溫腎固疏方對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝以及脂代謝的影響

舒高 宋曉飛 張軻 陳曉東 梁鵬展

1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006 2. 南陽市中心醫(yī)院骨科，河南 南陽 473000 3. 宜賓市第二人民醫(yī)院小兒外科，四川 宜賓 644000 4. 深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳 518000 5. 深圳平樂骨傷科醫(yī)院，廣東 深圳 518000

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是絕經(jīng)后女性較為常見的一種全身性骨疾病。絕經(jīng)后女性由于雌激素分泌不足，導(dǎo)致骨吸收抑制能力衰退，使得骨量流失加快；此外，有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)女性雌激素水平下降還會導(dǎo)致血脂代謝異常的發(fā)生發(fā)展[1]，成為影響絕經(jīng)后女性身體健康和生活質(zhì)量的社會衛(wèi)生問題。西醫(yī)中常用的補充雌激素療法在治療過程中會增加患者發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險[2]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎對骨骼的生長具有重要的作用。近年來有研究報道指出，采用中醫(yī)補腎療法可以改善絕經(jīng)后女性的骨質(zhì)疏松癥狀[3]。本研究在建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型的基礎(chǔ)上，研究溫腎固疏方對大鼠模型骨代謝及脂代謝指標(biāo)的影響，探討其改善骨質(zhì)疏松和脂代謝異常的的作用機制，以期進一步發(fā)掘中醫(yī)藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥及脂代謝異常的臨床價值。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

80只雌性未孕SPF大鼠(200±20)g由鄭州大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(豫)K2016-0002。大鼠在12 h：12 h的循環(huán)照明時間環(huán)境中飼養(yǎng)，溫度為22.0～24.0°C，濕度為50%～60%。所有實驗均按照動物保護與利用準(zhǔn)則(批準(zhǔn)文號SCXK 2012-0012)進行。

1.2 試劑

溫腎固疏方由本院藥房提供。I型膠原氨基端延長肽(PING)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)、骨保護素(OPG)、骨鈣素(BGP)試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 模型建立與分組干預(yù)

80只雌性未孕SPF大鼠在喂養(yǎng)7 d后，隨機分為假去勢組20只和去勢組60只。去勢組大鼠麻醉后，取俯臥位于手術(shù)面板上，在左右兩側(cè)腹后壁肌肉層較薄弱處打開腹腔，找到卵巢后將其連帶輸卵管末端輕輕提出體外，結(jié)扎后用眼科剪將卵巢全部切除；假去勢組保留卵巢，只切除周圍少量脂肪，其余操作同去勢組。術(shù)后30 d，將去勢大鼠隨機分為對照組(n=20)、雌激素組(n=20)和實驗組(n=20)。雌激素組按照0.05 mg/(mL·100 g)戊酸雌二醇，實驗組按照20 g/(kg·d)溫腎固疏方藥劑，對照組和假去勢組大鼠按照0.5 mL/100 g生理鹽水，每天灌胃給藥1次，連續(xù)治療8周。

1.4 指標(biāo)檢測

最后一次治療后，大鼠心室抽血處死，搜集血液不抗凝，放置2 h后，分離血清，使用英諾華D280自動分析儀，測定血清血脂水平。取右側(cè)股骨，使用法國medilink超聲骨密度儀測量其骨密度(BMD)值。按照試劑盒說明書步驟要求，采用酶聯(lián)免疫法測定PING、TRACP5b、OPG、BGP四項骨代謝指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠骨密度值比較

與假去勢組相比，對照組大鼠的股骨和股骨近端的BMD顯著降低(P<0.05)；雌激素組和實驗組大鼠同樣部位的BMD均較對照組顯著增加(P<0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠右側(cè)股骨Table 1 BMD value of the femur in rats in each

注：與假去勢組比較，△P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

2.2 各組大鼠血清骨代謝指標(biāo)比較

與假去勢組相比，對照組大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平顯著提高(均P<0.05)，OPG水平明顯下降(P<0.05)；灌胃治療后，雌激素組和實驗組大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平均較對照組顯著提高(均P<0.05)，而OPG水平顯著降低(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組血清PING、TRACP5b、BGP、OPG含量Table 2 The contents of serum PING, TRACP5b, BGP, and OPG in each group

注：與假去勢組比較，△P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

2.3 各組大鼠血脂指標(biāo)比較

與假去勢組大鼠比較，對照組大鼠四項血脂指標(biāo)水平均明顯惡化(均P<0.05)；灌胃治療后，雌激素組和實驗組大鼠的4項血脂指標(biāo)水平較對照組均發(fā)生顯著改善(均P<0.05)。詳見表3。

表3 各組大鼠血脂指標(biāo)水平Table 3 The levels of serum lipids in each group

注：與假去勢組比較，△P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

3 討論

骨代謝是破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞共同作用的過程。正常水平的雌激素不僅可直接通過成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞表面的受體刺激成骨細(xì)胞形成、抑制破骨細(xì)胞；還能通過降低甲狀旁腺素的骨骼刺激來抑制破骨細(xì)胞[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后女性的雌激素水平下降，導(dǎo)致骨單位的激活頻率增加，骨轉(zhuǎn)換和重建加快，促進了骨單位流失，使骨量下降[6]。骨鈣素(BGP)是一種由49個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，在調(diào)節(jié)骨鈣代謝中起重要作用，其水平變化能反應(yīng)骨代謝程度。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后雌激素下降，會導(dǎo)致機體血液含鈣量降低，誘發(fā)甲亢發(fā)生，進而使得高代謝型骨質(zhì)疏松骨鈣素升高[7]。I型膠原氨基端延長肽(PINP)是骨形成的特異性指標(biāo)，骨更新率越快，該值越高，反之越低，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松女性血清PING值較正常女性明顯下降[8]。抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)是反映破骨細(xì)胞活動狀態(tài)的重要標(biāo)志物，破骨細(xì)胞在骨吸收過程中會產(chǎn)生大量的TRACP5b，有關(guān)研究提出絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者的TRACP5b水平明顯高于骨密度正常的女性[9]。骨保護素(OPG)是雌激素影響骨代謝的重要路徑，是骨質(zhì)疏松發(fā)生的重要因素之一[10]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)女性的骨密度與OPG水平之間存在正相關(guān)關(guān)系[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與假去勢組大鼠相比，去勢組大鼠的股骨及其近端的骨密度值明顯下降(P<0.05)，并且骨代謝指標(biāo)水平明顯惡化(均P<0.05)，與上述研究結(jié)果基本相符。

國內(nèi)相關(guān)研究證實，絕經(jīng)后女性雌激素分泌下降與血脂異常的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[12]。本研究結(jié)果顯示，去勢組大鼠的血脂指標(biāo)水平較假去勢組明顯惡化(均P<0.05)，與王景等[13]研究結(jié)果基本一致，表明絕經(jīng)后血脂代謝異常與雌激素分泌下降有關(guān)，主要原因是雌激素分泌下降導(dǎo)致肝臟酶對膽固醇、甘油三酯合成的抑制作用降低。

溫腎固疏方主要由骨碎補、淫羊藿、黨參、補骨脂等藥材組成，以益腎滋陰為主，輔以溫陽補氣。溫腎固疏方一方面可以通過強腎溫陽來加強對骨的營養(yǎng)，刺激骨形成，具有抗骨質(zhì)疏松的功效。例如其中的重要成分骨碎補總黃酮能夠抑制骨保護素的減少，進而減少骨量的吸收。另一方面，骨碎補、淫羊藿、補骨脂等中藥成分中含有類似植物雌激素活性的異黃酮物質(zhì)，可降低雌激素水平減少對骨代謝和脂代謝產(chǎn)生的不良作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用溫腎固疏方治療的實驗組大鼠的股骨及其近端的骨密度值，骨代謝指標(biāo)和血脂指標(biāo)均較對照組明顯改善(均P<0.05)，表明溫腎固疏方通過發(fā)揮補腎壯骨及類雌激素的作用，有效提高絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，調(diào)節(jié)骨代謝和脂代謝指標(biāo)水平，達到改善骨質(zhì)疏松和調(diào)節(jié)血脂代謝的效果。