miR-187在宮頸癌中的表達(dá)與臨床病理關(guān)系的研究

吳曉玲 周桂華

摘? ?要：目的? 探討miR-187在宮頸癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法? 收集78例宮頸癌組織標(biāo)本，同時收取同期手術(shù)的60例正常宮頸組織標(biāo)本，采用實(shí)時熒光定量PCR檢測方法檢測兩種組織中miR-187的表達(dá)量并進(jìn)行比較，同時分析癌組織中miR-187的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果? 宮頸癌組織中miR-187的表達(dá)量低于正常宮頸組織標(biāo)本，統(tǒng)計學(xué)意義顯著（P<0.001）;宮頸癌組織中miR-187的表達(dá)水平與宮頸癌組織的分化程度、患者的臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P<0.05），而與患者的年齡、腫塊類型、腫瘤大小及組織學(xué)類型無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論? miR-187在宮頸癌組織中低表達(dá)，可能作為其診斷與治療的重要靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：miR-187;宮頸癌;實(shí)時熒光定量PCR

中圖分類號：R365? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.16.019

文章編號：1006-1959（2018）16-0069-03

Expression of miR-187 in Cervical Cancer and Its Relationship with Clinicopathological Features

WU Xiao-ling，ZHOU Gui-hua

（Department of Laboratory Medicine，Hunan Maternal and Child Health Care Hospital，Changsha 410008，Hunan，China）

Abstract：Objective? To investigate the expression of miR-187 in cervical cancer and its relationship with clinicopathological features.Methods? 78 cases of cervical cancer tissues were collected，60 normal cervical tissue specimens were collected at the same time from simultaneous operation.The expression of miR-187 in two kinds of tissues was detected and compared by real-time fluorescence quantitative PCR，and the relationship between the expression of miR-187 and clinicopathological features was analyzed. Results? The expression of miR-187 in cervical cancer was significantly lower than that in normal cervical tissue，with statistical significance（P<0.001）.The expression of miR-187 in cervical cancer was related to the degree of differentiation，clinical stage and lymph node metastasis （P<0.05），but not to age，tumor type，tumor size and histological type（P>0.05）.Conclusion? Low expression of miR-187 may be an important target for diagnosis and treatment of cervical cancer.

Key words：miR-187;Cervical cancer;Real-time fluorescent quantitative PCR

宮頸癌（cervical cancer）是婦科腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一，已成為世界各地婦女面臨的具有挑戰(zhàn)性的健康問題[1]。雖然高危型HPV感染是宮頸癌及其癌前病變發(fā)生的主要原因，然而并非所有感染高危型HPV的女性均會發(fā)生宮頸癌，這表明還有其他因素導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展，因此，對宮頸癌的危險因素進(jìn)行及時有效的檢測十分必要[2-4]。微小RNA（miRNA/miR）是一類長度約為19～25個核苷酸的小的非編碼和內(nèi)源調(diào)節(jié)RNA分子，其可以結(jié)合特定基因的3'非翻譯區(qū)（3'-UTR）以抑制mRNA翻譯，然后損害蛋白質(zhì)過程，對基因表達(dá)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)[5]。近年來，很多研究者發(fā)現(xiàn)miR-RNA在腫瘤性疾病的發(fā)展中扮演著重要角色，比如一些miR-RNA的表達(dá)能夠抑制乳腺癌的發(fā)生發(fā)展等[6]。大量研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)一些致癌miR-RNA或者下調(diào)一些抑癌miR-RNA能夠通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移等來促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[7，8]。miR-187作為miRNA超家族中的一種，已經(jīng)表明能夠抑制前列腺癌、卵巢癌、肝細(xì)胞癌等腫瘤的發(fā)展。本文檢測了miR-187在宮頸癌組織與正常宮頸組織的表達(dá)及分析了miR-187的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，旨在了解miR-187和宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的診治提供潛在靶點(diǎn)。

1資料與方法

1.1一般資料? 收集2014年1月～2016年12月在湖南省婦幼保健院做宮頸癌根治術(shù)或?qū)m頸錐切術(shù)的宮頸癌組織標(biāo)本78例，收取同期非宮頸癌手術(shù)（子宮肌瘤、子宮脫垂手術(shù)等患者）的正常宮頸組織手術(shù)標(biāo)本60例。所有正常宮頸組織標(biāo)本均經(jīng)過嚴(yán)格組織病理檢查無其它相關(guān)病變;所有宮頸癌患者術(shù)前均經(jīng)病理活檢證實(shí)癌變，且術(shù)前均未接受任何放化療。所有患者臨床資料完整，同時均未合并其他腫瘤或者癌前病變。所有標(biāo)本收集后立刻速凍放入-80 ℃保存。

1.2 RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄? 用Trizol法參照TRIzol Reagent試劑說明書提取總RNA，并用瓊脂糖凝膠電泳法檢測RNA的完整性。用TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒按說明書進(jìn)行RNA的逆轉(zhuǎn)錄。

1.3實(shí)時熒光定量? PCR所有引物合成均購自上海生工，序列如下：miR-187，forward 5′-ACACTCCAGCTGGGGGCCGACGTTGTGTT-3′ and reverse 5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′;內(nèi)參U6，forward 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′ and reverse 5′-AACGCTTCACGAA-3′。PCR反應(yīng)體系如下：預(yù)變性95 ℃，5 min，變性95 ℃，45 s，退火55 ℃，30 s，延伸72 ℃，30 s，共40個循環(huán)。實(shí)時熒光定量PCR的結(jié)果采用2-△△Ct法計算表示，并將正常宮頸組織miR-187的表達(dá)量設(shè)為1。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析? 采用SPSS Statistic19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用（x±s）表示，組間比較用t檢驗，相關(guān)性分析用？字2檢驗。以α=0.05作為檢驗標(biāo)準(zhǔn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.001表示統(tǒng)計學(xué)意義顯著。

2結(jié)果

2.1 miR-187在宮頸癌組織與正常組織中的表達(dá)情況? 用實(shí)時熒光定量PCR檢測78例宮頸癌組織與60例正常組織中miR-187的相對表達(dá)量，結(jié)果表明，癌組織中miR-187的表達(dá)量（0.688±0.489）低于正常宮頸組織（1.301±1.023），統(tǒng)計學(xué)意義顯著（P<0.001），見圖1。

2.2 miR-187的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系? 熒光定量PCR檢測結(jié)果得出，miR-187在宮頸癌組織中的表達(dá)量平均為0.688，以此把78例宮頸癌組織樣本分為高表達(dá)組與低表達(dá)組。通過分析miR-187的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系，表明miR-187的表達(dá)與宮頸癌患者的癌組織分化程度（P=0.002）、臨床分期（P=0.025）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P<0.001）有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而與患者的年齡（P=0.819）、腫塊類型（P=0.485）、腫塊大?。≒=0.241）和組織學(xué)類型（P=0.259）無關(guān)，見表1。

3討論

越來越多的證據(jù)表明，很多miRNA是宮頸癌診斷和治療的重要靶點(diǎn)[9]。miR-187是近年來研究較多的一種miRNA，比如在腎癌、肝細(xì)胞癌和結(jié)直腸癌等中都有了深入的研究[6，10，11]。在本文研究中，我們發(fā)現(xiàn)miR-187在宮頸癌組織中的表達(dá)顯著低于正常宮頸組織，說明miR-187可能是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的腫瘤抑制因子。Fei D[9]等通過檢測miR-187在骨肉瘤的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：骨肉瘤組織中miR-187的表達(dá)量顯著低于相應(yīng)的癌旁組織，同時骨肉瘤細(xì)胞株中的表達(dá)也低于正常骨細(xì)胞株。在結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌中的研究中也發(fā)現(xiàn)miR-187在癌組織中的表達(dá)均低于正常組織[6，11]。本研究還發(fā)現(xiàn)，miR-187在宮頸癌組織中的表達(dá)與患者的癌組織分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，而與其他臨床病理特征無關(guān)。Fei D[9]等在骨肉瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，miR-187在骨肉瘤組織中的表達(dá)與患者的TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。這與我們在宮頸癌中的研究結(jié)果相似。這可能意味著miR-187也許能抑制癌細(xì)胞發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移，進(jìn)而其表達(dá)下降會導(dǎo)致腫瘤的不良預(yù)后。Han X等[11]研究也發(fā)現(xiàn)miR-187在肝細(xì)胞癌組織及癌細(xì)胞株中的表達(dá)顯著低于正常肝組織，該研究發(fā)現(xiàn)miR-187能通過直接作用胰島素樣生長因子1受體（IGF-1R）而抑制肝癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲。這些研究都表明miR-187能抑制相應(yīng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，這和我們的研究結(jié)果相吻合。

近年來，研究者對miR-187是通過何種機(jī)制影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展也進(jìn)行了探索。研究發(fā)現(xiàn)，MiR-187通過靶向作用BCL6基因可以誘導(dǎo)彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的凋亡;且miR-187通過作用雄激素調(diào)節(jié)基因ALDH1A3可以影響前列腺腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為[12，13]。同時miR-187還通過作用絲裂原活化蛋白激酶12（MAPK12）和E盒結(jié)合鋅指蛋白2（ZEB2）抑制骨肉瘤的發(fā)展[9，14]?，F(xiàn)階段宮頸篩查及疫苗的應(yīng)用對宮頸癌的預(yù)防起了一定作用，但宮頸癌的發(fā)病率仍然居高不下，其發(fā)展的具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究[2]。研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與許多基因表達(dá)相關(guān)，比如高危型HPV感染細(xì)胞后通過促進(jìn)其高表達(dá)E6與E7蛋白，后者再通過調(diào)節(jié)p53及pRb的表達(dá)及介導(dǎo)mTOR信號傳導(dǎo)等途徑促進(jìn)宮頸癌及其他腫瘤的發(fā)生發(fā)展[15，16];Her2的過表達(dá)與宮頸癌的發(fā)展也有一定關(guān)系等[17]。

綜上所述，miR-187的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展之間存在顯著相關(guān)性，但是為何在癌組織中miR-187的表達(dá)降低以及其降低后產(chǎn)生的效應(yīng)是什么？其分子機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wentzensen N，Schiffman M.Accelerating cervical cancer control and prevention[J].Lancet Public Health，2018（3）：e6-e7.

[2]Li Y，Xu C.Human Papillomavirus-Related Cancers[J].Adv Exp Med Biol，2017（1018）：23-34.

[3]Van Ostade X，Dom M，Tjalma W，et al.Candidate biomarkers in the cervical vaginal fluid for the（self-）diagnosis of cervical precancer[J].Arch Gynecol Obstet，2018，297（2）：295-311.

[4]Satapathy S，Batra J，Jeet V，et al.MicroRNAs in HPV associated cancers：small players with big consequences[J].Expert Rev Mol Diagn，2017，17（7）：711-722.

[5]Bertoli G，Cava C，Castiglioni I.MicroRNAs：New Biomarkers for Diagnosis，Prognosis，Therapy Prediction and Therapeutic Tools for Breast Cancer[J].Theranostics，2015，5（10）：1122-1143.

[6]Huang QB，Ma X，Zhang X，et al.Down-Regulated miR-30a in Clear Cell Renal Cell Carcinoma Correlated with Tumor Hematogenous Metastasis by Targeting Angiogenesis-Specific DLL4[J].PLoS One，2013，8（6）：e67294.

[7]Ma X，Shen D，Li H，et al.MicroRNA-185 inhibits cell proliferation and induces cell apoptosis by targeting? VEGFA directly in von Hippel-Lindau-inactivated clear cell renal cell carcinoma[J].Urol Oncol，2015，33（4）：161-169.

[8]Zhao S，Yao D，Chen J，et al.Circulating miRNA-20a and miRNA-203 for screening lymph node metastasis in early stage cervical cancer[J].Genet Test Mol Biomarkers，2013，17（8）：631-636.

[9]Fei D，Zhao K，Yuan H，et al.MicroRNA-187 exerts tumor-suppressing functions in osteosarcoma by targeting ZEB2[J].Am J Cancer Res，2016，6（12）：2859-2868.

[10]Wang ZS，Zhong M，Bian YH，et al.MicroRNA-187 inhibits tumor growth and invasion by directly targeting CD276 in colorectal cancer[J].Oncotarget，2016，7（28）：44266-44276.

[11]Han X，Wang X，Zhao B，et al.MicroRNA-187 inhibits tumor growth and metastasis via targeting of IGF-1R in hepatocellular carcinoma[J].Mol Med Rep，2017，16（2）：2241-2246.

[12]Huang F，Jin Y，Wei Y.MicroRNA-187 induces diffuse large B-cell lymphoma cell apoptosis via targeting BCL6[J].Oncol Lett，2016，11（4）：2845-2850.

[13]Casanova-Salas I，Masia E，Arminan A，et al.MiR-187 Targets the Androgen-Regulated Gene ALDH1A3 in Prostate Cancer[J].PLoS One，2015，10（5）：e125576.

[14]Cui C，Shi X.miR-187 inhibits tumor growth and invasion by directly targeting MAPK12 in osteosarcoma[J].Exp Ther Med，2017，14（2）：1045-1050.

[15]Gupta S，Kumar P，Das BC.HPV：Molecular pathways and targets[J].Curr Probl Cancer，2018，42（2）：161-174.

[16]Hoppe-Seyler K，Bossler F，Braun JA，et al.The HPV E6/E7 Oncogenes：Key Factors for Viral Carcinogenesis and Therapeutic Targets[J].Trends Microbiol，2018，26（2）：158-168.

[17]Oh DY，Kim S，Choi YL，et al.HER2 as a novel therapeutic target for cervical cancer[J].Oncotarget，2015，6（34）：36219-36230.

收稿日期：2018-4-27;修回日期：2018-5-13

編輯/楊倩