熒光定量PCR法與酶聯(lián)免疫吸附法在乙型肝炎病毒檢測中的應(yīng)用價值體會

楊鳳琴，王耀榮，呂 如

（1.包頭市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 包頭 014040；2.包頭市腫瘤醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 包頭 014030）

乙肝病毒是我國重要的傳染性疾病，具有較高的發(fā)病率，是不容忽視的公共衛(wèi)生問題。若長期攜帶乙肝病毒，極易誘發(fā)肝硬化和肝衰竭等疾病，對患者生命健康帶來嚴重威脅。隨著抗病毒藥物的不斷推出，HBV變異株數(shù)量增加，使得血清學(xué)檢測更加困難，準確性和敏感性都受到影響[1]。近幾年，生物技術(shù)發(fā)展使得HBV檢測克服了傳統(tǒng)PCR技術(shù)的缺陷。本次研究對熒光定量PCR法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒的應(yīng)用價值進行研究，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月～2017年2月在獻血中發(fā)現(xiàn)的100例乙型肝炎病毒攜帶者作為研究對象，所有研究對象年齡18～56歲，其中有女32例，男68例。

1.2 方法

確保無菌條件下對獻血者血液進行采集，采集靜脈血5 mL，在溫度為4攝氏度的冰箱中放置2小時后將血清分離進行檢測。將S/CO超過15且HBsAg篩查為有反應(yīng)性的獻血者血漿挑出，運用ELISA檢測方法對血清標志物表面抗體和抗原、e抗體和e抗原、核心抗體進行檢測；使用熒光定量PCR法檢測乙型肝炎病毒的DNA。上述操作均按照說明書要求嚴格執(zhí)行，并按試劑說明書標準進行判定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

使用統(tǒng)計學(xué)軟件15.0對數(shù)據(jù)進行分析。用%表示不同方法測得的陽性率，用平均值表示拷貝數(shù)，數(shù)值用均數(shù)±標準差進行表示，對兩組間數(shù)據(jù)進行t檢驗，P＜0.05，表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 熒光定量PCR檢測乙型肝炎DNA和ELISA的檢查結(jié)果

在乙肝標志物為陽性的各組患者中均發(fā)現(xiàn)不同程度的病毒DNA復(fù)制。其中，HBsAg陽性血清有69例，其中HBV DNA呈陽性的有56例，所得到的陽性檢測率為81.2%；對67例HBV DNA陽性血清運用ELISA法進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有39例呈陽性，所得到的結(jié)果是熒光定量PCR的58.2%。本次研究大三陽的陽性率達到96%、乙肝病毒DNA拷貝數(shù)的平均值為3.12×108；小三陽的陽性率為86.6%，H乙肝病毒DNA拷貝數(shù)的平均值是5.88×105，除此之外的血清標志物陽性組合的陽性率比較低，HBV DNA拷貝數(shù)平均值也不高[2]。可見，大三陽的陽性率與HBV DNA含量是最高的，同其余各組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

HBeAg是反應(yīng)人們血液傳染性與否的重要指標，HBsAg是檢測乙肝攜帶者的主要指標。大三陽包括HBcAb、HBsAg和HBeAg （三項呈陽性），是對患者體內(nèi)乙肝病毒高傳染性和復(fù)制率的反映。本次研究顯示：大三陽的陽性率為96%、HBV DNA拷貝數(shù)平均值為3.13×108，這就說明熒光定量PCV法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝病毒復(fù)制方面具有較好的效果，能夠準確判斷出患者是否處于乙肝病毒感染時期（這一結(jié)果同胡慶宏等人的研究結(jié)果相一致）；小三陽的陽性率為86.6%，HBV DNA 拷貝數(shù)平均值為5.87×105，小三陽的乙肝病毒DNA含量低于大三陽組，HBeAb轉(zhuǎn)陽與HBeAg轉(zhuǎn)陰就代表小三陽患者處于恢復(fù)期，但是患者體內(nèi)仍有乙型肝炎病毒的DNA復(fù)制；HBeAg與HB-sAb的陽性率為51.0%，HBV DNA拷貝數(shù)平均值是2.31×104，除此之外的血清標志物陽性組合的陽性率比較低，HBV DNA拷貝數(shù)平均值也不高。可見，大三陽的陽性率與HBV DNA含量是最高的，同其余各組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，熒光定量PCR法檢測乙型肝炎病毒具有更高的可靠性和敏感度，能夠?qū)BV感染和復(fù)制狀態(tài)進行真實反映，對乙型肝炎早期診治、傳染性判斷，及預(yù)后監(jiān)測質(zhì)量具有重要意義。