)造成毒性反應(yīng)。