飼料產(chǎn)品中轉基因成分的分析及問題研究

王春華

摘要：隨著農業(yè)科技的不斷發(fā)展，轉基因飼料也在漸進性地發(fā)展與普及。近年來有關轉基因產(chǎn)品的探討越來越重視，因此我們有必要對飼料產(chǎn)品中轉基因成分及問題進行研究分析。

關鍵詞：飼料產(chǎn)品：轉基因;分析;問題

1 當前轉基因產(chǎn)品的標志管理現(xiàn)狀

每個國家對于飼料轉基因成分有著不同的規(guī)定及管理，其中主要包含自愿標識以及強制性標識兩個種類。在1997年，歐盟首先實施了轉基因產(chǎn)品的標識制度，之后在50多個國家和地區(qū)中先后頒布了標識制度。除了美國、加拿大以及阿根廷等國家以外，很多國家都應用了強制性標識的制度，其閾值范圍從歐盟0.9%直到日本的5%。我國于2002年發(fā)表了對于轉基因生物進行管理的辦法，第一批被列入到標志管理的目錄有大豆類產(chǎn)品，如種子、油和豆粉等：玉米類產(chǎn)品如玉米粉和油等;還有油菜籽、棉花類產(chǎn)品等。面對眾多的轉基因產(chǎn)品，行之有效的檢測方式以及精準的定量描述是轉基因標志制度的基礎。因為對其進行測定方式的依據(jù)存在不同的基準物質，并且飼料加工會包含很多的轉基因作物等，對轉基因成分含量進行檢測和相應的表示方式會存在一定的差異，即使是相同的數(shù)值也很有可能表示不同的含義，因此直接給出相應標志的工作存在一定的困難。

2飼料中轉基因成分的定性檢測方法

2.1生物分析法

生物分析法為利用轉入目的基因進行表達的特殊性狀，對轉基因產(chǎn)品進行鑒定的一種方法。例如：含有β-胡蘿卜素的轉基因水稻、甜度高但是糖份含量低的玉米。利用這樣的形式，可以有效實現(xiàn)對原料進行第一步篩選，但因為很多轉基因當中表達出的特殊性，如抗病蟲害等在作物生長中的體現(xiàn)，不能用在實驗室的檢測當中。

2.2 DNA檢測法

2.2.1核酸的提取純化。對核酸進行提取的目的是為后續(xù)提供合理的DNA分析。DNA的質量涵蓋對DNA分子平均長度、化學純度以及DNA序列、雙螺旋完全性的提取等。在對DNA進行提取的過程中，要對能夠抑制PCR反應蛋白質、纖維素等進行棄除。依照GB/T19495.3-2004可以得出，對不同DNA進行提純的方式.可以應用在不同的樣品中。當前，可以提取在飼料當中進行應用的轉基因成分的核算，有很多種方式，其中有三氯甲烷法、聚乙烯吡咯烷酮法、硅土法及胍-三氯甲烷法、CTAB法。并且對于這幾種方式的應用，已經(jīng)在對飼料樣品的檢驗中取得了成功。在這幾種方法中，對于CTAB的應用，更多的應用在了對飼料樣品的DNA提取中，并且成功應用在了提取玉米、菜籽粕以及大豆蛋白的DNA中。但是，為了能夠更好的保障提取的DNA質量，對各個樣品進行提取的具體方式，要依照不同作物的成分特征，結合DNA的具體提取原理和以往的經(jīng)驗對其進行合理的改進，并將各種方式進行比較和對比，挑選出最佳的提取方法。例如：如果提取的樣品含有很高的鹽分，可用清水清洗幾遍：魚骨粉等要先將雜質去除，之后在應用CTAB法對樣品進行制備。

2.2.2定性PCR法。該項方式的原理為，利用篩選樣品目標的核算序列以及定性分析異性檢測，在對照合理以及檢測下限合適的狀況下，實施定性檢測的結果要對樣品是否為轉基因產(chǎn)品進行明確的判斷。此種檢測方式包括擴增目標序列、檢測及擴增片段特異性的確證。這種檢測的方式具有極強的靈敏性，并且簡便快速，是對GMF進行檢測的最佳方式，但該項方式的應用容易產(chǎn)生假陽性的結果。所以，一般需要通過其它的方式進行驗證，如應用PCR的產(chǎn)物與PCR凝膠回收的產(chǎn)物，利用凝膠電池實施檢測。借助對限制性內切酶切的具體分析，以及序列和雜交的分析等方式實施確認。在應用實時熒光PCR的方式實施檢測的過程中，要對擴增和檢測一同進行。

使用以及存在的問題有：利用PCR法定性來檢測飼料當中的轉基因成分是當前應用最廣泛的鑒定形式，并且該種方式在對轉基因大豆、小麥和玉米的檢測研究中獲得了非常大的成功。我國分別制定了NY/T675-2003《轉基因植物及其產(chǎn)品檢測大豆定性PCR方法》標準，可應用在轉基因抗草甘膦大豆以及相關的產(chǎn)品中、轉基因抗草丁膦大豆和相關的產(chǎn)品等，涵蓋大豆的種子、豆粕和大豆粉等相關制品的轉基因成分定性PCR的具體檢測：SN/T 1196-2003《玉米種轉基因成分定性PCR檢測方法》標準，可應用在對玉米MON810、Bt11、Event176、T14/T25、CBH351、GA21品系對其轉基因成分的相應檢測：SN/T 1943-2007《小麥中轉基因成分PCR和實時熒光PCR定性檢測方法》標準，可以應用在小麥中轉基因成分PCP的定性檢測以及實時熒光PCR的定性檢測中。對于飼料而言，轉基因成分當中的外源基因通常包括三個關鍵的構成部分：調控、目的和標記基因。在這三個關鍵的構成部分中，調控基因包含啟動子以及終止子等。根據(jù)選擇用作模版不同的外源基因，PCR定性檢測實驗可分為不同的兩類。如果應用靶序列擴增的基因（包括啟動子和外源基因）該實驗會具有良好的專一性。如果應用的DNA序列在植物當中存在較多的序列，如35S啟動子等，則該實驗并不具有專一性，該項擴增可以檢測不同類的多種轉基因飼料，檢測的最終結果可能會出現(xiàn)假陰性或者假陽性，所以需要應用其它的方式驗證。

當前，對于該項檢測方式的應用雖然比較廣泛，但是還存在一些問題。首先，對于該種方式需要應用的試劑和設備等需要支付高額的費用，檢測的方式非常繁雜，會消耗大量的時間和精力，需要很高的操作要求等。其次，該項方式在一定程度上會出現(xiàn)假陽性以及假陰性的結果。所以，對于多個基因成分進行檢測時需要對轉基因成分進行單獨鑒定，其工作量會非常大。

3飼料中轉基因成分的定量檢測方法

應用熒光定量PCR法。對于該項檢測方式的應用，可對PCR的過程進行實時監(jiān)測，以便得到定量以及定性的結果，可在閉管的環(huán)境下操作，整個檢測過程只需要很短的時間，操作非常方便，比較容易進行推廣。所以，在實際的檢測中，該項檢測方式成為了重要的檢測技術。

該項技術的應用原理為：在定量檢測PCR的體系反應中，除了對特異的引物進行應用以外，還提升了與模版DNA匹配、兩端含有熒光基團標志的探針。PCR酶在經(jīng)歷了一次循環(huán)之后，會構成全新的鏈數(shù)，并與釋放出來的熒光基團數(shù)呈現(xiàn)出彼此對應的關系。當熒光信號的實際強度大于規(guī)定的閾值時，便會檢測出熒光信號，這時的PCR循環(huán)數(shù)為ct值。

4結語

由于轉基因技術的高度發(fā)展，其數(shù)量和種類正在逐步提升。當今的飼料產(chǎn)品中包含了大量的轉基因產(chǎn)品，為了對其危害性進行進一步控制，要對飼料實施定性以及定量分析，找出存在的問題，對飼料進行嚴格管理。

參考文獻（略）