蒙藥肉蓯蓉提取物穩(wěn)定性研究△

閆 暾 齊海平 常欣榮 李 佳 張佳宇 張春紅,*

(1.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014040；2.內(nèi)蒙古眾維實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

肉蓯蓉，蒙藥名查干高要，為列當(dāng)科植物肉蓯蓉Cistnche decerticola Y.C. Ma的干燥帶鱗狀皮的肉質(zhì)莖，主要寄生在荒漠植物梭梭和紅柳的根部，肉質(zhì)莖肥厚，所以稱為肉蓯蓉[1]，多于春季苗未出土或出土?xí)r采挖，除去花序，切段，曬干。性味甘、酸、咸，溫，能清希拉、消食、補(bǔ)虛。用于希拉引起頭痛、胃酸、吐酸水、陽(yáng)痿、遺精。

現(xiàn)代藥理研究表明, 肉蓯蓉具有補(bǔ)腎、益精、活血、通便、增加免疫力、增強(qiáng)記憶力的功效[2-4]。主產(chǎn)于新疆、甘肅、內(nèi)蒙古、寧夏等地，素有“沙漠人參”之美譽(yù)，具有極高的藥用價(jià)值，為古代的歷史上就是向朝廷進(jìn)貢的珍品。肉蓯蓉作為藥食兩用的植物，功效確切、無(wú)毒性作用[5]，在藥物及保健食品開(kāi)發(fā)中均有很高的價(jià)值。但對(duì)于肉蓯蓉穩(wěn)定的研究，目前較少，因此，本研究對(duì)不同因素對(duì)肉蓯蓉提取物的穩(wěn)定性的影響進(jìn)行研究，為其今后的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供有價(jià)值的參考數(shù)據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 數(shù)顯恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)；BT25S型微量電子分析天平(十萬(wàn)分之一，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)、UV-1780型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(島津儀器有限公司)、20-200ul移液槍(大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)、移液管、容量瓶、EP管。

1.2 試劑 磷酸氫二鈉(天津市津北精細(xì)化有限公司、分析純)、無(wú)水檸檬酸(天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司、分析純)、蒸餾水、松果菊苷對(duì)照品(普天同創(chuàng)生物科技有限公司20171207)。

1.3 藥材 荒漠肉蓯蓉，由內(nèi)蒙古眾維實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司提供，由包頭醫(yī)學(xué)院李旻輝教授鑒定為肉蓯蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma的干燥莖。

2 肉蓯蓉提取物穩(wěn)定性研究

2.1 肉蓯蓉提取物的制備 肉蓯蓉開(kāi)水煮沸5min，浸泡過(guò)夜軟化切成2mm～3mm的薄片，加入10倍量蒸餾水，加熱回流提取2h，提取3次，合并濾液，濃縮濾液至濃度為1g/mL，取部分稀釋至0.5 g/mL和0.25 g/mL。

2.2 肉蓯蓉提取物中苯乙醇苷含量測(cè)定[6]

2.2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定 以蒸餾水為參比液，在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定肉蓯蓉提取物溶液的紫外吸收情況，在330nm處，提取物有最大吸收，確定330nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制精密稱取松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品0.0020g，加水溶解轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，配置成濃度為0.2mg/mL的松果菊苷對(duì)照品溶液備用。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液0.2mL用水定容至5mL，330nm波長(zhǎng)下測(cè)定5次，RSD為0.26%，表明儀器精密度良好。

2.2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密量取“2.1”項(xiàng)下的提取液0.1mL共3份，蒸餾水稀釋至50mL，在波長(zhǎng)330nm處測(cè)定其吸光度，RSD值為1.25%。

2.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取“2.1”項(xiàng)下的提取液0.1mL，蒸餾水稀釋至50mL，分別在0，2，4，6，8h測(cè)定其吸光度， RSD為0.42%，表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收率 精密量取已知松果菊苷含量的肉蓯蓉提取物3份，分別精密加入松果菊苷對(duì)照品配置成濃度為中高低的供試品溶液測(cè)得加樣回收率為99.1%。

2.2.7 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL用蒸餾水稀釋使成0.00625mg/mL、0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL，在330nm處進(jìn)行測(cè)定，得回歸方程是y=3.1148x-0.0716(R2=0.9991)。

2.3 pH對(duì)荒漠肉蓯蓉提取物穩(wěn)定性的影響

2.3.1 檸檬酸-磷酸氫二鈉的緩沖溶液的配制 取0.96克檸檬于50ML容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，取磷酸氫二鈉3.6克于50mL容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度線。分別取不同體積的檸檬酸溶液與磷酸氫二鈉溶液混合，配制成pH為2.0、5.0、6.0、7.0、8.0的緩沖溶液。

2.3.2 取“2.1”中0.5g/mL的肉蓯蓉提取物與緩沖液以1:1混合，所得混合液pH值分別為4.10、5.12、6.05、7.00、7.13。將所得混合液灌裝入滅菌EP管，密封放置，測(cè)定第0、2、4、6、8、12、13、15d樣品中苯乙醇苷含量。結(jié)果見(jiàn)圖1

2.4 溫度對(duì)荒漠肉蓯蓉提取物穩(wěn)定性的影響 取6份“2.1”項(xiàng)下0.5g/mL提取液分別置于5mL EP管中，分別置于室溫、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃在0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h測(cè)定樣品中苯乙醇苷含量，結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.5 放置時(shí)間對(duì)荒漠肉蓯蓉提取物穩(wěn)定性的影響 取“2.1”項(xiàng)下不同濃度提取物1g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL，分別灌裝入滅菌EP管中，于第0d、5d、10d、15d、20d、30d進(jìn)行取樣，測(cè)定其中苯乙醇苷含量，結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.6 光線對(duì)荒漠肉蓯蓉提取物穩(wěn)定性的影響 取“2.1”項(xiàng)下提取物(0.5g/mL)，灌裝于滅菌EP管中，一批置于自然光照處，另一批避光保存。于第0d、5d、10d、15d、20d、30d進(jìn)行取樣，測(cè)定其中苯乙醇苷含量，結(jié)果見(jiàn)圖4。

3 結(jié)果及結(jié)論

通過(guò)研究結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，荒漠肉蓯蓉提取物在較高溫度(50℃～90℃)下表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性，在此溫度下8h，苯乙醇苷含量變化較小。在光照及避光條件下，提取物常溫放置15d，主要成分含量均未表現(xiàn)出明顯變化。不同濃度提取物(1g/mL、0.5 g/mL、0.25 g/mL)在常溫放置30d過(guò)程中，苯乙醇苷含量未出現(xiàn)明顯變化。在不同pH條件下，提取物中苯乙醇苷含量變化較大，均呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，pH值越低，苯乙醇苷含量下降越快，表明肉蓯蓉提取物對(duì)pH變化較為敏感，易受此因素的影響。

4 討論

現(xiàn)代藥理研究表明，肉蓯蓉有潤(rùn)腸通便、保肝、抗骨質(zhì)疏松、抗氧化、抗衰老、抗疲勞等作用[7]。其中起主要作用的一類成分便是苯乙醇苷類物質(zhì)，國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者對(duì)此類成分的藥理作用進(jìn)行了研究，主要集中在苯乙醇總苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷的藥理作用上，研究表明此類成分具有抗衰老、提高記憶力、調(diào)節(jié)免疫、改善性功能、防止肝損傷等作用[8]，因此研究肉蓯蓉提取物中此類成分的穩(wěn)定性對(duì)今后肉蓯蓉類產(chǎn)品開(kāi)發(fā)具有重要意義。

通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉提取的穩(wěn)定性受到pH影響較大，而且隨著pH的降低，其降解速度加快，與文獻(xiàn)中苷類在酸性環(huán)境下水解快，在中性和堿性下水解相對(duì)較慢相一致[9]。此外，賈寶國(guó)[10]的研究表明，在有Cu2+、Fe3+存在的情況下，肉蓯蓉中苯乙醇苷的降解速度也會(huì)增加。因此，在進(jìn)行肉蓯蓉提取或產(chǎn)品加工過(guò)程中避免廣義酸堿的添加及金屬離子的引入，可增加藥物的穩(wěn)定性，提高產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的成功率。