草莓病毒病及其組織培養(yǎng)研究

摘 要：通過無性繁殖草莓通常導(dǎo)致草莓品質(zhì)和產(chǎn)量下降，而利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育無病毒種苗是解決這一問題的關(guān)鍵所在。本文系統(tǒng)地介紹了草莓病毒病的發(fā)生和危害，外植體的選擇及其滅菌、培養(yǎng)條件、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根和移栽方面說明草莓離體快繁技術(shù)，以及草莓無病毒苗的鑒定方法和草莓無病毒苗的繁殖利用，旨為草莓離體快繁奠定一定的理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：草莓；病毒??；組織培養(yǎng)；病毒鑒定

中圖分類號(hào)：S436.68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-7344（2018）29-0263-01

草莓為薔薇科草莓屬多年生草本植物，是重要的漿果植物，栽培分布很廣，其總產(chǎn)量在漿果類中僅次于葡萄，居世界第二位。草莓的莖呈縮短狀，分地上和地下兩部分：地上縮短莖節(jié)間極短，節(jié)密集，其上密集輪生葉片，葉腋部位著生葉芽；地下縮短莖為多年生，是貯藏營養(yǎng)的器官，也可發(fā)育成不定根。

1 草莓病毒病的發(fā)生和危害

（1）草莓病毒病的發(fā)生。草莓病毒病由多種病毒單獨(dú)或復(fù)合侵染引起，毒源有草莓斑駁病毒等十多種，可以由蚜蟲、根結(jié)線蟲、無性分株繁殖等傳播。

（2）草莓病毒病危害。草莓病毒病為害面廣，是草莓生產(chǎn)上的一種重要病害，可侵染草莓的病毒有24種。

2 組織培養(yǎng)的程序

（1）外植體的選取與消毒滅菌。①外植體的選?。涸?～8月晴天的下午，于健壯無病蟲害的草莓剛抽出的匍匐莖上取長度為3～5cm的頂梢，去掉葉片，作為組織培養(yǎng)的外植體。用自來水流水沖洗2～4h，然后剝?nèi)ネ鈱尤~片，在無菌條件下用0.5%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，并不停地?cái)噭?dòng)促進(jìn)藥液的滲透。②外植體的消毒滅菌：在草莓組織培養(yǎng)中消毒滅菌劑的種類很多。為了使滅菌效果更好，常采用的是75%的酒精，濕潤的時(shí)間為0.5～1min；常用的有次氯酸鈉10%水溶液，浸泡接種材料10～15min；次氯酸鈣（漂白粉），用其飽和上清液，浸泡接種材料15～30min；過氧化氫10～12%水溶液浸泡10～20min；新潔爾滅5～10%水溶液浸泡10～15min；升汞0.1%水溶液浸泡8～10min；不同的外植體消毒滅菌劑效果比較如表1。

（2）接種及培養(yǎng)條件。①接種：以培養(yǎng)無病毒苗為主要目的的草莓組織培養(yǎng)，所接種的莖尖材料很小，在接種時(shí)首先要求準(zhǔn)切熟練地剝?nèi)∏o尖生長點(diǎn)，并使用固體培養(yǎng)基比較適宜，接種時(shí)應(yīng)注意不能將整個(gè)莖尖埋入培養(yǎng)基。培養(yǎng)基須用1.5MPa大氣壓熱壓滅菌20min。②培養(yǎng)條件：從材料接種到生根苗長成，這期間的培養(yǎng)溫度一般應(yīng)穩(wěn)定在25±2℃。每天光照12h，光強(qiáng)2000Lx為宜。培養(yǎng)室溫度應(yīng)控制在18～26℃范圍內(nèi)，瓶苗可以正常生長及發(fā)根。

（3）初代培養(yǎng)。莖尖分離后迅速接入培養(yǎng)基，初代培養(yǎng)可用MS+6-BA0.5mg/L+GA0.1mg/L+IBA0.2mg/L，培養(yǎng)溫度為22～25℃，光周期為：照光8h/d，黑暗16h/d，光強(qiáng)為1500～2000Lx。經(jīng)2～3個(gè)月的培養(yǎng)可生長分化出芽叢，注意在低溫和短日照下莖尖有可能進(jìn)入休眠，一般每簇芽叢含20～30個(gè)小芽為宜。

（4）繼代培養(yǎng)。把初代培養(yǎng)所分化出的芽叢（一般每簇芽叢含20～30個(gè)小芽為宜）割成芽叢小塊轉(zhuǎn)入MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉7～8g/L，pH值調(diào)至5.8～6.0的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基可接入3～5個(gè)芽叢小塊，使其長大，待苗長大到1～2cm時(shí)，可將芽叢小塊分成單株，再轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，重復(fù)上述培養(yǎng)過程，就可達(dá)到擴(kuò)大繁殖的目的。

（5）生根培養(yǎng)。誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基用1/2MS附加不同濃度。試驗(yàn)表明：誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.2～1.0mg/L或1/2MS+IAA0.5～1.0mg/L，另外在培養(yǎng)基中加入NAA1mg/L，使發(fā)根整齊；用IBA0.1mg/L的濃度處理的生根率最高，可達(dá)100%，平均根條數(shù)為2～4條。不加IBA及IBA濃度超過0.2mg/L，多數(shù)苗都是先于苗基切口處產(chǎn)生愈傷組織，隨后在愈傷組織上分化生根，致使成活率大大降低。

3 草莓無病毒苗的鑒定方法

草莓花藥培養(yǎng)得到的為無病毒苗，而用生長點(diǎn)培養(yǎng)得到的植株則必須經(jīng)過病毒鑒定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用于生產(chǎn)。危害草莓的病毒主要有：草莓斑駁病毒，草莓皺縮病毒，草莓鑲脈病毒和草莓輕型黃邊病毒。

4 草莓無病毒苗的繁殖

（1）防止蚜蟲的危害。草莓無病毒苗的繁殖重要的是要防止無病毒苗的再度污染。草莓病毒通過蚜蟲吸吮汁液而得到傳播，短時(shí)間即可完成。防治時(shí)可使用馬拉松乳劑，氧化樂果乳劑等接觸殺蟲劑。

（2）繁殖程序及提高繁殖率的措施。草莓無病毒的繁殖程序可分五步：包括病毒鑒定生產(chǎn)出無病毒苗，原種種苗培養(yǎng)，原種種苗繁殖，良種種苗繁殖，生產(chǎn)用苗繁殖和栽培苗繁殖。前四步在隔離室中進(jìn)行，后一步露地進(jìn)行。摘蕾可減輕母株的營養(yǎng)負(fù)擔(dān)，促使匍匐莖的大量發(fā)生，田間地每一株可繁殖150～200株[1～2]。

參考文獻(xiàn)

[1]王其枝，孫月軒，王統(tǒng)源，錢勤英，董 莉.草莓無公害栽培技術(shù)[J].上海蔬菜，2008（1）：104～105.

[2]張慧芳.紅古區(qū)塑料大棚草莓豐產(chǎn)栽培技術(shù)[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2008，2：47～49.

收稿日期：2018-9-1