中藥飲片有效期的研究現(xiàn)狀及研究方法Δ

沈芳雪，謝瑞芳，周 昕

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院藥劑科，上海 200032)

中藥在中醫(yī)理論指導(dǎo)下用于預(yù)防、診斷和治療疾病或調(diào)節(jié)人體機(jī)能，在現(xiàn)代臨床治療上發(fā)揮著重要作用。目前，中藥材的有效期尚無明確的標(biāo)準(zhǔn)。中藥受溫度、濕度、日光、空氣、霉菌、害蟲及包裝容器等儲(chǔ)存條件和環(huán)境因素的影響，容易產(chǎn)生腐敗、潮解、蟲蛀、變色、泛油、氣味散失、風(fēng)化及霉變等一系列問題，導(dǎo)致質(zhì)量不穩(wěn)定，會(huì)在一定程度上影響其臨床療效[1]。國內(nèi)對(duì)中藥材及其飲片有效期的研究不是很多，因此，本文對(duì)中藥飲片有效期的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了概括，對(duì)中藥飲片有效期研究采用的常用方法進(jìn)行了綜述，以期為后期的中藥飲片有效期研究工作奠定基礎(chǔ)，從根本上保證藥品的質(zhì)量和用藥安全。

1 中藥飲片有效期研究現(xiàn)狀

中藥飲片按藥物來源可分為植物類、動(dòng)物類和礦物類等類別。植物藥根據(jù)科屬來源多樣、生長年限長短不一、采收季節(jié)不同、不同的入藥部位及其本身的特點(diǎn)，儲(chǔ)存條件不一致，有效期也不盡相同。根據(jù)所采用藥物部位的不同，對(duì)已有研究中的中藥飲片有效期進(jìn)行了以下整理。

1.1 根及根莖類

大黃：易變色，不耐儲(chǔ)存，在儲(chǔ)存過程中，其主要化學(xué)成分蒽酚或蒽酮可逐漸氧化為蒽醌；研究采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)和高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測(cè)定大黃中大黃酚、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚及蘆薈大黃素等成分的含量，結(jié)果表明，上述成分含量變化符合一級(jí)反應(yīng)規(guī)律，在20 ℃條件下，大黃的有效期為687 d[2]。

制川烏：購于四川省綿陽市，高溫不利于制川烏的穩(wěn)定；研究采用HPLC法測(cè)定苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿等成分含量，并進(jìn)行初均速溫度加速試驗(yàn)，儲(chǔ)藏溫度為室溫，結(jié)果表明，制川烏保存穩(wěn)定時(shí)間為0.69年，實(shí)際有效期尚待室溫留樣觀察證實(shí)[3]。

丹參：丹參中有效成分丹參酮ⅡA的分解受溫度影響；研究采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)和HPLC含量測(cè)定方法，指標(biāo)成分為丹參酮ⅡA，保存條件為25 ℃，結(jié)果顯示，預(yù)測(cè)丹參有效期為26年[4]。

當(dāng)歸：當(dāng)歸素有“婦科圣藥”之稱；研究中的當(dāng)歸來源于甘肅省岷縣，采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)和HPLC含量測(cè)定方法，指標(biāo)成分為阿魏酸、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和3-丁烯基苯酞等，保存條件為25 ℃，結(jié)果顯示，預(yù)測(cè)當(dāng)歸保存時(shí)間為13 d[5]。

三七粉：采用外觀顏色量化分析，近紅外光譜技術(shù)進(jìn)行定性鑒別，恒溫加速度法對(duì)三七粉水分含量、皂苷類成分進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，室溫條件下，三七粉在6個(gè)月內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定[6]。

1.2 花類

丁香：丁香易走油、變色或氣味易散失，不耐貯存；研究以丁香酚等揮發(fā)油類、黃酮類化合物等為指標(biāo)成分，采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)、留樣觀察試驗(yàn)和HPLC含量測(cè)定法，結(jié)果表明，20 ℃的保存條件下，丁香保存時(shí)間為900 d[7]。

金銀花：金銀花有“中藥之中的青霉素”之稱；研究中的金銀花產(chǎn)于河南省封丘金銀花種植基地，采用初均速法和HPLC測(cè)定各溫度下金銀花中綠原酸、揮發(fā)油含量，結(jié)果表明，在25 ℃的保存條件下，金銀花可以保存1.29年[8]。

杭白菊、貢菊：杭白菊、貢菊中含有揮發(fā)油，有清肝明目之功效；研究中的杭白菊、貢菊購自河南省開封市樂仁堂藥店總店，采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)和HPLC法測(cè)定綠原酸、木犀草苷和3，5-O-雙咖啡?；鼘幩岬?種成分的含量，結(jié)果表明，在25 ℃的保存條件下，杭白菊的貯存期為2.25年，貢菊的貯存期為4.31年[9]。

紅花：紅花中含黃酮類化合物、脂肪酸類化合物、酚酸類化合物和揮發(fā)油類化合物等活性成分；研究中的紅花購自河南省開封市樂仁堂藥店，采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)和HPLC法測(cè)定紅花中羥基紅花黃色素A含量，結(jié)果表明，在20 ℃的保存條件下，紅花可以保存1.20年[10]。

1.3 全草類

薄荷：薄荷在貯存中，其揮發(fā)油含量會(huì)不斷降低；研究中的薄荷采集于河南大學(xué)藥學(xué)院藥用植物園，采用初勻速溫度加速試驗(yàn)，測(cè)定胡薄荷酮、異薄荷酮等揮發(fā)油含量，結(jié)果顯示，預(yù)測(cè)薄荷在20 ℃條件下可以保存2.88年，在陰涼條件下可以保存5.49年，在25 ℃條件下可以保存134 d[11]。

荊芥：荊芥的主要成分為揮發(fā)油，在貯藏的過程中，很容易發(fā)生氣味散失；研究中的荊芥來自河南大學(xué)藥學(xué)院藥用植物園，采用經(jīng)典恒溫試驗(yàn)和留樣觀察試驗(yàn)，以揮發(fā)油、胡薄荷酮為指標(biāo)成分，結(jié)果顯示，預(yù)測(cè)在10～20 ℃的條件下，以揮發(fā)油含量為指標(biāo)，荊芥可保存約2年，以胡薄荷酮為指標(biāo)成分，荊芥可保存190 d[12]。

1.4 果實(shí)、種子類

郁李仁：郁李仁易走油；研究采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)和留樣觀察試驗(yàn)，用硝酸銀滴定法測(cè)定郁李仁中苦杏仁苷含量，結(jié)果顯示，預(yù)測(cè)在20 ℃條件下，郁李仁可保存1 832 d[13]。

補(bǔ)骨脂：高溫不利于補(bǔ)骨脂的穩(wěn)定；研究中的補(bǔ)骨脂產(chǎn)地為重慶市合川區(qū)，采用初均速溫度加速試驗(yàn)和HPLC法測(cè)定補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的總含量，結(jié)果顯示，預(yù)測(cè)在室溫(25 ℃)下，補(bǔ)骨脂可保存0.53年，但實(shí)際有效期尚待室溫留樣觀察證實(shí)[14]。

苦杏仁：苦杏仁易走油，重者容易產(chǎn)生有毒成分；研究采用HPLC法檢測(cè)苦杏仁苷、脂肪油含量及酸敗度，聯(lián)合電子鼻技術(shù)建立最佳參數(shù)，結(jié)果顯示，建議苦杏仁苷低溫密閉保存，保質(zhì)期以1年以內(nèi)、存放時(shí)間越短越好[15]。

山茱萸：研究采用初均速溫度加速試驗(yàn)和HPLC法測(cè)定山茱萸中馬錢苷、莫諾苷的含量，結(jié)果顯示，初步預(yù)測(cè)山茱萸飲片有效期為2年[16]。

2 中藥飲片有效期研究方法

中藥飲片有效期的判別方法包括傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)和現(xiàn)代方法。傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)僅憑感官和經(jīng)驗(yàn)判斷中藥飲片的有效期，誤差很大，不具有一定的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。近年來，對(duì)中藥飲片有效期的研究較多依靠中藥飲片所含化學(xué)成分的穩(wěn)定性研究方法，測(cè)定中藥飲片不同存放期的成分含量，從而進(jìn)行藥物藥效的評(píng)價(jià)；通過穩(wěn)定性試驗(yàn)的考察，檢測(cè)和確定藥物主要成分含量變化的時(shí)間和速度，以此預(yù)測(cè)中藥飲片的有效期。

2.1 傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)

中藥飲片在發(fā)展和積累的過程中，種類和來源不斷增加，且每種藥材都有其特殊的性質(zhì)和功能，眾多中醫(yī)藥研究者已總結(jié)出大量經(jīng)驗(yàn)鑒別方法[17]。植物類藥、動(dòng)物類藥中所含化學(xué)成分的穩(wěn)態(tài)性較低，如苷類化合物容易被水解；揮發(fā)油類化合物揮發(fā)性高；皂苷類化合物、淀粉類化合物及黏液質(zhì)類化合物等在受潮情況下會(huì)出現(xiàn)霉變現(xiàn)象；油脂類化合物長時(shí)間處于光照環(huán)境、空氣環(huán)境與水中環(huán)境會(huì)很快出現(xiàn)氧化與酸化問題，由此會(huì)出現(xiàn)異味；色素在受潮后會(huì)出現(xiàn)霉變與變色[3]。但傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)所判斷的有效期不準(zhǔn)確，不提倡將其作為日后制定中藥飲片有效期的研究方法。

2.2 恒溫法和留樣觀察法

藥物的穩(wěn)定性考察一般采用2種方法，即恒溫法和留樣觀察法。藥物有效期的預(yù)測(cè)廣泛采用恒溫加速試驗(yàn)法；留樣觀察法的有效期結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但耗時(shí)太長。前文中的中藥飲片有效期研究都使用了上述2種方法。

2.2.1 恒溫法：包括加速試驗(yàn)法、經(jīng)典恒溫法。(1)加速試驗(yàn)法(簡(jiǎn)化的恒溫法)。常用的恒溫法有3類，即溫度指示法、初均速法和單測(cè)點(diǎn)法，能在短時(shí)間內(nèi)獲得需要的預(yù)測(cè)結(jié)果[10]。初均速法對(duì)藥品進(jìn)行儲(chǔ)存時(shí)間的預(yù)測(cè)分析，選擇藥物分解初始時(shí)期的均速V0對(duì)數(shù)形式，以此代替反應(yīng)速率常數(shù)k對(duì)數(shù)對(duì)開爾文溫度參量進(jìn)行倒數(shù)回歸，獲得滿足Arrhenius指數(shù)規(guī)律對(duì)應(yīng)的函數(shù)表達(dá)公式，預(yù)測(cè)公式為ln(C0-C)/t=-Ea/RT+lnA。初均速法操作簡(jiǎn)便，但會(huì)使試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性有所降低。每個(gè)加速穩(wěn)定性試驗(yàn)溫度下，在反應(yīng)初階段取樣分析1次即可，試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理的工作量將大幅度減少[18]。以上研究方式主要用于已知化學(xué)成分的制劑，其在西藥制劑有效期制定方面的應(yīng)用已經(jīng)較為普遍，化學(xué)成分單一的中藥制劑可參考此方法[19]。第2種方法是將藥物進(jìn)行加速試驗(yàn)后，利用藥理學(xué)方法，進(jìn)行反復(fù)的藥效檢驗(yàn)，將藥效即將散失時(shí)制劑中某一成分的含量作為一個(gè)下限值，然后利用加速試驗(yàn)法，以該成分的含量變化為指標(biāo)來預(yù)測(cè)藥物的有效期[19]。盡管選擇以上方法能夠檢測(cè)中藥飲片的有效期，但此類結(jié)果難以真實(shí)展現(xiàn)藥品實(shí)際的保質(zhì)期。所以，加速試驗(yàn)法只能作為簡(jiǎn)化的預(yù)測(cè)方法，最后還需室溫留樣觀察進(jìn)一步證實(shí)。(2)經(jīng)典恒溫法。經(jīng)典恒溫法的理論依據(jù)是Arrhenius指數(shù)定律，實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)完全需要根據(jù)檢測(cè)樣品的性質(zhì)及穩(wěn)定性預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，確定穩(wěn)定性指標(biāo)的測(cè)定方法，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)所需的溫度和取樣時(shí)間[20]。目前，Arrhenius模型仍是比較經(jīng)典且較準(zhǔn)確的藥品有效期預(yù)測(cè)模型之一，其原理是利用化學(xué)動(dòng)力學(xué)，量化環(huán)境因素對(duì)化學(xué)反應(yīng)的影響。建立不同溫度下有效期t與溫度T的擬合曲線，預(yù)測(cè)公式為lnt=Ea/2.303RT+A’，外加推理即可確定實(shí)際儲(chǔ)存條件下的藥品有效期[21]。經(jīng)典恒溫法的加速試驗(yàn)是使用條件夸大的貯存條件，來增加某藥物的化學(xué)降解或物理變化速率，在沒有獲得室溫或一般條件下的長期穩(wěn)定性結(jié)果前，對(duì)未來可能會(huì)發(fā)生的物理變化或化學(xué)變化予以一定的預(yù)測(cè)和評(píng)估，以保證臨床研究和試生產(chǎn)期間的藥品質(zhì)量，但結(jié)果并不能完全預(yù)測(cè)各種可能的變化。加速試驗(yàn)溫度通常有4～5個(gè)，其中每個(gè)溫度需進(jìn)行4個(gè)以上時(shí)間間隔的取樣測(cè)定。該方法結(jié)果較準(zhǔn)確，但需要較多的測(cè)定以及分析工作量[20]。

2.2.2 留樣觀察法：留樣觀察法是根據(jù)藥品實(shí)際貯存條件所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，目的是為制訂藥品有效期提供真實(shí)可靠的依據(jù)，以更準(zhǔn)確地獲取藥品的有效期[20]。一般是將樣品放置于室溫貯存條件下，定期記錄和考察有關(guān)的穩(wěn)定性指標(biāo)，每月或定時(shí)考察1次。通過與0月結(jié)果比較，以確定該產(chǎn)品的有效期。有些藥物的穩(wěn)定性監(jiān)控時(shí)間很長，所以可能結(jié)果較為分散，最后需要運(yùn)用統(tǒng)計(jì)分析以確定藥物的有效期。前期提到的加速法，其所測(cè)得的有效期結(jié)果可供暫定的參考，實(shí)際有效期還需要室溫留樣觀察進(jìn)一步證實(shí)。

2.2.3 HPLC法：中藥飲片有效期研究方法中，恒溫法、留樣觀察法都需結(jié)合HPLC法對(duì)中藥飲片中有效成分含量的測(cè)定，才能研究該藥有效成分含量的變化規(guī)律，對(duì)藥材有效成分總含量進(jìn)行測(cè)定，并考察總含量與時(shí)間的關(guān)系。采用HPLC法確定成分含量測(cè)定方法的同時(shí)要進(jìn)行方法學(xué)的考察，包括以下幾項(xiàng)：(1)線性關(guān)系的考察；(2)穩(wěn)定性試驗(yàn)；(3)精密度試驗(yàn)；(4)重復(fù)性試驗(yàn)；(5)加樣回收試驗(yàn)。所有的藥材都需要進(jìn)行HPLC法進(jìn)行成分含量測(cè)定或結(jié)合質(zhì)譜分析，以觀察隨著時(shí)間變化，藥物有效成分含量的變化情況。

2.3 電子鼻技術(shù)

目前，電子鼻技術(shù)已經(jīng)被應(yīng)用于室內(nèi)空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)、醫(yī)療保健、海關(guān)安檢、食品質(zhì)量控制和環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測(cè)等方面，在一系列食品、農(nóng)業(yè)、日化及公共安全等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用[22]。電子鼻是一種基于傳感器技術(shù)和計(jì)算機(jī)識(shí)別以及信號(hào)處理技術(shù)的人工嗅覺系統(tǒng)，是模擬生物鼻的工作原理且具有識(shí)別單一和復(fù)雜氣體能力的一種裝置。作為一種機(jī)器嗅覺系統(tǒng)，電子鼻由3個(gè)部分組成，即樣品處理系統(tǒng)、由具有部分特異性的氣體傳感器陣列組成的檢測(cè)系統(tǒng)和氣味數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，是可用于測(cè)量1種或1種以上氣味物質(zhì)的氣體敏感系統(tǒng)[23]。對(duì)比以往傳統(tǒng)氣味研究技術(shù)，電子鼻技術(shù)能更全面、完整地反映中藥飲片的“整體氣味特征”，同時(shí)具有快捷、靈敏、準(zhǔn)確和無損的優(yōu)點(diǎn)。很多研究者希望將色彩測(cè)量裝置與電子鼻技術(shù)應(yīng)用于中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)領(lǐng)域，探討使中藥材及飲片顏色和氣味變化數(shù)字化、客觀化的可行性，為科學(xué)、有效和規(guī)范化地制定中藥材及飲片的貯存有效期評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)引入一種新的研究方法和思路[24]。另外，電子鼻技術(shù)在藥材粉末鑒別及優(yōu)劣預(yù)測(cè)、道地藥材研究和中成藥質(zhì)量控制等方面均存在廣闊的發(fā)展空間[25]。電子鼻技術(shù)可以彌補(bǔ)中藥材成分分離復(fù)雜、穩(wěn)定性差、市場(chǎng)供應(yīng)缺乏及價(jià)格昂貴等一些客觀條件，其具有以下優(yōu)勢(shì)：(1)不需要化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)；(2)無需制備和處理樣品；(3)不用任何有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，保留著中藥原有的性狀特征，且盡量不破壞中藥內(nèi)在成分之間的組合。電子鼻技術(shù)是一項(xiàng)有利于環(huán)境保護(hù)、有利于操作人員健康的綠色環(huán)保測(cè)量技術(shù)，是一套從中藥傳統(tǒng)性狀描述評(píng)價(jià)質(zhì)量角度出發(fā)、符合中醫(yī)藥特色的中藥貯存有效期評(píng)價(jià)方法[24]。2010年以來，基于使用電子鼻技術(shù)識(shí)別中藥真實(shí)性的出版物數(shù)量并不多，約50篇文章[26-27]，側(cè)重于4個(gè)方面，即中藥材科屬種識(shí)別、加工產(chǎn)品識(shí)別(如藥材炮制前與炮制后的識(shí)別)、區(qū)域識(shí)別和存儲(chǔ)時(shí)間識(shí)別。表明基于電子鼻技術(shù)在中藥材識(shí)別中的應(yīng)用已開始引起研究人員的關(guān)注。雖然電子鼻技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用前景，但其體積龐大，價(jià)格也昂貴，普遍用于中藥材及飲片有效期的檢測(cè)還是有一些困難的[22]。

3 討論

對(duì)于中藥飲片的有效期，中醫(yī)界曾有過提議，將容易揮發(fā)、變色的中藥飲片有效期制定為1年；將易生蟲及易霉變的花草類、菌類藥有效期制定為2年，時(shí)刻關(guān)注氣候及儲(chǔ)存條件，一旦發(fā)現(xiàn)霉變應(yīng)立即撤柜下架；將需特殊管理的藥材及礦物類等穩(wěn)定性較好的藥材的有效期制定為6年[28]。另外，《藥品管理法》采用國際慣例，明確規(guī)定藥品有效期最長不能超過5年。上述規(guī)定太過籠統(tǒng)，未來的目標(biāo)是如果將每味中藥飲片都系統(tǒng)地制定有效期，這對(duì)中藥的質(zhì)量也有一定的保證。

本文對(duì)中藥材不同用藥部位有效期的研究方法進(jìn)行匯總，列出了傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)法、恒溫法、留樣觀察法、HPLC法和電子鼻技術(shù)等，其中，恒溫法、留樣觀察法是比較常用且經(jīng)典的方法，現(xiàn)在仍用來預(yù)測(cè)中藥材的穩(wěn)定性及有效期，但或多或少有需要改進(jìn)的方面；電子鼻技術(shù)靈敏度高、準(zhǔn)確，非常適用于中藥有效期的鑒定，考慮到價(jià)格等因素，其普遍應(yīng)用較為困難，但隨著技術(shù)的發(fā)展，未來其推廣應(yīng)用還是很有可能的。希望以上研究可以為今后中藥材及飲片有效期的研究工作奠定基礎(chǔ)，提供新思路。

中藥飲片有效期的制定是一項(xiàng)非常艱巨的任務(wù)，需要借助更先進(jìn)的現(xiàn)代科技，在充分考慮中藥飲片特殊性的情況下，建立一套合理的中藥飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和有效期考察方法。同時(shí)，考慮到不同中藥材的加工不同等，盡量制定適宜的貯存方式，改善貯藏保管條件、優(yōu)化中藥飲片包裝也是對(duì)制定中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一種要求和挑戰(zhàn)。其次，應(yīng)更加關(guān)注和確保原材料的采收、儲(chǔ)存及運(yùn)輸；中藥飲片廠對(duì)中藥飲片的炮制、加工和儲(chǔ)存；銷售公司的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和管理；醫(yī)療機(jī)構(gòu)的儲(chǔ)存、處方和調(diào)配等。上述每個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可能影響中藥飲片的質(zhì)量，可導(dǎo)致中藥飲片質(zhì)量不穩(wěn)定。若實(shí)際管理不到位，即便標(biāo)注了有效期，也僅是標(biāo)簽上的形式而已，缺失了有效期的重要參考意義[29]。因此，需要在努力探尋中藥飲片有效期的前提下，加強(qiáng)生產(chǎn)鏈各流通環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制。

總之，制定中藥飲片的有效期，有利于確保中藥飲片在防病治病中的安全性和有效性，為中藥國際化的發(fā)展奠定根基。