牦牛和藏羊免疫特性的研究

吳艷清

（青海省同仁縣畜牧獸醫(yī)工作站，青海 同仁 811399）

1 材料和方法

1.1 材料

牦牛和藏羊研究：所使用的牦牛和藏羊各100頭，其中牦牛的年齡在5～10歲之間，藏羊的年齡在3～5年之間。所有牦牛和藏羊均來自青海。實(shí)驗(yàn)所選用的牛羊不需要雌雄限制，通過臨床觀測(cè)其身體健康狀況，從靜脈采集血液、肝素抗凝。

試劑：研究采用補(bǔ)體致敏酵母菌以及酵母菌多糖等試劑。

1.2 研究方法

1.2.1 紅細(xì)胞C3b受體、紅細(xì)胞免疫復(fù)合物(IC)的測(cè)定 本次研究采用的紅細(xì)胞不需要使用Ficoll分離液進(jìn)行分離，可以直接使用生理鹽水對(duì)其進(jìn)行離心洗滌，丟棄血液中的大部分紅細(xì)胞。血液剩余的成分按照1.25×107個(gè)/毫升進(jìn)行配置，其中添加酵母菌的量與紅細(xì)胞的比例為10∶1。

1.2.2 B淋巴細(xì)胞C3b受體的測(cè)定 將淋巴細(xì)胞懸濁液鍵入到一支小試管中，然后添加補(bǔ)體致敏酵母菌懸液，兩者的量均為0.075毫升。將試管置于37℃的恒溫水浴中進(jìn)行孵育，時(shí)間為30分鐘，然后向其中加入0.25%戊二醛生理鹽水2滴，進(jìn)行涂片，鏡檢200個(gè)淋巴細(xì)胞，對(duì)其中聯(lián)結(jié)3個(gè)以上酵母菌的淋巴細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行記錄，從而計(jì)算花環(huán)百分率。

1.2.3 T淋巴細(xì)胞E—玫瑰花環(huán)的測(cè)定

2 結(jié)果

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示，100頭牦牛的紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率平均數(shù)為2.65±1.91，變異系數(shù)為72；紅細(xì)胞IC花環(huán)率為4.51±2.75，變異系數(shù)為61；B細(xì)胞C3b受體花環(huán)率為23.24±5.81，變異系數(shù)為25；T-細(xì)胞E-玫瑰花環(huán)率平均數(shù)為7.15±3.62，變異系數(shù)為42。藏羊的指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果為紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率平均數(shù)為2.10±1.09，變異系數(shù)為52；紅細(xì)胞IC花環(huán)率為4.51±2.75，變異系數(shù)為64；B細(xì)胞C3b受體花環(huán)率為23.24±5.81，變異系數(shù)為21；T-細(xì)胞E-玫瑰花環(huán)率平均數(shù)為7.15±3.62，變異系數(shù)為31。

3 結(jié)果討論

近年來隨著對(duì)動(dòng)物紅細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物體內(nèi)存在紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)，血液中的紅細(xì)胞能夠清除循環(huán)免疫復(fù)合物，起到促進(jìn)吞噬的作用，紅細(xì)胞還具有識(shí)別和儲(chǔ)存抗原、提呈抗原、增強(qiáng)T細(xì)胞功能的作用，參與激活動(dòng)物體內(nèi)補(bǔ)體系統(tǒng)。C3b受體是血液紅細(xì)胞免疫功能的前提基礎(chǔ)，其位于紅細(xì)胞膜表面，對(duì)于紅細(xì)胞C3b受體的研究在人類醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中較為常見，針對(duì)牦牛和藏羊紅細(xì)胞是否具有C3b受體及免疫黏附功能的研究報(bào)告非常少。通過本文對(duì)牦牛和藏羊紅細(xì)胞的研究結(jié)果分析，可以開出牦牛和藏羊體內(nèi)的紅細(xì)胞與人體紅細(xì)胞相同，都具有C3b受體，同時(shí)也都擁有黏附免疫復(fù)合物的能力。因此說明了牦牛和藏羊的紅細(xì)胞也包含免疫功能。根據(jù)國(guó)外的研究結(jié)果證明，血液的紅細(xì)胞能夠?qū)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生γ下干擾素等淋巴因子，對(duì)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生Smlg，另外紅細(xì)胞對(duì)于NK、LAK的活性以及在T淋巴細(xì)胞免疫黏附時(shí)，具有調(diào)控腫瘤細(xì)胞能力作用。對(duì)于牦牛和藏羊紅細(xì)胞是否對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)具有重要作用，還需要進(jìn)一步研究。

通過對(duì)牦牛和藏羊血液紅細(xì)胞進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞具有與C3b受體補(bǔ)體致敏酵母菌相結(jié)合的能力，結(jié)合后形成花環(huán)。牦牛和藏羊紅細(xì)胞相對(duì)于與人類血液紅細(xì)胞而言，其形成花環(huán)的百分率較低。形成這種問題的主要因素可能為牦牛和藏羊血清中存在抑制因子，抑制因子具有阻礙C3b受體活性的作用，而人類的血清中含有這種物質(zhì)，所以人類血液紅細(xì)胞C3b受體不會(huì)受到抑制。比如在奶牛血清中，含有免疫膠固素，這種物質(zhì)具有引發(fā)紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集的作用，從而影響C3b受體的活性，阻礙了紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)的形成。但是影響牦牛和藏羊紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)形成的因素目前還不能確定，是否血清中存在抑制因子或者抑制因子是否為免疫膠固素，還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。另外，從牦牛和藏羊的生長(zhǎng)環(huán)境來考慮，由于牦牛和藏羊長(zhǎng)期生長(zhǎng)在高原環(huán)境中，具有比較特殊的種群屬性，所以牦牛和藏羊紅細(xì)胞C3b受體數(shù)量可能會(huì)減少，同時(shí)其活性也相對(duì)降低，因此而導(dǎo)致了牦牛和藏羊紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)百分率較低。

4 研究結(jié)論

本文研究了牦牛和藏羊免疫特性，對(duì)血液T淋巴細(xì)胞E一玫瑰花環(huán)進(jìn)行了測(cè)定，根據(jù)結(jié)果顯示，牦牛和藏羊的花環(huán)百分率均低于其他平原地區(qū)的牛羊品種。造成這種問題的主要原因可能是牦牛和藏羊生活在高原地區(qū)，由于氣候環(huán)境的差異，導(dǎo)致紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)的形成率低。血液B淋巴細(xì)胞的補(bǔ)體受體具有激發(fā)B淋巴細(xì)胞合成RNA的作用，同時(shí)能夠加快B淋巴細(xì)胞的代謝作用，增強(qiáng)釋放接枝，從而參與產(chǎn)生抗體，形成免疫記憶。對(duì)于B淋巴細(xì)胞補(bǔ)體受體的檢測(cè)意義非常重要，因?yàn)槠渲苯佑绊懥藙?dòng)物的免疫功能。本文的采用了酵母菌進(jìn)行研究，對(duì)傳統(tǒng)的研究方法進(jìn)行了改進(jìn)，酵母菌相對(duì)于特異性抗體致敏的紅細(xì)胞補(bǔ)體(EAC)而言，不需要制備抗RBC IgM型抗體的過程，縮短了步驟，同時(shí)酵母素的使用也取得了較為理想的研究。因此該方法的研究穩(wěn)定性較好，同時(shí)具有簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)。