XN-2000全血細(xì)胞分析儀對(duì)低值血小板檢測(cè)的分析探討

程樹強(qiáng) 李立 向靜

由于各類血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板(PLT)計(jì)數(shù)的原理不同，對(duì)PLT計(jì)數(shù)的抗干擾能力也不同。XN-2000血細(xì)胞分析儀有PLT-I和PLT-F兩種模式進(jìn)行PLT檢測(cè)，前者采用電阻抗法，后者使用核酸特異性熒光染色法。本研究對(duì)其兩種模式與手工法比較并結(jié)合血涂片鏡檢及直方圖和散點(diǎn)圖特點(diǎn)，對(duì)其干擾因素進(jìn)行了分析，為制定合理的低值PLT復(fù)檢規(guī)則提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料來源 隨機(jī)抽取XN-2000 PLT-I模式檢測(cè)的PLT＜80×109/L的我院門診及住院患者264例。

1.2 儀器與材料 OLYPUS BX51顯微鏡、改良牛鮑氏計(jì)數(shù)板；XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套試劑、質(zhì)控品、瑞氏染液、血小板手工計(jì)數(shù)稀釋液(其配置方法參照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第4版[1])。

1.3 方法 在儀器質(zhì)控合格的條件下，依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室對(duì)PLT＜80×109/L的樣本進(jìn)行復(fù)檢的要求，隨機(jī)選取PLT-I模式測(cè)定的PLT＜80×109/L樣本264例，記錄其MCV、儀器報(bào)警信息及血小板直方圖和WBC散點(diǎn)圖情況，并分別采用PLT-F法、手工法計(jì)數(shù)，每份標(biāo)本均制備血涂片，使用瑞氏染色，鏡下觀察血小板形態(tài)和分布情況以及紅細(xì)胞形態(tài)。

根據(jù)鏡檢情況將樣本分為大PLT組、血小板聚集組和非聚集組，其判斷的依據(jù)參考我國(guó)血液學(xué)專家小組提出的12條血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)顯微鏡復(fù)檢陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)[2]。按照國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦使用MCV來判斷RBC大小的建議[3]，將非聚集組分為MCV＞80 fL、70 fL＜MCV＜80 fL和MCV＜70 fL三組，每組的PLT-I和PLT-F法分別與手工法進(jìn)行相關(guān)性分析。

以鏡下觀察到PLT聚集為真聚集，計(jì)算PLT-I和PLT-F法的儀器聚集報(bào)警的真陽(yáng)性率、假陽(yáng)性率、假陰性率

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22軟件進(jìn)行相關(guān)性評(píng)估，以相關(guān)系數(shù)(r)表示，當(dāng)r≥0.8表示兩變量間高度相關(guān)，0.8＞r≥0.5表示中度相關(guān)，0.5＞r≥0.3表示低度相關(guān)，r＜0.3表示基本不相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 XN-2000 PLT-I和PLT-F法PLT聚集報(bào)警的結(jié)果比較 PLT-F法的真陽(yáng)性率、假陽(yáng)性率及假陰性率明顯優(yōu)于PLT-I法(表1)。

表1 XN-2000 PLT-I和PLT-F法PLT聚集報(bào)警的結(jié)果比較

2.2 四組與手工法進(jìn)行相關(guān)性分析結(jié)果比較MCV＜70 fL時(shí)，與手工法比較PLT-I法基本不相關(guān)，而與PLT-F法高度相關(guān)；其余三組均高度相關(guān)(表2)。

2.3 WBC散點(diǎn)圖和血小板直方圖情況分析 當(dāng)PLT聚集時(shí)直方圖尾部呈鋸齒狀改變但不具有特異性，WNR通道散點(diǎn)圖右下角出現(xiàn)大量散點(diǎn)并沿直方圖Y軸方向分布并且其FSCW-FSC散點(diǎn)圖的散點(diǎn)也較分散；大PLT時(shí)，直方圖呈多數(shù)拱橋樣子、WNR通道散點(diǎn)圖下方出現(xiàn)大量散點(diǎn)并沿直方圖X軸上斜分布；當(dāng)MCV＜80 fL時(shí)大部分直方圖曲線尾部抬高與橫坐標(biāo)平行，如伴有紅細(xì)胞碎片干擾直方圖呈陡坡樣上升；MCV＞80 fL時(shí)大部分直方圖形態(tài)正常。

3 討論

PLT檢測(cè)的準(zhǔn)確與否對(duì)于血液系統(tǒng)疾病、出血性疾病、手術(shù)前準(zhǔn)備有重要意義[4]。臨床應(yīng)用中采用PLT-I法檢測(cè)PLT的儀器較多，其干擾因素較多，易造成誤診。本研究在鏡下發(fā)現(xiàn)10例樣本聚集，在更換枸櫞酸鈉抗凝劑之后檢測(cè)結(jié)果均在正常范圍之內(nèi)，證實(shí)可能是由EDTA-K2引起的聚集，其原因跟血小板表面的某種隱匿性抗原有關(guān)[5]。EDTA-K2可使血小板活化，改變血小板膜表面某種抗原構(gòu)象，與存在血漿中的自身抗體結(jié)合，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)[6-7]；研究還發(fā)現(xiàn)，儀器PLT聚集的報(bào)警中，PLT-I法真陽(yáng)性率為8.6%，假陽(yáng)性率91.4%，假陰性率50.0%，而PLT-F法報(bào)警真陽(yáng)性為100%，假陽(yáng)性率為0，假陰性率為0，提示PLI-F法的PLT聚集報(bào)警的準(zhǔn)確率高于PLI-I法，但由于聚集樣本不易收集，標(biāo)本量較少，需進(jìn)一步研究證實(shí)，但仍可提示當(dāng)PLT-I模式出現(xiàn)聚集報(bào)警時(shí)，可采用PLT-F模式復(fù)檢，以降低涂片鏡檢率。

非聚集組中當(dāng)MCV＜70 fL時(shí)，PLT-I法和PLT-F法與手工法的r值分別為0.244和0.988，表明當(dāng)MCV＜70 fL時(shí)小RBC會(huì)對(duì)PLT-I法產(chǎn)生干擾，與蒼忠齊等[8]、盧其明[9]、葉長(zhǎng)欽等[10]報(bào)道的MCV越小，對(duì)血小板計(jì)數(shù)的干擾越大，血小板計(jì)數(shù)假性增高就會(huì)越多相一致。其原因是PLT-I法易受到紅細(xì)胞異常形態(tài)的干擾 ，而PLT-F法是通過對(duì)細(xì)胞內(nèi)含核酸成分的細(xì)胞器與熒光染料惡嗪結(jié)合來檢測(cè)，由于紅細(xì)胞碎片不存在細(xì)胞器，血小板的熒光強(qiáng)度與紅細(xì)胞碎片存在較大的差別，故可以減少其干擾[11]。因此可提示當(dāng)MCV＜70 fL時(shí)，在排除PLT聚集的前提下，可用PLT-F法進(jìn)行復(fù)檢。當(dāng)70 fL＜MCV＜80 fL時(shí)，PLT-I法和PLT-F法的r值為均大于0.95，表明小RBC的干擾均較小，其原因可能由于PLT-I法采用了浮動(dòng)界標(biāo)和擬合曲線技術(shù)減少其干擾有關(guān)。當(dāng)MCV＞80 fL時(shí)，PLT-I法和PLT-F法的r值為0.866和0.896，均小于70 fL＜MCV＜80 fL組，其原因可能是后者樣本量少于前者有關(guān)。

本研究還發(fā)現(xiàn)當(dāng)PLT聚集時(shí)直方圖尾部呈鋸齒狀改變但不具有特異性，WNR通道散點(diǎn)圖右下角出現(xiàn)大量散點(diǎn)并沿直方圖Y軸方向分布；大PLT時(shí)，直方圖呈多數(shù)拱橋樣子、WNR通道散點(diǎn)圖下方出現(xiàn)大量散點(diǎn)并沿直方圖X軸上斜分布；當(dāng)MCV＜80 fL時(shí)大部分直方圖曲線尾部抬高與橫坐標(biāo)平行，如伴有紅細(xì)胞碎片干擾直方圖可呈陡坡樣上升。因此我們可結(jié)合直方圖和散點(diǎn)圖特點(diǎn)來大致判斷是聚集還是其他干擾。如聚集直接涂片鏡下證實(shí)，如其他干擾可采用PLT-F法復(fù)檢。

綜上所述，因PLT-F法采用了惡嗪作熒光染料而造成成本較高，通常首選成本低廉的PLT-I法篩查，對(duì)低值PLT的復(fù)檢應(yīng)注意觀察直方圖和散點(diǎn)圖特點(diǎn)以及儀器報(bào)警及MCV值，采用特異性高的PLT-F法結(jié)合人工鏡檢復(fù)檢，降低鏡檢率，提高工作效率。