三種含非淀粉多糖酶復(fù)合酶的體內(nèi)外消化試驗(yàn)評(píng)估及其對(duì)黃羽肉雞生產(chǎn)性能的影響

■ 羅平成 李秧發(fā) 周響艷，2 夏旻灝 左建軍 曹慶云 葉 慧 馮定遠(yuǎn)*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510642；2.東莞泛亞太生物科技有限公司，廣東東莞523808）

隨著畜牧行業(yè)的產(chǎn)業(yè)水平不斷提高，飼料酶制劑的開發(fā)應(yīng)用成為行業(yè)進(jìn)一步發(fā)展的動(dòng)力源泉。20世紀(jì)80年代的一系列研究表明，體外來源的酶制劑的添加并不會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)酶分泌及生理生化方面的負(fù)面影響，更能促進(jìn)動(dòng)物消化吸收。20世紀(jì)90年代后，由于相關(guān)技術(shù)以及應(yīng)用研究的迅猛發(fā)展，酶制劑在配合飼料中發(fā)揮的作用越來越大。

非淀粉多糖（NSP）是植物組織中除淀粉以外所有碳水化合物的總稱，可分為：纖維素、半纖維素、果膠三類。非淀粉多糖，例如木聚糖，不能被非反芻動(dòng)物自身的消化酶系統(tǒng)消化利用，其中有一些還具有抗?fàn)I養(yǎng)作用，例如：β-葡聚糖、甘露聚糖、阿拉伯木聚糖等。

非淀粉多糖酶可以將對(duì)應(yīng)的非淀粉多糖水解為小分子的低聚糖、寡糖或者單糖。一方面可以將其轉(zhuǎn)化成非反芻動(dòng)物能夠利用的單糖等營(yíng)養(yǎng)成分，另一方面可以水解破壞其結(jié)構(gòu)，削減其抗?fàn)I養(yǎng)作用，從而提高飼料效率。

本研究旨在探究三種復(fù)合非淀粉多糖酶的體內(nèi)外性能及其對(duì)黃羽肉雞生產(chǎn)性能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及儀器

本研究所用的三種含非淀粉多糖酶復(fù)合酶均來源于東莞泛亞太生物技術(shù)有限公司，復(fù)合酶1、復(fù)合酶2、復(fù)合酶3的組成比例見表1。

本研究所用飼料配方及營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)見表2和表3。

表1 試驗(yàn)用酶活力（U/g）

表2 飼料配方（%）

1.2 分組及試驗(yàn)動(dòng)物

體內(nèi)消化代謝試驗(yàn)分3次進(jìn)行，每次分別使用小雞(1～21日齡)、中雞(22～42日齡)、大雞(43～60日齡)階段日糧配方。每次試驗(yàn)選取快大型黃羽肉雞種公雞45只，隨機(jī)分為正、負(fù)對(duì)照組和分別添加三種復(fù)合酶制劑的3個(gè)試驗(yàn)組（以負(fù)對(duì)照日糧為基礎(chǔ)，分別添加復(fù)合酶1、復(fù)合酶2、復(fù)合酶3），共5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3只雞。

表3 營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)(%)

體外消化試驗(yàn)分3次進(jìn)行，每次分別使用小雞(1～21日齡)、中雞(22～42日齡)、大雞(43～60日齡)階段日糧配方。每次試驗(yàn)不同組選取日糧分別為：正對(duì)照日糧、負(fù)對(duì)照日糧、分別添加3種不同復(fù)合酶制劑日糧（以負(fù)對(duì)照日糧為基礎(chǔ)分別添加復(fù)合酶1、復(fù)合酶2、復(fù)合酶3），共計(jì)5組。

生產(chǎn)性能評(píng)估試驗(yàn)采用單因子隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用900只快大型黃羽肉雞（公母對(duì)半），集中育雛至11日齡后，隨機(jī)分為正對(duì)照組（使用正對(duì)照日糧）、負(fù)對(duì)照組（使用負(fù)對(duì)照日糧）以及分別添加3種復(fù)合酶制劑的3個(gè)試驗(yàn)組（以各階段負(fù)對(duì)照日糧為基礎(chǔ)，分別添加復(fù)合酶1、復(fù)合酶2、復(fù)合酶3），共計(jì)5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只雞，各重復(fù)初始體重統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)差異不顯著。試驗(yàn)期為60 d，分為試驗(yàn)前期（1～21日齡）、試驗(yàn)中期（22～42日齡）、試驗(yàn)后期（43～60日齡），每個(gè)階段使用對(duì)應(yīng)的基礎(chǔ)日糧配方。按照試驗(yàn)肉雞場(chǎng)的常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行免疫和管理。雞只自由采食和飲水。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

體外模擬嗉囊消化：準(zhǔn)確稱取5.000 0 g樣品于試管中。樣品粉碎且過60目篩。加入0.1 mol/l的HCl 10 ml，用HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH值至4.6，加入需要添加的酶。震蕩試管，使樣品充分混勻。樣品在試管中混勻后，把試管放入水浴鍋，41℃水浴21 min。

體外模擬胃消化：在上述步驟完成后，在試管中加入2.5 ml胃蛋白酶溶液（20 mg/ml，0.5 mol/l HCl配制），用HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH值至2.8，充分震蕩搖勻。試管放入水浴鍋，41℃水浴76 min。

體外模擬小腸消化：在上述步驟完成后，在試管中加入2.5 ml胰酶溶液（40 mg/ml，pH值6.2的醋酸鈉緩沖液配制）加入1 mol/l NaHCO3調(diào)節(jié)pH值6.2。把樣品轉(zhuǎn)入透析袋中，試管用10 ml醋酸鈉緩沖液沖洗，一并轉(zhuǎn)入透析袋中。用細(xì)繩扎緊透析袋，放入500 ml的錐形瓶中，錐形瓶瓶中裝入200 ml的緩沖液。把錐形瓶放入41℃水浴3 h，每小時(shí)更換一次透析液。更換的透析液用瓶子收集好。

體外消化后樣品處理：轉(zhuǎn)移透析袋中的樣品于離心管中，5 000 r/min離心20 min，去除上清液。殘?jiān)?05℃烘干、恒重用于粗蛋白質(zhì)和能量的測(cè)定。

體內(nèi)消化代謝試驗(yàn)：采用強(qiáng)飼-縫肛法進(jìn)行試驗(yàn)?？p肛后，預(yù)試期為5 d，飼喂常規(guī)飼料，預(yù)試期結(jié)束后的早上8∶00把料槽清理干凈，禁食48 h，自由飲水。禁食結(jié)束后，內(nèi)源對(duì)照組繼續(xù)禁食，其余組在早上8∶00，每組分別強(qiáng)飼對(duì)照日糧和試驗(yàn)日糧50 g。各組均自由飲水，在瓶蓋上擰上積糞瓶。次日8∶00收集一次糞便，采樣后第3 d再收集一次，用塑料瓶裝好，每100 g糞樣噴灑2 ml 10%鹽酸，每次搜集完成后于4℃冰箱保存樣品。完成搜集的糞便在105℃烘干至恒重。

概略養(yǎng)分分析指標(biāo)：飼料和糞樣的測(cè)定指標(biāo)有總能、粗蛋白質(zhì)和粗纖維消化率及其表觀消化率?？偰苡瞄L(zhǎng)沙儀器廠生產(chǎn)的WGR-1G微電腦煤質(zhì)測(cè)定處理儀測(cè)定；粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏微量定氮法(FOSS 2300 KJELTEC ANALYZER UNIT自動(dòng)定氮儀)測(cè)定；粗纖維含量采用濾袋法(Ankom 220型纖維分析儀)測(cè)定。

能量攝入量（MJ）=強(qiáng)飼料量（kg）×強(qiáng)飼料能值（MJ/kg）

能量排出量（MJ）=排泄物量（kg）×排泄物能值（MJ/kg）

能量代謝率（%）=（能量攝入量-能量排出量）/強(qiáng)飼料量×100

干物質(zhì)表觀消化率（%）=[強(qiáng)飼干物質(zhì)（kg）-糞便排泄干物質(zhì)量（kg）]/強(qiáng)飼干物質(zhì)（kg）×100

粗蛋白表觀代謝率（%）=（食入粗蛋白質(zhì)量-排泄物粗蛋質(zhì)白量）/食入粗蛋白質(zhì)量×100

粗纖維表觀利用率（%）=（食入粗纖維量-排泄物粗纖維量）/食入粗纖維量×100

干物質(zhì)體外消化率（%）=（飼料干物質(zhì)量-消化后殘?jiān)晌镔|(zhì)）/飼料干物質(zhì)量×100

能量體外消化率（%）=（飼料總能量-消化后殘?jiān)偰芰浚?飼料總能量×100

粗蛋白體外消化率（%）=（飼料粗蛋白質(zhì)量-消化后殘?jiān)值鞍踪|(zhì)量）/飼料粗蛋白質(zhì)量×100

體重及日增重：分別于1日齡、21日齡、42日齡、60日齡早晨8∶00空腹稱重，計(jì)算各生長(zhǎng)階段的日增重。

料重比：21日齡、42日齡、60日齡計(jì)算采食量，計(jì)算F/G。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

試驗(yàn)采用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，用SPSS11.5 For Windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，各指標(biāo)差異顯著性分析用one-way進(jìn)行分析，用LSD法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外消化試驗(yàn)結(jié)果分析

不同階段黃羽肉雞體外消化結(jié)果見表4、表5、表6。

表4 小雞階段不同酶配比對(duì)體外消化率的影響(%)

由表4可知，在小雞料體外消化試驗(yàn)中正、負(fù)對(duì)照組的干物質(zhì)消化率和能量消化率顯著低于試驗(yàn)組1、2（分別添加復(fù)合酶1和復(fù)合酶2，下同）（P＜0.05）,極顯著低于試驗(yàn)組3（添加復(fù)合酶3，下同）（P＜0.01），試驗(yàn)組3干物質(zhì)消化率和能量消化率顯著高于其他試驗(yàn)組（P＜0.05），其它各試驗(yàn)組間差異不顯著。試驗(yàn)組3的粗蛋白質(zhì)消化率也顯著高于正、負(fù)對(duì)照組和其它各試驗(yàn)組（P＜0.05）。

表5 中雞料階段不同酶配比對(duì)體外消化率的影響(%)

表6 大雞料階段不同酶配比對(duì)體外消化率的影響(%)

中雞料體外消化試驗(yàn)結(jié)果見表5。試驗(yàn)組2的干物質(zhì)消化率和負(fù)對(duì)照組差異不顯著，其它各試驗(yàn)組的干物質(zhì)消化率和正、負(fù)對(duì)照組相比均呈現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。各試驗(yàn)組的能量消化率顯著高于正、負(fù)對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)組3能量消化率最高，但各試驗(yàn)組間差異不顯著。試驗(yàn)組1粗蛋白質(zhì)消化率顯著高于其余各組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）。

大雞料體外消化試驗(yàn)結(jié)果見表6。試驗(yàn)組2、3的干物質(zhì)消化率顯著高于正、負(fù)對(duì)照組和試驗(yàn)組1（P＜0.05），其它各組間差異不顯著。各試驗(yàn)組和對(duì)照組間的能量和粗蛋白質(zhì)的消化率均差異不顯著。

2.2 體內(nèi)消化試驗(yàn)結(jié)果分析

不同階段雞料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)體內(nèi)消化結(jié)果見表7、表8、表9。

表7 小雞日糧體內(nèi)概略養(yǎng)分消化率(%)

由表7可知，對(duì)于小雞階段日糧，正、負(fù)對(duì)照組的干物質(zhì)表觀消化率和能量代謝率顯著低于試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3(P＜0.05)，但正對(duì)照組和試驗(yàn)組1差異不顯著，正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組的能量代謝率顯著低于試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3，各試驗(yàn)組間差異不顯著(P＞0.05)。各組間的粗蛋白質(zhì)表觀代謝率和粗纖維表觀利用率差異均不顯著(P＞0.05)。

表8 中雞日糧體內(nèi)概略養(yǎng)分消化率(%)

表9 大雞日糧體內(nèi)概略養(yǎng)分消化率(%)

由表8可知，對(duì)于中雞階段的日糧，正、負(fù)對(duì)照組的干物質(zhì)表觀消化率顯著低于試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3（P＜0.05），其它各試驗(yàn)組間差異不顯著，正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組的能量代謝率顯著低于試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3，試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。各組間的粗蛋白質(zhì)表觀代謝率和粗纖維表觀利用率差異均不顯著（P＞0.05）。

由表9可知，對(duì)于大雞階段的日糧，正、負(fù)對(duì)照組的干物質(zhì)表觀消化率和能量代謝率顯著低于試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組 3（P＜0.05），各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。各組間粗蛋白質(zhì)表觀代謝率和粗纖維表觀利用率差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 生產(chǎn)性能評(píng)估結(jié)果

各日齡段的生產(chǎn)性能試驗(yàn)結(jié)果見表10、表11、表12、表13。

表10 11～21日齡各組生產(chǎn)性能

表11 22～42日齡各組生產(chǎn)性能

表12 43～60日齡的生產(chǎn)性能

表13 1～60日齡的生產(chǎn)性能

由表10可知，各處理組在11日齡（即試驗(yàn)初始）體重基本一致，差異不顯著(P＞0.05)。21日齡的平均體重，負(fù)對(duì)照組最低，試驗(yàn)組相比于負(fù)對(duì)照組和正對(duì)照組都有所提高，但差異不顯著。11～21日齡階段，試驗(yàn)組2的平均體重比負(fù)對(duì)照組提高了3.83%，平均日采食量正對(duì)照組最低，試驗(yàn)組2最高，各組間差異不顯著(P＞0.05)，平均日增重各組間差異不顯著(P＞0.05)，其中試驗(yàn)組1、2、3分別比負(fù)對(duì)照組提高了3.33%、6.13%和3.63%。料重比以正對(duì)照組最低，負(fù)對(duì)照組最高，其中試驗(yàn)組1、2、3分別比負(fù)對(duì)照組降低了1.84%、3.23%和2.30%。

由表11可知，42日齡平均體重，試驗(yàn)組3最高，正對(duì)照組次之，負(fù)對(duì)照組最低，其中試驗(yàn)組1、2、3分別比負(fù)對(duì)照組提高了1.12%、1.12%和2.03%，但差異都不顯著（P＞0.05）。22～42日齡的平均日采食量，各組間差異都不顯著（P＞0.05），其中負(fù)對(duì)照組最高，正對(duì)照組最低。平均日增重各組間差異不顯著（P＞0.05），其中試驗(yàn)組3最高，負(fù)對(duì)照組最低。料重比各組間差異都不顯著（P＞0.05），其中負(fù)對(duì)照組最高，正對(duì)照組最低，各試驗(yàn)組比負(fù)對(duì)照組都有所降低，但差異不顯著。

從表12可知，60日齡的平均體重，正對(duì)照組最高，其次是試驗(yàn)組2，試驗(yàn)組3最低，但各組間差異都不顯著（P＞0.05）；43～60日齡的平均日采食量，負(fù)對(duì)照組最高，試驗(yàn)組3最低；平均日增重，正對(duì)照組最高，試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組3比負(fù)對(duì)照組稍有提高，但差異不顯著（P＞0.05）。

由表13可知，60日齡的平均體重試驗(yàn)組2最高，其次為正對(duì)照組，試驗(yàn)組3最低，但各組間差異都不顯著（P＞0.05）。1～60日齡平均日采食量負(fù)對(duì)照組最高，其次是試驗(yàn)組2，正對(duì)照組最低。料重比負(fù)對(duì)照組最高，正對(duì)照組最低，各試驗(yàn)組與負(fù)對(duì)照組正對(duì)照組差異都不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 復(fù)合酶對(duì)日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

國(guó)內(nèi)外許多研究都表明，復(fù)合酶能提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率。袁旭鵬（2008）試驗(yàn)結(jié)果表明∶①小麥型日糧中添加NSP酶制劑可提高干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和能量的表觀消化率，試驗(yàn)C組的效果最好；②添加NSP酶制劑提高了賴氨酸、蛋氨酸、組氨酸和總必需氨基酸的回腸表觀消化率，但對(duì)其它氨基酸的回腸表觀消化率的影響不明顯。Diebold等(2004)研究表明，小麥基礎(chǔ)日糧中添加木聚糖酶能極顯著提高日糧粗蛋白質(zhì)、總能和有機(jī)物質(zhì)的回腸表觀消化率。Hew等(1998)的試驗(yàn)中，木聚糖酶可以使肉雞小麥型飼糧中各種氨基酸的表觀消化率平均由70%提高到78%，使回腸氨基酸表觀消化率平均由78%提高到85%。王前光（2006）研究表明，酶制劑的添加有提高能量的回腸表觀消化率的趨勢(shì)(P=0.10)，歐蒂酶、木聚糖酶的添加能顯著提高粗蛋白質(zhì)的回腸表觀消化率(P＜0.05)，E1 組差異不顯著(P＞0.05)。Omogbenigun 等(2004)報(bào)道，小麥日糧中酶制劑的添加能夠極顯著改善斷奶仔豬日糧粗蛋白質(zhì)和能量的回腸表觀消化率(P＜0.01)。

Veldman等(1994)報(bào)道，木聚糖酶能提高小麥日糧AME、蛋白質(zhì)和淀粉消化率。胡忠澤(1999)在生長(zhǎng)豬的玉米-豆粕型日糧中添加含木聚糖酶、葡聚糖酶、纖維素酶為主的復(fù)合酶，可使日增重和飼料轉(zhuǎn)化率分別提高8.29%和8.89%，粗纖維、粗蛋白質(zhì)和干物質(zhì)的表觀消化率分別提高36.76%、17.23%和9.75%。

3.2 復(fù)合酶的最佳配合比例

復(fù)合酶對(duì)提高動(dòng)物生產(chǎn)性能、改善動(dòng)物日糧中養(yǎng)分的利用率已經(jīng)得到人們的廣泛認(rèn)同。但是復(fù)合酶中含有多種NSP酶還有外源性蛋白酶及淀粉酶。各種酶在復(fù)合酶的添加量達(dá)到一個(gè)什么比例最合適以及根據(jù)不同日糧選擇不同的復(fù)合酶制劑的研究還比較少。本試驗(yàn)研究了3種不同配比的復(fù)合酶，結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)合酶2在改善肉雞生產(chǎn)性能上要好于復(fù)合酶1和復(fù)合酶3。復(fù)合酶2的葡聚糖酶要遠(yuǎn)高于復(fù)合酶1和復(fù)合酶3。

3.3 復(fù)合酶在肉雞生產(chǎn)上的應(yīng)用效果

李成良等（2009）研究表明，在4～6周齡和全期時(shí)，非淀粉多糖酶和抗生物素有所提高采食量和日增重、降低料肉比的趨勢(shì)，但是都沒有達(dá)到顯著水平（P＞0.05），這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。Osei等（2000）在含小麥麩17%的肉雞日糧中添加0.1%和0.2%的復(fù)合酶制劑，42日齡體重較對(duì)照組分別提高了1.9%和5.8%。飼料消耗率降低了10%～15%。韓正康（2006）試驗(yàn)表明，在飼料大麥基礎(chǔ)日糧下添加適量的粗酶制劑可以不同程度的提高雄雛雞（7～21日齡）、肉仔雞（1～42日齡）、生長(zhǎng)鵝（7～60日齡）及肉鴨（1～42日齡）的增重和飼料利用率。王修啟等(2002)試驗(yàn)評(píng)定添加0.12%木聚糖酶對(duì)雞AME值和養(yǎng)分消化率的影響。結(jié)果顯示,木聚糖酶使雞的AME(干物質(zhì)基礎(chǔ))分別提高7.07%(P＜0.05)和 6.53%(P＜0.01);干物質(zhì)消化率分別提高7.10%(P＜0.05)和7.67%(P＜0.01)，有機(jī)物消化率分別提高6.07%(P＜0.05)和7.23%(P＜0.01)。

習(xí)海波等（2006）研究表明，添加適量復(fù)合酶制劑可改善肉雞低能量日糧的料肉比。本試驗(yàn)中，在低能量水平日糧中添加復(fù)合酶可不同程度提高黃羽肉雞在11～21日齡和22～42日齡的平均體重和平均采食量，其中與負(fù)對(duì)照組和正對(duì)照組相比，復(fù)合酶2組提高的程度較大，但差異不顯著（P＞0.05）；3個(gè)加酶組的料肉比比負(fù)對(duì)照組降低了約2%，和上述報(bào)告相一致。李永義等(2000)研究表明：添加復(fù)合酶能提高肉雞的增重，降低料肉比，提高經(jīng)濟(jì)效益。但日增重和料肉比都不顯著,和本次試驗(yàn)研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

①通過體外消化試驗(yàn)表明，添加復(fù)合酶組的干物質(zhì)表觀消化率、粗蛋白質(zhì)表觀代謝率和能量代謝率都有顯著的提高。

②在降低消化能的黃羽肉雞日糧中添加不同配比的復(fù)合酶制劑有提高黃羽肉雞平均日增重、料肉比的趨勢(shì)。添加復(fù)合酶2的試驗(yàn)組2表現(xiàn)最佳。