miR-17與冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變程度、側(cè)支循環(huán)形成及血清Ox-LDL、25（OH）D3的關(guān)系

范迎春 卓著 李瀟 趙立飛 盧靜海

勝利油田勝利醫(yī)院1檢驗(yàn)科，5心內(nèi)科（山東東營(yíng) 257055）；臨沂市第三人民醫(yī)院2心血管內(nèi)科，3內(nèi)三科（山東臨沂 276023）；4臨沂市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（山東臨沂 276000）

冠心?。╟oronary heart disease，CHD）是發(fā)病率和病死率較高的一種心血管疾病，患者因冠脈狹窄或阻塞導(dǎo)致心肌供血嚴(yán)重不足，從而引發(fā)一些列并發(fā)癥，是嚴(yán)重威脅人類生命健康的慢性疾病之一［1］。冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)是冠脈主干嚴(yán)重狹窄或阻塞時(shí)，由其分支發(fā)出的血流供應(yīng)，對(duì)冠心病臨床治療及預(yù)后有重要意義［2］。研究［3］報(bào)道，良好的冠脈側(cè)支循環(huán)與冠心病患者臨床癥狀及預(yù)后直接相關(guān)。冠脈側(cè)支循環(huán)形成過(guò)程復(fù)雜，研究影響側(cè)支循環(huán)形成的因素將會(huì)對(duì)冠心病治療提供思路。近年來(lái)研究［4］表明miR-17與冠心病內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，調(diào)控miR-17表達(dá)有助于改善患者血流供應(yīng)。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)不同冠脈病變程度及不同側(cè)支循環(huán)患者血清miR-17、25（OH）D3、Ox-LDL水平，分析miR-17與患者冠脈病變、側(cè)支循環(huán)形成及25（OH）D3、Ox-LDL的關(guān)系，以期為臨床有效治療冠心病提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2014年3月至2017年10月在心內(nèi)科確診的157例穩(wěn)定性冠心病患者作為研究對(duì)象，其中男89例，女68例，年齡53～82歲，平均（68.51±14.36）歲。另選同時(shí)期體檢健康者100例作為對(duì)照組，其中男63例，女37例，年齡51～80歲，平均（66.93±12.84）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)《慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷與治療指南》中診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；（2）經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影顯示至少一支冠狀動(dòng)脈主血管（左主干、左前降支、左回旋支、右冠狀動(dòng)脈）狹窄＞50%；（3）患者及其家屬對(duì)本研究知情并簽署同意書；（4）經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有既往冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)或介入治療病史；（2）嚴(yán)重心功能不全、心臟瓣膜病等心血管疾病；（3）合并嚴(yán)重肝功能不全、急或慢性感染性及炎癥性疾??；（4）合并惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾??；（5）臨床資料不全影響臨床疾病診斷。

1.2方法

1.2.1病例分組（1）冠狀動(dòng)脈狹窄程度分組：采用SYNTAX評(píng)分評(píng)估患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度，并根據(jù)SYNTAX評(píng)分將患者分為冠狀動(dòng)脈病變重度組、中度組和輕度組。該評(píng)分包括優(yōu)勢(shì)類型、累及節(jié)段、病變支數(shù)及病變不良特征4部分，每部分評(píng)分之和為SYNTAX評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考（www.SYNTAXscoe.com），定義＞33分為重度組，23～32分為中度組，0～22分為輕度組。（2）冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)分組：采用Rentrop法進(jìn)行冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)情況分級(jí)，無(wú)側(cè)支循環(huán)為0級(jí)，側(cè)支血管直徑＜1 mm，緩慢充盈為1級(jí)，側(cè)支血管顯影速度介于緩慢和正常之間為2級(jí)，側(cè)支血管直徑＞1 mm，迅速顯影接近正常為3級(jí)。定義0～1級(jí)為側(cè)支循環(huán)不良組，2～3級(jí)為良好組。

1.2.2血清指標(biāo)檢測(cè)分別采集患者空腹時(shí)肘靜脈血5 mL，采用試劑盒法提取血清總RNA，RTPCR檢測(cè)血清miR-17相對(duì)表達(dá)量，試劑盒均購(gòu)于天根生化科技（北京）有限公司。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清25羥基維生素D3［25（OH）D3］水平和氧化修飾低密度脂蛋白（Oxidized lowdensity lipoprotein，Ox-LDL）水平，人25（OH）D3、Ox-LDL ELISA試劑盒均購(gòu)于森貝伽（南京）生物科技有限公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0用于本研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料表示為標(biāo)準(zhǔn)差±均數(shù)，單因素方差分析用于多組之間比較，配對(duì)t檢驗(yàn)用于兩兩比較，Pearson相關(guān)系數(shù)法用于相關(guān)性分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1對(duì)照組和病例組血清指標(biāo)比較與對(duì)照組相比，病例組血清miR-17相對(duì)表達(dá)量Ox-LDL水平升高，25（OH）D3水平降低，兩組血清 miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 對(duì)照組和病例組血清指標(biāo)比較Tab.1 Comparison of serum indexes between control group and case group ± s

表1 對(duì)照組和病例組血清指標(biāo)比較Tab.1 Comparison of serum indexes between control group and case group ± s

組別對(duì)照組病例組t值P值例數(shù)100 157 miR-17相對(duì)表達(dá)量0.76±0.24 1.33±0.41 12.591 0.000 Ox-LDL（μg/dL）31.46±9.63 69.83±14.25 23.692 0.000 25（OH）D3（ng/mL）15.62±4.87 6.73±2.13 20.072 0.000

2.2不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組臨床資料比較病例組冠心病患者冠狀動(dòng)脈狹窄輕度組、中度組和重度組性別、年齡、體質(zhì)量、高血壓史、糖尿病史及血清總膽固醇、甘油三酯等一般臨床資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表2。

表2 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組一般臨床資料比較Tab.2 Comparison of clinical data of different coronary artery stenosis groups ± s

表2 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組一般臨床資料比較Tab.2 Comparison of clinical data of different coronary artery stenosis groups ± s

組別輕度組中度組重度組χ2/F值P值例數(shù)52 61 44性別（男/女）27/25 29/32 33/11 1.836 0.399年齡（歲）68.74±14.19 67.93±13.62 69.04±15.08 0.088 0.916體質(zhì)量（kg）70.32±16.61 69.81±15.39 71.10±17.42 0.079 0.924高血壓史［例（%）］41（78.84）49（80.32）36（81.82）0.133 0.936糖尿病史［例（%）］25（48.08）29（47.54）23（52.27）0.258 0.879總膽固醇（mmol/L）3.99±1.15 4.11±1.24 4.18±1.31 0.297 0.743甘油三酯（mmol/L）1.05±0.29 1.10±0.32 1.17±0.37 1.624 0.201

2.3不同冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)程度組臨床資料比較病例組冠心病患者冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)良好組和不良組性別、年齡、體質(zhì)量、高血壓史、糖尿病史及血清總膽固醇、甘油三酯等一般臨床資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表3。

表3 不同冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)程度組一般臨床資料比較Tab.3 Comparison of clinical data of different coronary artery collateral circulation degree groups ± s

表3 不同冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)程度組一般臨床資料比較Tab.3 Comparison of clinical data of different coronary artery collateral circulation degree groups ± s

組別良好組不良組t值P值例數(shù)82 75性別（男/女）42/40 47/28 2.091 0.148年齡（歲）68.14±13.92 68.91±14.23 0.787 0.432體質(zhì)量（kg）70.28±16.92 70.41±17.33 0.048 0.962高血壓史［例（%）］62（75.61）64（85.33）2.337 0.126糖尿病史［例（%）］37（45.12）40（53.33）1.057 0.304總膽固醇（mmol/L）4.03±1.30 4.15±1.36 0.565 0.573甘油三酯（mmol/L）1.07±0.28 1.14±0.33 1.437 0.153

2.4不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組SYNTAX評(píng)分和血清指標(biāo)水平不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組之間血清miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；重度組和中度組血清miR-17、Ox-LDL水平顯著高于輕度組（P＜0.05），重度組血清miR-17、Ox-LDL水平顯著高于中度組（P＜0.05）；重度組和中度組血清25（OH）D3水平顯著低于輕度組（P＜0.05），重度組血清25（OH）D3水平顯著低于中度組（P＜0.05）。見表4。

表4 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組SYNTAX評(píng)分和血清指標(biāo)水平比較Tab.4 Comparison of SYNTAX score and serum index in different degree of coronary artery stenosis ± s

表4 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度組SYNTAX評(píng)分和血清指標(biāo)水平比較Tab.4 Comparison of SYNTAX score and serum index in different degree of coronary artery stenosis ± s

組別輕度組中度組重度組F值P值例數(shù)52 61 44 SYNTAX評(píng)分20.39±6.65 28.42±9.17 37.67±11.25 43.005 0.000 miR-17相對(duì)表達(dá)量1.14±0.31 1.29±0.40 1.61±0.52 15.986 0.000 Ox-LDL（μg/dL）58.94±13.22 70.57±15.42 81.67±17.36 26.353 0.000 25（OH）D3（ng/mL）7.39±2.21 6.74±2.05 5.93±1.83 6.064 0.003

2.5不同冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)程度組血清指標(biāo)水平不同冠脈側(cè)支循環(huán)程度組血清miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不良組血清miR-17、Ox-LDL水平顯著高于良好組（P＜0.05），血清25（OH）D3水平顯著低于良好組（P＜0.05）。見表5。

2.6病例組miR-17與SYNTAX評(píng)分、Rentrop分級(jí)及Ox-LDL、25（OH）D3水平的關(guān)系病例組血清miR-17水平與SYNTAX評(píng)分呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.653，P=0.000），與Rentrop分級(jí)呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.624，P=0.000），與Ox-LDL水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.711，P=0.000），與25（OH）D3水平呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.735，P=0.000）。見表6。

表5 不同冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)程度組血清指標(biāo)水平比較Tab.5 Comparison of serum indexes in different degree of collateral circulation of coronary artery ± s

表5 不同冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)程度組血清指標(biāo)水平比較Tab.5 Comparison of serum indexes in different degree of collateral circulation of coronary artery ± s

組別良好組不良組t值P值例數(shù)82 75 miR-17相對(duì)表達(dá)量1.12±0.33 1.56±0.49 6.649 0.000 Ox-LDL（μg/dL）61.12±13.66 79.35±16.99 7.442 0.000 25（OH）D3（ng/mL）7.42±2.22 5.98±1.83 4.411 0.000

表6 病例組血清指標(biāo)之間及與SYNTAX評(píng)分和Rentrop分級(jí)的相關(guān)性Tab.6 correlation between serum indexes in case group and SYNTAX score and Rentrop classification

3 討論

miR-17家族是高度保守的成熟miRNA，研究表明，miR-17大量存在于內(nèi)皮細(xì)胞中，在腫瘤組織中抑制其表達(dá)可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞外周血管生成［6］。近年來(lái)研究［7］表明，miR-17-5p作為冠脈粥樣硬化新的生物標(biāo)志物，與冠脈粥樣硬化嚴(yán)重程度有關(guān)。但其冠心病冠脈側(cè)支循環(huán)形成之間的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究結(jié)果，病例組血清miR-17水平顯著高于對(duì)照組，冠脈病變重度組和中度組顯著高于輕度組，重度組顯著高于中度組，說(shuō)明隨患者冠脈狹窄程度加重血清miR-17水平呈明顯升高趨勢(shì)，與前人研究結(jié)果一致。相關(guān)性分析結(jié)果，病例組血清miR-17水平與SYNTAX評(píng)分呈顯著正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明血清miR-17水平可能是冠脈病變的危險(xiǎn)因素。臨床研究表明，超過(guò)25%患者在冠脈狹窄供血不足的刺激下都會(huì)產(chǎn)生周邊小血管，代償性改善缺血區(qū)域血流供應(yīng)［8］。但其血管再生非常緩慢，MEYER等［9］研究表明血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可作為血管再生的誘導(dǎo)因子，促進(jìn)血管再生，有效改善局部血流灌注。因此，尋找誘導(dǎo)心肌新生血管生成即冠脈側(cè)支循環(huán)形成的潛在靶點(diǎn)，可能對(duì)提高冠心病治療效率具有重要意義。本研究采用Rentrop法將患者冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)情況進(jìn)行分級(jí)，結(jié)果冠脈側(cè)支循環(huán)不良組血清miR-17水平顯著高于良好組，相關(guān)性分析結(jié)果，miR-17水平與Rentrop分呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明血清miR-17水平越高，冠脈側(cè)支循環(huán)形成越緩慢或無(wú)循環(huán)。提示miR-17基因干預(yù)治療可能有助于冠心病患者冠脈側(cè)支循環(huán)形成，有助于改善患者心肌缺血狀況。

Ox-LDL是機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程中的產(chǎn)物，臨床研究已證實(shí)，Ox-LDL誘發(fā)的一系列病理生理變化是導(dǎo)致冠脈粥樣硬化形成的關(guān)鍵［10］。同時(shí)高表達(dá)Ox-LDL能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素等炎性因子，影響內(nèi)皮細(xì)胞代謝并損傷內(nèi)皮細(xì)胞，加重冠脈病變［11］。本研究結(jié)果，病例組血清Ox-LDL水平顯著高于對(duì)照組，且隨冠脈病變程度加重呈升高趨勢(shì)，與患者側(cè)支不良循環(huán)形成有關(guān)，相關(guān)性分析表明，病例組血清miR-17與Ox-LDL呈顯著正相關(guān)，間接說(shuō)明血清miR-17水平與患者冠脈狹窄及內(nèi)皮功能損傷密切相關(guān)。25（OH）D3是維生素D3在體內(nèi)的活化形式，屬于類固醇激素，主要參與調(diào)節(jié)機(jī)體鈣磷代謝平衡，近年來(lái)研究表明，25（OH）D3還具有延緩大動(dòng)脈重構(gòu)與硬化、保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用［12］。VERDOIA等［13］研究表明，維生素D含量與血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)、低密度脂蛋白膽固醇以及甘油三酯直接相關(guān)，維生素D缺乏與較高的冠心病患病率和嚴(yán)重冠狀動(dòng)脈病變顯著相關(guān)，提示25（OH）D3可能通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能、血小板功能，潛在調(diào)節(jié)動(dòng)脈血栓形成。國(guó)外相關(guān)研究［14］表明，與健康者比較，冠心病心肌梗死患者幾乎都存在明顯25（OH）D3缺乏或不足。國(guó)內(nèi)也有相似研究，如李暉等［15］研究表明，冠狀動(dòng)脈狹窄患者血清25（OH）D3水平顯著低于正常者，低水平25（OH）D3與患者冠脈狹窄程度有關(guān)。張世袍等［16］分別比較冠脈重度狹窄、中度狹窄和輕度狹窄患者與健康者血清25（OH）D3水平，結(jié)果冠脈狹窄患者血清25（OH）D3水平顯著低于健康者，且冠脈嚴(yán)重狹窄者血清25（OH）D3水平顯著低于中度和輕度狹窄者，低水平25（OH）D3水平與冠脈狹窄程度有明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系。本研究結(jié)果，病例組血清25（OH）D3水平顯著低于對(duì)照組，冠脈病變重度組和中度組顯著低于輕度組，重度組顯著低于中度組，說(shuō)明隨患者冠脈狹窄程度加重血清25（OH）D3水平呈明顯下降趨勢(shì)，與李暉等研究結(jié)果一致。進(jìn)一步相關(guān)性分析結(jié)果，病例組血清miR-17與25（OH）D3水平呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示抑制miR-17表達(dá)可能有助于改善患者25（OH）D3缺乏，有助于病情改善。

綜上所述，血清miR-17水平與冠脈病變程度、冠脈側(cè)支循環(huán)形成及Ox-LDL、25（OH）D3水平密切相關(guān)，本研究不足之處在于樣本量較小，無(wú)法進(jìn)行進(jìn)一步的分層分析，下一步將在擴(kuò)大樣本量的基礎(chǔ)上繼續(xù)深入探討miR-17在改善冠心病冠脈狹窄程度、刺激冠脈側(cè)支循環(huán)形成，改善血流供應(yīng)中的作用機(jī)制。