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    慢性髓性白血病患者外周血細胞中SHP-1、DNMTs水平變化及其與疾病進展的關系

    2018-12-21 11:22:10劉曉劉珊李英華
    山東醫(yī)藥 2018年45期
    關鍵詞:期組酪氨酸白血病

    劉曉,劉珊,李英華

    (哈勵遜國際和平醫(yī)院,河北衡水053000)

    慢性髓性白血病為骨髓造血干細胞克隆性增殖所致的惡性腫瘤,占成人白血病的15%,全球年發(fā)病率為1.5/10萬~2/10萬[1,2]。酪氨酸激酶抑制劑是目前臨床治療慢性髓性白血病的一線方案,取得了較為矚目的臨床療效,但仍有部分病例效果不佳且快速進展至加速期和急變期,生存周期大幅縮短[3]。歐洲腫瘤內(nèi)科學會、歐洲白血病網(wǎng)均一致指出,慢性髓性白血病不同分期的基因表達存在著較大差異性,此種差異性是導致慢性髓性白血病急性轉(zhuǎn)化的重要誘因[4,5]。本研究探討了慢性髓性白血病患者蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)基因和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)基因水平變化,并探討了其與疾病進展的關系。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取2014年1月~2016年1月哈勵遜國際和平醫(yī)院收治的慢性髓性白血病患者80例(觀察組),均符合中國慢性髓性白血病診斷與治療指南(2016年版)相關標準。納入標準:明確髓性白血病分期且無惡性腫瘤史患者;臨床資料完整;患者以及家屬知情且同意參加本次臨床研究,簽署知情同意書者。排除標準:多器官功能障礙綜合征;處于妊娠期或哺乳期者。依據(jù)臨床分期分為慢性期組35例、加速期組30例、急變期組15例。慢性期組中男22例、女13例;年齡27~65(48.10±1.14)歲;白細胞35.7×109/L~433.5×109/L(202.40±5.77)×109/L;血小板41.8×109/L~999.3×109/L(480.54±2.38)×109/L。加速期組中男19例、女11例;年齡28~64(48.07±1.13)歲;白細胞35.2×109/L~434.1×109/L(202.79±5.41)×109/L;血小板41.3×109/L~998.5×109/L(481.47±2.43)×109/L。急變期組中男9例、女6例;年齡30~63(49.11±1.11)歲;白細胞36.2×109/L~437.4×109/L(202.94±5.86)×109/L;血小板41.5×109/L~999.1×109/L(480.13±2.37)×109/L。體檢健康者20例(對照組),男11例、女9例,年齡30~63(47.10±1.22)歲。四組年齡、性別有可比性。

    1.2 外周血細胞中SHP-1 mRNA、DNMTs(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)mRNA的檢測 采用熒光定量聚合酶鏈式反應法。采集外周血后于EDTA管抗凝處理,等體積磷酸緩沖鹽溶液稀釋后2 500 r/min離心20 min后采集中間單個核細胞層,0.9%氯化鈉吹打后靜置5 min,1 500 r/min反復離心3次后提取樣本總RNA。在冰浴中完成總RNA提取并進行逆轉(zhuǎn)錄處理,形成cDNA后加入由北京賽百盛公司設計合成的引物,SHP-1(414 bp)上游引物:5′-ACTTCTCCCCTTTGACC-3′,下游引物:5′-CTCAGGTACTGGTAATGCC-3′;DNMT1(227 bp)上游引物,5′-TCCACAGTGTTCACAGAGG-3′,下游引物:5′-CGGTAGTAGTCGAGTAGC-3′;DNMT3A(245 bp)上游引物:5′-GAAGCGGGCAAAGAACAG-3′;下游引物:5′-TCTTCCACAGCATTCAATTCC-3′;DNMT3B(165 bP)上游引物:5′-GCTCTTACCTTACCATCG-3′,下游引物:5′-GATACTCTGAACTGTCTCC-3′;采用SYBR Green熒光定量聚合酶鏈式反應對SHP-1基因、DNMTs基因(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)進行定量檢測,結果以2-ΔΔCT表示。

    1.3 外周血細胞中SHP1蛋白的檢測 采用ELISA法檢測。試劑盒購自南京賽泓瑞生物科技有限公司,嚴格按照試劑盒操作說明操作,結果以OD值表示。

    2 結果

    2.1 四組外周血細胞中SHP-1 mRNA、SHP-1蛋白及DNMTs mRNA相對表達水平比較 外周血細胞中SHP-1 mRNA水平、SHP-1蛋白及DNMTs mRNA相對表達水平比較:觀察組>正常組,加速期與急變期組>慢性期組,P均<0.05,加速期與急變期比較,P>0.05。見表1。

    表1 四組外周血細胞中SHP-1 mRNA、SHP-1蛋白、DNMTs mRNA相對表達水平比較

    2.2 外周血細胞中SHP-1 mRNA、DNMTs mRNA相對表達水平與慢性髓性白血病分期相關性 Pearson相關分析結果顯示,外周血細胞中SHP-1 mRNA、DNMTs mRNA相對表達水平與慢性髓性白血病分期均呈正相關性(r分別為3.451、2.272、2.285,P均<0.05)。

    3 討論

    慢性髓性白血病是目前全球范圍內(nèi)較為常見的一種惡性血液腫瘤,患者總數(shù)為120萬~150萬,且仍處于上升態(tài)勢[6~8]。目前治療該病癥的手段多樣,除了傳統(tǒng)的化療外,造血干細胞移植、酪氨酸激酶抑制劑亦有應用的報道[8,9]。然而,隨著臨床資料的日益豐富,仍有部分病例在接受上述治療時出現(xiàn)急性轉(zhuǎn)化情形,使得由該病癥所致的病死率居高不下[10]。目前基因組DNA穩(wěn)定性、白血病干祖細胞、髓系分化不暢、骨髓基質(zhì)微環(huán)境改變、信號通路傳導異常、表觀遺傳學異常已經(jīng)被證實為慢性髓性白血病急性轉(zhuǎn)化的主要誘因[11,12]。但隨后的研究進一步指出,抑癌基因同樣在該病癥發(fā)生、演進中扮演著重要角色[13]。

    SHP-1基因為胞質(zhì)蛋白酪氨酸磷酸酶家族的重要成員,既往又被稱之為造血細胞磷酸酶,在機體中主要存在于造血細胞,能夠通過對下游信號蛋白分子磷酸酪氨酸進行脫磷酸化處理而調(diào)控受體酪氨酸激酶、抗原受體復合物等信號通路,最終實現(xiàn)調(diào)控造血干細胞增殖與凋亡。近年SHP-1基因被認定為候選的抑癌基因之一[14]。正常生理狀態(tài)下該基因以低表達呈現(xiàn),當罹患包括慢性髓性白血病在內(nèi)的惡性血液腫瘤后表達水平大幅提高。DNMTs基因在DNA甲基化中發(fā)揮著重要作用,DNA甲基化介導下CpG島甲基化,繼而抑制正常轉(zhuǎn)錄。此外,DNMTs基因還具有促進抑癌基因啟動子甲基化的能力[15]。

    本研究證實,外周血細胞中SHP-1 mRNA、SHP-1蛋白、DNMTs mRNA相對表達水平相比較:觀察組>正常組,加速期與急變期組>慢性期組,加速期與急變期組相比較差異無統(tǒng)計學意義;Pearson相關分析提示,外周血細胞中SHP-1 mRNA、DNMTs mRNA相對表達水平與慢性髓性白血病分期均呈正相關。提示不同分期的慢性髓性白血病患者外周血細胞中SHP-1基因和DNMTs基因存在著較大的差異性,慢性期普遍低于加速期和急變期,而后兩期又可被歸納為進展期,故可認定,SHP-1基因和DNMTs基因在該病癥急性轉(zhuǎn)變中扮演著重要角色;且表達水平越高,分期越高。然而,需要指出的是,SHP-1基因?qū)儆谝职┗颍鳧NMTs基因具有促抑癌基因啟動子甲基化的能力,在其作用下SHP-1基因表達水平將會升高,但二者之間是否同樣存在此種正相關性,本次研究結果并不能加以肯定,尚需要今后大樣本、多隨機對照試驗予以驗證。綜上所述,慢性髓性白血病患者外周血細胞中SHP-1基因和DNMTs基因的相對表達水平升高,以加速期及急變期為著,且兩種基因相對表達水平與分期均呈正相關性。

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